组织分离技术改进二则

用组织分离法制作食用菌母种,在分离操作过程中,常因杂菌(特别是细菌)污染而导致斜面试管报废。我们作了如下两个方面的改进,可使斜面培养基的利用率和分离成功率有所提高。     

菇耳组织分离的技术改进

试管组织分离常常由于细菌、酵母菌污染导致失败,既耽误了时间又浪费了培养基,实是遗憾。现将此法操作略作改进,可达到分离成功的目的。(一)试管组织分离培养法:子实体选取、消毒、培养基制作均同常规,只是在接种时,使试管培养基的斜面朝下,将组织块放于试管棉塞前的内壁上,塞好棉塞后竖立试管让组织块沿壁下滑达管的底部并接触培养基。注意组织块下滑时不能接触到培养基,这样即使组织块带菌也不至于污染整个培养基斜面。接种后将试管立放或斜放,斜放程度不得低于培养基在     

食用菌杂菌防治法

在食用菌栽培过程中,杂菌污染是造成减产甚至失败的主要原因,如何将杂菌污染的损失降至最低,现总结如下(以黑木耳为例),以供读者参考。1试管母种(斜面培养基)在菌种分离或继代扩繁时,由于种种原因,造成培养基受杂菌污染,早期发现可采取如下处理。1.1种接前发现细菌污染早期表现在斜面培养基周围的乳白色糊状物。不论面积大小,应立即淘汰被污染试管,之后将剩余     

马铃薯脱毒试管苗污染控制效果研究

通过在MS培养基中加入抗生素和杀菌剂进行逐步筛选,解决马铃薯脱毒试管苗快繁过程中的污染问题.结果表明:防止马铃薯脱毒试管苗污染的最佳抑茵剂组合MS+ 50 mg/L硫酸庆大霉素+50 mg/L氨苄青霉素+50 mg/L硫酸链霉素+0.4g/L多茵灵,该组合有效降低了马铃薯脱毒苗细菌和真菌污染,提高了快繁效率.     

黑木耳组织分离的新消毒法

多年来,在黑木耳的组织分离中通常采用酒精及升汞水溶液消毒.由于消毒效果不理想,杂菌污染严重.在反复试验的基础上,我们探索了一种加青霉索、链霉素的新消毒方法,取得了良好效果.(一)配制药液取一支80万单位的医用针剂青霉素及一支100万单位的医用针剂链霉素,溶于5毫升的无菌水中搅匀备用.(二)试验处理设3个处理,每处理为一组,每组为10支装有PDA培养基的试管,灭菌后在未摆斜面前,将配制好的青、链霉素水溶液分别加入三组试管中:a组每支试管注入0.2ml;b组每支试管注入0.4ml;c组每支试管注入0.6ml.     

污染食用菌母种的纯化

1.细菌污染提纯法: (1)材料:含量为4万单位/1毫升的庆大霉素一支;经高压灭菌的PDA斜面培养基10支(试管规格18×180毫米);高压灭菌的1毫升注射器一支;6号针头一个。 (2)方法:在无菌箱(室)内,把4万单位/1毫升的庆大霉素液用砂轮割开,用无菌注射器分别注入10支冷却至45℃左右的斜面试管培养基中,摇动培养基使之充分混匀,立即摆成斜面。然后把被细菌污染的菌种以无菌操作移入该斜面培养基中,置25℃下培养。2次即可把细菌甩掉,效果甚佳,对食用菌菌丝无抑制作用。 2.霉菌污染提纯法: (1)试管棉塞受潮污染了霉菌,大都出现在斜面前端,可在酒精灯火焰上连同培养基一块灼     

食用菌分离母种脱毒技巧

通常情况下母种带杂菌,往往采取多次提取母种方法进行母种分离纯化。但在特殊情况下(只有一块组织或取野生菌种由于季节的原因时间上又不允许),需要在带菌情况下进行脱毒,笔者尝试在母种试管用小米母种培养基进行分离。其脱毒原理是细菌在小米母种培养基中生长.扩展速度很慢,而食用菌菌丝的生长速度较快,试管底部的菌丝不带细菌,从试管底部取出的菌丝就是无杂菌的纯菌丝。     

食用菌斜面菌种的纯化

食用菌斜面菌种在分离、培养过程中,有时会受到杂菌的污染。因此,要及时进行纯化培养。下面介绍几种简易的纯化方法。利用寄主组织或子实体进行组织分离,在分离培养基内加入链霉素(30单位/毫升)可抑制细菌生长;加入灰黄霉素(20单位/毫升)、制霉素(30单位/毫升)可抑制真菌生长。斜面受到细菌污染,可酌情采用下列方     

简易扩繁生产用母种的尝试

食用菌母种的扩繁一般是利用马铃薯、琼脂培养基,或其加富培养基,装在试管中,高压灭菌,无菌接种,生产比较繁锁,高温易感染,特别是在扩繁草菇种时很容易引起细菌及酵母感染.     

PDA中加入抗菌素的抗菌作用试验

通过在PDA培养基中加入青霉素、链霉素的抗菌试验表明,PDA培养基中添加质量浓度为50μg／mL或100μg／mL的青霉素钠或硫酸链霉素或青霉素钠＋硫酸链霉素后,培养基的抗杂菌能力增强,特别是抗细菌能力增强,并对菌丝的生长无明显抑制作用。     

试管棉塞改换聚丙烯塑料布包扎好

历来试管斜面培养基都是用棉塞封口,但棉塞易吸潮,夏季气温高时培养菌种容易污染杂菌,特别是培养好的菌种放入冰箱内保藏时,时间一长,棉塞上便滋生杂菌。为此,我们试将棉塞封口改成聚丙烯塑料布包扎封口。结果,这种方法,很成功。一,塑料不吸潮;二,塑料无营养,不生杂菌;三,塑料保温性能好,培养基水分不易散失,从而提高了试管菌种生产成活率,并延长了保存时间。     

自制琼脂培养基分装器

琼脂培养基分装试管时,通常都是在琼脂溶化以后,用漏斗或注射器分装试管。这种方法缺点是:培养基长期在火焰上加热,前后分装的水分不一致。本人从事食用菌多年,一直没有找到分装试管的好办法。目前,采用改进的方法分装试管,收到良好的效果。每小时分装5 0 0支试管,试管口不需重     

食用菌试管母种培养基分装器

食用菌试管母种培养基的分装,是一项紧张而细致的工作。在冬季,琼脂培养基很快会凝固,给分装试管带来不便。为使这项工作快捷、准确进行,笔者利用暖水瓶研制了一种“试管母种培养基分装     

猴头菇母种培养基调酸技术

猴头菇菌丝适宜在酸性环境下生长,一般要求pH值在4.5～6.5,而培养基中的琼脂在pH值过低时易被水解难凝固,尤其培养基高压灭菌后.pH值会下降。因而在调节猴头菇母种培养基酸度时,操作手续较复杂、费时。对此,笔者进行了本项研究,现简报如下: (一)试验材料 猴头菇为常山99(引自浙江微生物研究所),琼脂,醋酸,氢氧化钠,柠檬酸,母种培养基为PDA。 (二)试验方法 采用三组不同的调酸处理和一个空白对照。A.将制好的PDA培养基分装于试管和用柠檬酸调好pH值为5.0的酸性水溶液于试管中,高压灭菌后在无菌条件下海支试管滴少许配制好的柠檬酸酸性水溶液混合凝固。B.前半部方法与A组同,灭菌     

野生食用菌户外组分专用培养基的研制

组织分离技术是食用菌获得种源的常用方法,但在操作中经常受细菌及霉菌污染。除了在操作中严格遵循无菌操作原则外,在培养基中抗生素及抗霉素是防止细菌污染主要方法。本文在培养基中添加不同浓度抗生素(青霉素和链霉素)及抗霉素(多菌灵),测定抑菌抑霉有效浓度测定、抗菌有效时间、抗菌药物热稳定性、食用菌对抗霉药物灵敏性着手,探讨培养基中有效抗菌抑霉药物比例,为食用菌保存、储藏提供理论依据。实验结果表明:当抗生素浓度≥500单位·L-1时,对指示菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌可以完全抑制,抗生素的热稳定性差,含抗生素培养基在自然存放的30天内抗细菌能力无明显变化;当加入抑霉药物(多菌灵)体积分数为0.07%~0.10%时,对青霉﹑木霉、链孢霉抑菌能力显著,且此范围内对大部分食用菌菌落生长及灵敏性没有显著影响。对部分食用菌灵敏性在后期的观察过程中并未发现有霉菌的生长现象,因此加入抗生素及多菌灵的培养基可作为食用菌组织分离的专用培养使用。     

应用链霉素药敏片进行秀珍菇组织分离的研究

利用不同载药量链霉素药敏片进行秀珍菇组织分离试验。结果显示:秀珍菇组织分离的细菌污染率,高达82.14%,而以放置载药量为10μg/片和300μg/片链霉素药敏片作为抑制细菌污染的方法,则污染率分别降至46.43%和7.14%。结论是利用链霉素药敏片抑制细菌污染可有效提高秀珍菇组织分离成功率。     

PDA培养基中加入青霉素、链霉素的抗菌作用试验简报

通过在PDA培养基中加入青霉素、链霉素的抗菌试验表明,PDA培养基中添加浓度为50μg·mL^-1或100μg·mL^-1的青霉素钠或硫酸链霉素或青霉素钠＋硫酸链霉素后,培养基的抗杂菌能力增强,特别是抗细菌能力增强,并对菌丝的生长无明显抑制作用。     

防接种污染的简易方法

在比较简陋的条件下制种,经常会遇到母种的管壁或培养基表面感染杂菌.笔者通过多次试验,用酒精棉球擦拭试管内壁,其接种成功率在90％以上。具体做法是:在接种针上缠一条用酒精浸过的棉花,通过酒精灯将燃烧着的棉花送入试管内自行熄灭后,反复擦拭管壁(但要注意不可接触培养基),擦遍管壁后抽出管外即可。接种按常规法进行。此法特别是在接二级种时效果更好。因为接二级苗种,种块需更大一些,这样很易使种块碰着试管壁而造成污染,采用此法后即使     

什么叫母种、原种、栽培种?

答:食用菌菌种一般分母种、原种和栽培种。母种是直接从子实体(组织或孢子)、菇木(耳木)分离得到的菌种。培养基常采用营养丰富、较易吸收的马铃薯琼脂培养基(又称PDA培养基,其成份:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂18～20克,水1000毫升)。为了便于保藏、运输和防止杂菌污染,一般采用试管里培养,故又称“试管菌种”。原种是将培养好的母种接种到木屑、麦草等培养基中得到的菌种。一般一支母种可接原种3～5瓶。常用的培养基有木腐菌和草腐菌两种。木腐菌(如银耳、香菇、灵芝等)     

酒瓶代试管生产母种

在偏避山区的菇农,购买试管困难,而酒瓶几乎家家都有。为此,我们进行了酒瓶代试管生产母种试验,取得了较好效果。具体做法是:选无色透明酒瓶,洗净后沥干,将煮好的马铃薯琼脂培养基趁热分装于瓶中,每个容量为500ml 的酒瓶装培养基100ml(不要将培养基沾在瓶口上,以免污染),然后塞棉花,