萝卜中一种新dsRNA的全长cDNA克隆及序列分析

 从一点红萝卜品种（Raphanus sativus-root cv. Yidianhong）叶片中提取dsRNA,应用SPAT方法对各dsRNA条带进行cDNA克隆并测序,除获得先前报道的5条序列（RasR1-RasR5）以外,还得到一条新的全长序列,将其定名为RasR 6（EU285027）。序列分析结果表明：RasR 6全长为1 778 bp,其正义链编码1个由502个氨基酸组成、分子量约为55.1 kDa的蛋白质。该序列与前人报道的双分病毒科5个病毒序列具有相似性,且它们均编码双分病毒科病毒的外壳蛋白(CP,Capsid protein)。核苷酸序列比对结果显示：RasR 6与同时来源于萝卜的RasR 1和RasR 2的5'UTR序列高度同源,且其3'末端具有poly A结构,而与RasR 3、RasR 4和RasR 5的UTR则没有明显的相似性。因此,我们推测RasR 6与RasR 1、RasR 2同属于双分病毒RasV 1（Raphanus sativus virus 1）,它可能与RasR 2共同编码该病毒的CP或作为RasV 1的卫星RNA存在。     

潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及CP基因的表达

 从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒( Turnip m osaic virus, TuMV) 分离物(TuMV-Ra) , 通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白(CP) 基因, 对其进行了序列测定, 并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明, TuMV-Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.9% ～99.0% , CP氨基酸序列同源性为94.8%～99.7%; 其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高, 核苷酸序列的同源性为98.7%和99.0% , 氨基酸序列同源性为99.0%和99.7%。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝卜得到的分离物CHINA-WF CP基因核苷酸同源性为93.66% , 氨基酸同源性为96.53% , 说明病毒发生了比较大的变异, 而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-Ra CP基因克隆到原核表达载体pET-22b ( + ) , 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中表达出分子量为38 kD的融合蛋白。Western blotting分析证明TuMV-Ra CP在大肠杆菌中得到了正确表达。     

不同萝卜品种对TuMV抗性的苗期鉴定

芜菁花叶病毒(TuMV)是十字花科蔬菜病毒病最重要的毒源之一，为RNA病毒，属马铃薯Y病毒组的一个成员，广泛分布在世界各地，它可引起十字花科作物严重的花叶和畸形。从李德保[1]、韩素中[2]等人的研究可以发现，危害萝卜的病毒主要是TuMV。关于萝卜病毒病抗性鉴定方面，国内外研究颇多，日本人曾根据16个萝卜品种田间发病率高低将萝卜分成抗病性强、中、弱三个类群[3]，但未有明确的划分。筛选优良的抗源     

施碘对萝卜芽生长及其营养品质的影响

 以萝卜芽为材料，研究了不同方式加碘溶液培养时碘元素的效应。结果表明，浓度为0.5～1.5 mg/L的碘抑制萝卜芽根系生长，但增加萝卜芽可食部分维生素C含量、游离氨基酸总量和纤维素含量。当碘浓度超过1.5 mg/L时，其促进作用减弱甚至出现高碘毒害。萝卜芽可食部分含碘量随培养液碘浓度增加而大幅度上升，并且品种间及加碘方式间差异显著。     

侵染番茄的黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯S病毒CP基因克隆及序列分析

以山西省晋中地区表现褪绿黄化、卷曲、叶脉变黑症状的番茄植株叶片为试材,采用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)技术和非序列依赖PCR扩增(Sequence-independent amplification,SIA)方法,对侵染番茄病样的病毒病原进行检测,以期为山西省番茄病毒病的防治提供参考依据。结果表明:该病样由黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)和马铃薯S病毒(PVS)3种病毒复合侵染,将其分别命名为CMV-SXFQ、TMV-FQ和PVS-SXFQ。为明确CMV-SXFQ、TMV-FQ和PVS-SXFQ的分类地位,进一步克隆到了这3个病毒的CP基因序列并进行相似性比较,发现CMV-SXFQ与CMV各亚组代表株系相似性为74.9%~98.8%,氨基酸序列的相似性为82.5%~99.5%;TMVFQ与TMV代表株系相似性为74.4%~99.8%,氨基酸序列的相似性为83.6%~100.0%;PVS-SXFQ与PVS代表株系相似性为93.2%~99.3%,氨基酸序列的相似性为92.4%~100.0%;系统进化分析表明:CMV-SXFQ分离物与亚组ⅠB的CH、HLJ、XJ2、Am、As株系亲缘关系最近;TMV-FQ分离物与IM、Jimo、SXFQ株系亲缘关系最近;PVSSXFQ分离物与Cm、St株系亲缘关系最近。     

叶用萝卜营养品质分析及比较试验

采用国标GB/T 5009-2003方法测定了萝卜及小白菜叶片的VA、VB1、VB2、VB9、VC、VE,钙、镁、铁、磷、钾及氨基酸(18种)及L-莱菔素含量,并对叶用萝卜与小白菜进行栽培对照试验。试验结果表明,萝卜叶所含粗蛋白、矿质元素和氨基酸十分丰富,其中VC、VE含量分别均较小白菜高10%~80%,萝卜叶含有的L-莱菔素含量最高,为67.1 mg/kg,较萝卜根19.8 mg/kg高249%。3次重复试验结果表明,叶用萝卜在生育期25 d时产量较小白菜高104%~110%,为最佳产量,叶用萝卜50 g/10 m2的播种密度达到投入产出比的最佳值。     

基于ITS序列的胭脂萝卜亲缘关系分析

以胭脂萝卜为试材,采用PCR扩增其ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列,研究了序列同源性并构建系统发育树,以期为胭脂萝卜亲缘关系分析提供参考依据。结果表明:胭脂萝卜ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列总长度为655bp,ITS1(G+C)含量为51.4%,长度为220bp;5.8SrRNA(G+C)含量为53.4%,长度为217bp;ITS2(G+C)含量为55.1%,长度为218bp。胭脂萝卜与台北的Mei-Hwa、南京的Cd-03、台北的Mei-Nong、南京的Yanghua、杭州的Baiyuchun、渥太华的SW77的同源性最高(99%),归为同一种。由系统发育树可得20个样品的总平均遗传距离是0.134,结合形态学特征表明待测胭脂萝卜可能由白皮白心萝卜进化而来。     

不同生食萝卜品质指标的评价分析

以不同生食萝卜为供试材料,在分析表观形态指标的基础上,研究肉质根水分含量、脆度、可溶性固形物、粗纤维、异硫氰酸酯、维生素C、蛋白质、氨基酸成分及含量等品质指标,最后用模糊数学隶属函数法,依公式X(u)=(X-X_(min))/(X_(max)-X_(min))计算不同生食萝卜每个品质指标的隶属函数值,对其肉质根的品质指标进行综合评价,结果表明,心里美萝卜综合营养品质突出,沙窝萝卜、卫青、翘头青萝卜的综合营养品质居上。     

氮肥形态和施肥水平对樱桃萝卜产量及品质的影响

采用田间试验和化学分析相结合的方法研究酰胺态氮肥(以尿素为例)和铵态氮肥(以磷酸二铵为例)不同施肥水平对樱桃萝卜产量及品质的影响,从而确定樱桃萝卜的合理施肥形态及施肥量.结果表明:2种形态氮肥相比较,铵态氮肥的产量、氨基酸含量均较高,硝酸盐含量较低,维生素C含量相近.因此,樱桃萝卜高产优质的氮肥合理施肥形态及施肥量为磷酸二铵38.3 g/m2(合26 kg/667m2)左右较为适宜.     

菜薹与萝卜附加系回交后代外源萝卜染色体的FISH 检测

采用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH），以萝卜基因组特异序列pURsN 作探针，分别与19 份菜薹与萝卜附加系回交后代BC4A3d 进行杂交，检测回交后代中外源萝卜染色体的存在情况。结果显示：只有1 份材料BC4A3d-45 没有杂交信号，其他18 份材料均得到1 个杂交信号，表明除了BC4A3d-45 没有附加外源萝卜染色体之外，其余18 份材料均含有1 条外源萝卜染色体；该结果与分子标记鉴定结果一致。     

萝卜不育系和保持系几种同工酶分析

以萝卜细胞质雄性不育系和保持系为试材,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳方法对花期叶进行过氧化物酶同工酶、淀粉酶同工酶进行分析.结果表明:不育系和保持系的同工酶存在着谱带增减及强弱的差异.     

萝卜雄性不育性的几种特性研究

通过对萝卜（ＲａｐａｎｕｓｓａｔｉｖｕｓＬ．）２３４株雄性不育株的花器形态观察，将其分成３种类型：花冠退化型，雄蕊萎缩型，花粉败育型。花粉败育型中按柱头外露情形可观察到柱头外露，半外露及不外露３种状态。萝卜雄性不育系的四分体小孢子正常，花粉粒从小孢子形成以后开始退化。４０１Ａ、７７０１Ａ在小群体中的不育株率达１００％。通过３对雄性不育材料及其保持系的酯酶同功酶分析，不育系与保持系之间的区别主要表现在第５条和第６条酶带，酶带显色深浅及酶带数目有明显差异。不育系４０１Ａ与其保持系４０１Ｂ的叶绿体ＤＮＡ的限制性核酸内切酶ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ消化后的电泳图谱表明，不育系与保持系的ｃｔＤＮＡ之间存在差异。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法分析了不育系４０１Ａ、７７０１Ａ及其保持系的叶绿体类囊体膜多肚，表明第５及第１０条多肽存在差异。     

萝卜雄性不育系异质性初探

用常规萝卜材料迟花为父本，以遗传模式符合核质互作型的2个不育系日本大樱A、北京白A为母本进行测交，观察后代的育性表现。结果表明，同一父本对不同来源的2个不育系的育性保持能力有极大差异，这种差异是由母本的差异造成的，由此提出萝卡不育系异质性问题，提出了控制萝卡雄性不育的三点机理，并对萝卡不育系的异质性的意义进行了初步探讨。     

萝卜硫代葡萄糖苷的研究进展

硫代葡萄糖苷是一种广泛存在于十字花科植物中含硫和氮的次生代谢产物。萝卜中硫代葡萄糖苷含量较高且种类丰富,其中4-甲硫基-3-丁烯基硫苷(glucoraphasatin,GRH)含量最高。硫代葡萄糖苷经黑芥子酶降解可产生高生物活性的降解产物,如硫氰酸酯,异硫氰酸酯和腈等。上述硫代葡萄糖苷及其降解产物在植物病虫害防御、食品风味形成以及人体癌症治疗等方面均有重要作用。近年来,萝卜中硫代葡萄糖苷的生物合成途径及调控等方面的研究取得了较大进展。笔者综述了萝卜硫代葡萄糖苷的结构与种类、生物合成与降解以及影响因素等内容,旨在为萝卜硫苷的生物合成调控研究及其药食同源产品开发提供参考。     

湖州地区耐寒秋冬萝卜品种筛选试验

为了筛选适合湖州地区秋冬季露地种植的耐寒性萝卜品种,引进了圆白萝卜、满身红萝卜、YR扬州白玉春萝卜、大一点红萝卜4个萝卜品种,进行农艺性状、肉质根品质、产量及耐寒性的对比。结果表明:YR扬州白玉春萝卜的外观美观、水分充足、口感脆嫩、耐寒性强,667 m2产量最高(5 862 kg)且显著高于其他品种,综合表现最好,可以考虑作为秋冬萝卜的首选品种在湖州地区及气候类似地区推广种植。     

萝卜花药培养再生植株染色体倍数FCM分析及田间观察

采用流式细胞仪(FCM)对萝卜的20株花药培养再生植株进行倍性鉴定。结果显示:流式细胞仪清楚地显示了每份材料的DNA含量,其中单倍体、二倍体、四倍体、嵌合体的比例分别为20%、30%、25%、25%,并对照再生植株田间生长情况,从形态学角度验证了FCM分析的准确性。     

国内主要十字花科抗根肿病品种在湖北病区的表现

在湖北省宜昌市长阳县和利川市对25个抗根肿病的十字花科蔬菜品种进行了集中试验示范,其中大白菜品种19个、甘蓝品种3个、萝卜品种3个。结果表明:长阳根肿病菌的致病力较利川根肿病菌强,绝大多数参试大白菜品种不抗长阳根肿病菌但抗利川根肿病菌,仅京春CR2和京春CR3兼抗长阳根肿病菌和利川根肿病菌,综合经济性状表现优秀,京春CR2和京春CR3可以在长阳、利川及类似根肿病菌生理小种区域推广,其他单抗利川根肿病菌的大白菜品种可在利川及类似根肿病菌生理小种区域推广;萝卜品种雪单3号在长阳表现为耐病,在利川表现为抗病,综合经济性状良好;甘蓝品种2012070甘蓝在长阳表现为耐病,参试甘蓝品种均不抗利川根肿病菌。     

萝卜抗黑腐病、黑斑病和根肿病育种相关基础研究

利用萝卜黑腐病菌株在42份萝卜种质资源苗期喷雾接种筛选获得6份抗病材料，18份中抗材料；萝卜块离体接种黑腐病菌株从13份高代自交系中筛选获得2份中抗材料。利用萝卜黑斑病孢子悬浮液喷雾接种于离体叶片，从13份高代自交系中筛选获得1份抗病材料，6份中抗材料。利用已知的根肿病4号生理小种从13份高代自交系中筛选获得2份感病备选材料，4份抗病备选材料。