绿僵菌Mf2菌株对松材线虫的毒力测定

为探索绿僵菌Metarhigium anisopliae Mf2菌株对松材线虫的毒杀效果,从4种常见培养基PDA,PPDA,SDAY,SMAY中选择一种最适于绿僵菌Mf2菌株营养生长及产孢的培养基,测定该菌株对松材线虫的毒杀活性。结果表明,Mf2菌株在PPDA培养基中生长速度最快,14 d后菌落直径大于其他3种培养基,为76.00 mm;培养14 d后PPDA培养基中菌株产孢量最高,为5.667×1010个孢子,显著高于其他培养基上的产孢量,约为处于第2位的PDA培养基上产孢量的2.5倍;绿僵菌Mf2菌株具有较高杀线虫活性,处理36 h后校正死亡率为98.52%。绿僵菌Mf2菌株对松材线虫毒力测定表明具有很高的毒性,有良好的应用前景。     

4株绿僵菌的鉴定及对松褐天牛成虫致病效果比较

【目的】为筛选对松褐天牛毒力更高的微生物资源,开展生物防治通过培养性状、分生孢子形态及系统发育树鉴定4个绿僵菌菌株,比较测定各自对松褐天牛的毒力。【方法】对4株绿僵菌的培养性状和分生孢子形态特征进行描述,并对4株绿僵菌的EF-1α基因进行克隆和测序,构建系统进化发育树,综合鉴定4株绿僵菌的分类地位。测定了不同孢子浓度及接种方法(浸虫、浸枝和无纺布)对松褐天牛成虫的致病效果,构建4个菌株对松褐天牛的毒力方程。【结果】1)菌株WTKH和WP08鉴定为平沙绿僵菌;菌株LV2鉴定为金龟子绿僵菌;菌株qc1401鉴定为瘿绵蚜绿僵菌。2)平沙绿僵菌WP08菌株和金龟子绿僵菌LV2菌株对松褐天牛校正死亡率较高,瘿绵蚜绿僵菌qc1401菌株次之,平沙绿僵菌WTKH菌株最低。4个菌株对松褐天牛的致死速度依次为WP08LV2qc1401 WTKH,LT50分别为5. 52、10. 38、16. 93和20. 80天。3)以平沙绿僵菌WP08为供试菌株,在1. 0×108、1. 0×107、1. 0×106个·m L-1共3个浓度下,孢子浓度越高则松褐天牛校正死亡率越高、半数死亡时间越短,孢子浓度为1. 0×108、1. 0×107时,试验期内校正死亡率均达到100%;半数死亡时间LT50分别为11. 38、16. 44和24. 22天。4)以平沙绿僵菌WP08为供试菌株,3种接种方法 40天内松褐天牛死亡率均为100%,LT50浸虫法为5. 52天,浸枝法为11. 38天,无纺布法为17. 21天。【结论】4株绿僵菌均可侵染松褐天牛致其死亡,其中,平沙绿僵菌WP08的致死率和致死速度较快,为防治松褐天牛的优良菌株。     

5株绿僵菌对橙带蓝尺蛾幼虫致病力比较

橙带蓝尺蛾(Milionia basalis)是近年来严重危害罗汉松和竹柏的一种重要食叶害虫,为筛选出对该虫具有高致病力的优良菌株,对5株不同来源的金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)(MaFZ-13、MaFZ-16、MaQL-02、MaXJ-04、MaZPTR-01)在PDA培养基上的培养性状及其对橙带蓝尺蛾幼虫的致病力进行测定。结果表明:不同绿僵菌菌株菌落的生长速度、产孢量及其对橙带蓝尺蛾幼虫的致病力差异十分显著。菌株接种培养15 d,菌落直径最大的为MaZPTR-01菌株,达6.5 cm;其次为MaFZ-13菌株,达6.2 cm。产孢量最高的为MaFZ-13,达1.33×10~8孢子·cm~(-2),MaZPTR-01菌株次之,达1.28×10~8孢子·cm~(-2)。MaFZ-13、MaXJ-04菌株对橙带蓝尺蛾幼虫的致死率较高,15 d后分别达到96.7%、95.0%,其它菌株均低于90%;幼虫僵虫率分别为75%、71.7%;致死中时(LT_(50))也显著短于其它菌株,分别为5.01 d、5.48 d。绿僵菌MaFZ-13和MaXJ-04菌株不仅生长速度快、产孢量高,而且对橙带蓝尺蛾幼虫的致病力强,可作为优良菌株进一步开发利用。     

杨扇舟蛾幼虫高毒力绿僵菌菌株筛选研究

测定了21株绿僵菌的平板单菌落生长和产孢量情况,证明(Ma1,Ma42,Ma788,Ma789)4菌株产孢量高,通过对这4株绿僵菌菌株的不同温度水浴处理,发现了孢子的萌发条件;并开展了4菌株对杨扇舟蛾幼虫的毒力测定,筛选出Ma789菌株的致病力较强。     

白僵菌孢子粉工业化生产工艺技术研究

本文对利用载体进行砖式半固体开放培养法机械化生产白僵菌孢子粉和液体深层发酵的工艺中有关技术问题作了多方面试验研究,结果表明:1％麦皮+1.5％黄豆粉+0.5％玉米粉和1％麦皮+1.5％黄豆粉+1％玉米粉是理想液体培养基配方,平均产孢量分别达9.16亿/ml和8.51亿/ml,比土法生产常用5％麦皮浸出液提高1.65—1.85倍。筛选出C号半固体发酵培养基配方,平均产孢量达890.7亿/g,比常规土法生产提高7.91倍;选择出半固体发酵培养的理想载体R质粒;筛选出培养基、载体、接种量优化组合配比为1:3:6;载体平铺厚度以6cm为宜,其产孢量为125.7亿/cm~2,比4cm、2cm厚的分别提高0.86和3.1倍;不同菌龄菌液接种与固体发酵培养产孢量关系,以菌丝状态接种(含孢量806.2亿/g)比节孢子状态接种(含孢量573.1亿/g)提高41％;半固体发酵以13—15天为宜。     

球孢白僵菌和金龟子绿僵菌对红火蚁工蚁的致病力测定

为了评价白僵菌和绿僵菌对红火蚁的致病力,寻找其生物防治菌株资源,采用浸液法测定了11株球孢白僵菌(Beauveria bassiana Balsamo)和9株金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae Metschnikoff)菌株对红火蚁工蚁的致病力。结果表明:以浓度1×10^7个孢子·mL-1接菌红火蚁工蚁,10 d后,白僵菌和绿僵菌对其校正死亡率范围分别为(6.47±0.98)%^67.14±0.22%和(35.13±1.25)%^81.93±0.94%;白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株对红火蚁的致病力较强,致死速度较快,致死中时(LT50)分别为(5.64±0.52)d和(4.78±0.46)d。测定不同浓度对红火蚁的致病力,白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株以浓度1×10^8个孢子·mL^-1接菌后10 d,其校正死亡率分别为(79.59±0.5)%和(99.20±0.80)%,僵虫率为(63.24±0.51)%和(81.92±1.39)%,两菌株对红火蚁6 d的致死中浓度(LC50)分别为1.01×10^6和2.42×10^5个孢子·mL^-1。通过时间-剂量-死亡率模型分析,两个菌株致死效应最强的时间均是接菌后3~5 d。综合分析,白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株在红火蚁生物防治中有较大应用潜力。     

不同来源绿僵菌对油桐鹰尺蠖幼虫的致病力比较

油桐鹰尺蠖Biston suppressaria (Guenée) 是一种杂食性食叶害虫,近年来在速生桉树林分中大 面积发生,造成较大的损失。文中研究了不同来源金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae 菌株生长与产孢 特性及对油桐鹰尺蠖幼虫的致病力,旨在筛选出高效防治该虫的生物资源。试验结果表明：不同来源的 绿僵菌菌株间菌落生长速度和产孢量差异显著,MaZPTR-01 菌株15 d 的菌落直径为6.5 cm,显著较其它 菌株大;MaFZ-13 和MaZPTR-01 菌株培养15 d 产孢量最高,分别为1.33×108 孢子· cm-2 和1.28×108 孢 子· cm-2。致病力测定结果表明：不同菌株对油桐鹰尺蠖幼虫的致病力存在显著差异,其中接种MaFZ-13 和MaZPTR-01 菌株的幼虫校正死亡率、僵虫率均较其它菌株高,接种后15 d 幼虫校正死亡率分别达到 94.5%、92.7%,僵虫率分别为75%、61.7%;这2 个菌株的致死中时（LT50）显著比其它菌株短,分别为 4.34 和4.52 d。绿僵菌MaFZ-13 和MaZPTR-01 菌株对油桐鹰尺蠖幼虫的致病力强,且具有良好的生产性 状,可作为该虫的生物防治资源进一步开发应用。     

椰心叶甲绿僵菌菌株分离及生物学性质研究

2004年底从海南、广州、珠海等椰心叶甲发生严重地采集林间被绿僵菌感染的椰心叶甲僵虫,经分离获得17株金龟子绿僵菌(Metarhizium ansopliae)(下称绿僵菌)。文章以这些菌株为材料,以生长速度和产孢量为指标,研究不同温度(26,35℃)下菌株生长速度及产孢量的差异,筛选适合不同温度的优良菌株。结果表明,菌株间的生长速度和产孢量差异均达极显著水平。L05、L07、L09菌株生长速度较其它菌株快,其中,L05菌株偏高温,L07菌株偏低温,L09菌株则能兼顾二温度;26℃下,L01,L02、L08、L09菌株产孢量最高,而35℃下,L05和L09菌株产孢量最高。筛选出L09菌株作为防治椰心叶甲的林间供试菌株,L09菌株具有较高的产孢量和生长速度,能适应南方不同季节的中、高温度并适合大规模生产,有望成为防治椰心叶甲的优良菌株。     

杨树舟蛾优良白僵菌菌株的筛选及林间不同剂型防治试验

为了有效控制杨树舟蛾的危害,对林间采集的7种白僵菌进行优良菌株的筛选,并应用筛选出的优良菌株进行不同剂型、不同施菌量的林间防治研究.结果表明,杨树舟蛾优良菌株Bjy,在菌落形态、生长速度、产孢量、孢子萌发率以及毒力方面,均表现出较其他同期菌株优良的性状,产孢量为3.81×108个·cm-2,分生孢子在24 h内萌发率达96.67%,在毒力方面,20 d幼虫校正死亡率达94.4%,处理僵虫率达92.2%;对杨树舟蛾最好的剂型是超低量油剂和超低量复合油剂,其中超低容量油剂以施菌量1.5×1013或2.0×1013个·hm-2为宜,校正死亡率达95.4%和100%,白僵率达84.6%和90.2%,树叶受害率39.7%和32.3%;超低量复合油剂以施菌量1.0×1013个·hm-2的油剂中添加3.0 mL·hm-2的杀灭菊酯为最佳,校正死亡率达93.8%,白僵率达67.9%,树叶受害率26.1%.     

木麻黄毒蛾高致病力绿僵菌和白僵菌菌株的筛选

木麻黄毒蛾是我国东南沿海防护林主要树种木麻黄的主要害虫之一。通过8株绿僵菌和2株白僵菌菌株对该木毒蛾进行室内生物测定,综合考虑产孢量、校正死亡率、LT50等多项指标,筛选出M aYDTR03和BbSMYXTR03为优良菌株,此2菌株对木毒蛾的校正死亡率均超过了95%,僵虫率分别为72.5%和80%,LT50分别为6.68,6.57d,均好于其它菌株。同时,分析了绿僵菌产孢量与LT50间的相关性,结果表明,两者之间存在显著的线性回归关系。     

金龟子绿僵菌、球孢白僵菌不同菌株对星天牛成虫的生物测定

在测定8株虫生真菌产孢量的基础上,选用4株金龟子绿僵菌和1株球孢白僵菌茵株,采用爬行接种法对星天牛成虫进行生物测定,旨在筛选出对星天牛成虫具有强致病力的生产菌株.星天牛成虫在产孢充分的平皿上爬行后所接触到的孢子量差异不显著.接种后不同菌株对星天牛成虫的致死趋势较一致,死亡高峰期在9～15 d.通过死亡率一时间几率值分析发现,MaYTTR04,MaZPTR01,B08 3个菌株的LT50分别为9.14,9.48,9.67 d,较另2个菌株要短.最高僵虫率的菌株是MaZPTTR01,为53.3%;其次是MaYTTR04,为40.0%;其余3个茵株均较低.试验结果表明MaYTTR04,MaZPTR01 2个菌株对星天牛有较高的致死率,僵虫率也较高,可以作为优良茵株进一步的研究、推广.     

黑曲霉发酵豆渣产酸性β-葡萄糖苷酶及其水解京尼平苷的性质

利用单因素、正交试验考察了黑曲霉L菌株发酵豆渣产β-葡萄糖苷酶的条件和酶解京尼平苷的特性。结果表明:2%豆渣适宜作为实验菌株液体发酵产酶培养基,当培养基中接种孢子浓度大于每毫升2×105个时,菌株产酶受发酵温度、装液量的影响显著,而不受接种量、摇床转速的影响,培养基初始pH值1.5时,菌株仍能正常产酶;优化的产酶培养基组成为豆渣1%、米糠1%和Tween 800.1%,初始pH值5.5;菌株在发酵温度28℃、装液量50 mL(250 mL摇瓶)、摇床转速150 r/min的发酵条件下发酵120 h,发酵液酶活为(200±10)U/mL。所产β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷的最适温度为55℃、最适pH值2.5、最佳水解时间15 min;在该条件下酶的表观米氏常数(Km)为1.35 g/L,最大水解速率(Vmax)为26.45 g/(L.min.mg),酶活半衰期为15 min,50℃时大于60 min;酶的水解活性受Na+、Ca2+的显著激活,受Mg2+、Ba2+、Cu2+、Fe2+、Hg+、Zn2+、Mn2+等离子(10 mmol/L)和葡萄糖、乙醇的抑制。     

绿僵菌对小菜蛾的毒力测定

室内毒力测定结果表明, 供试绿僵菌对小菜蛾均具有很高的致死率,其中Mf2菌株最佳,其LT50为2.846 8 d,累计僵虫率为36%.结果经时间-剂量-死亡率模型的模拟分析估计出了Mf2菌株作用于小菜蛾的时间与剂量效应参数, 第4和第5日的LC50分别为6.42×103～ 3.02×104 孢子/mL、2.38×103～1.31×104 孢子/mL,侵染的潜伏期约为4 d,在1×107 孢子/mL浓度下LT50为2.7 d.     

绿僵菌MaFZ-13对油桐鹰尺蠖致病力的时间-剂量-死亡率模型分析

运用时间-剂量-死亡率模型分析绿僵菌MaFZ-13对油桐鹰尺蠖Biston suppressaria幼虫的时间效应和剂量效应,评价该菌株的致病力。结果表明:油桐鹰尺蠖幼虫累计死亡率随着绿僵菌孢子悬浮液浓度的增大和接种时间的延长而增加,接种10 d后,1.0×10^9,1.0×10^8,1.0×10^7,1.0×10^6,1.0×10^5孢子/mL浓度累计死亡率分别为100%,98.3%,91.7%,70%,48.3%。生物测定数据采用时间-剂量-死亡率(TDM)模型进行分析,所建模型可以通过Hosmer-Lemeshow拟合异质性检验,模型拟合良好;由模型估算出绿僵菌MaFZ-13对油桐鹰尺蠖幼虫的致死剂量和致死时间,随着接种时间延长,相应的LC50和LC90值逐渐降低,剂量效应增强,接种第4,5,6,7天致死中浓度值(LC50)的对数值分别为7.79,6.97,6.33,5.64。随孢子悬浮液浓度增大,致死时间(LT50和LT90)减小,当浓度为1.0×10^7,1.0×10^8,1.0×10^9孢子/mL时,LT50值分别为4.96,3.79,2.89 d,时间效应增强。绿僵菌MaFZ-13对油桐鹰尺蠖幼虫致病力较强,具有较好应用开发潜力。     

绿僵菌在木麻黄林间宿存动态的初步研究

通过测定木麻黄林间土壤中、菌条上的绿僵菌孢子的宿存数量及萌发率,研究绿僵菌在木麻黄林中的宿存动态。结果表明:绿僵菌孢子引入木麻黄林间土壤中,45d内孢子数量迅速下降;45d时土壤中的绿僵菌孢子数不足初始带菌量的30%,其后孢子数量呈持续缓慢下降或维持在一个相对稳定的水平。绿僵菌菌条绑缚在木麻黄树干上后,其上的孢子迅速下降,至30d时,菌条孢子量仅为初始值的30%左右,随后呈现持续缓慢下降的趋势。土壤中的孢子萌发率可始终保持在一个较高水平,而菌条上孢子的萌发率变化较为复杂。     

几株绿僵菌对影等鳃金龟幼虫的毒力及耐高温性测定

影等鳃金龟幼虫对多种农作物、花卉苗木等根及幼苗危害大。作者对收集的20株绿僵菌产孢量情况进行了计量,筛选出产孢量高的Ma_(42),Ma_(788),Ma_(789)3个菌株,并进一步开展了3菌株对影等鳃金龟幼虫的毒力及耐高温性测定。结果表明Ma_(789)菌株的致病力较强,注喷处理30 d后,感染率达43%;Ma_(788)菌株的耐高温性较强,40℃水浴处理12 h后,孢子萌发率仍在33%以上。供试验的3菌株毒力和耐高温性未表现出一定的相关性。     

不同绿僵菌菌株对筛胸梳爪叩甲幼虫的毒力测定

竹林金针虫是南方竹林笋期最为重要的害虫之一,筛胸梳爪叩甲幼虫是竹林金针虫的优势种群,应用绿僵菌防治具有重要意义。测定了3株绿僵菌对筛胸梳爪叩甲幼虫的毒力,并比较了毒土法和毒饵法两种施菌方式对绿僵菌致病力的影响。结果表明,平沙绿僵菌WP08菌株和金龟子绿僵菌30104菌株对筛胸梳爪叩甲幼虫具有明显的致病效果,在30 d的试验期内,校正累计死亡率分别为90.0%和66.3%,半数致死时间(LT50)分别为15.8 d和25.8 d;毒土法的校正累计死亡率略高于毒饵法,分别为60.1%和52.0%,LT50分别为22.6 d和28.0 d。金龟子绿僵菌LRC112菌株对金针虫无致病力。     

感染油桐鹰尺蠖幼虫的优良白僵菌菌株筛选

油桐鹰尺蠖是危害速生桉树的重要食叶害虫之一,在我国南方大面积发生。为筛选出对该虫高效的生物防治资源,采用室内测定的方法测定6个不同来源的球孢白僵菌菌株(BbAX-07、BbFZ-51、BbFZ-58、BbMQ-08、BbMQ-02、BbQZ-05)生物学特性及其对油桐鹰尺蠖幼虫的致病力。结果表明:不同白僵菌菌株的菌落生长速度和产孢量间存在显著差异,菌落大小与产孢量呈正相关。BbFZ-58、BbAX-07菌株菌落直径和产孢量较其它菌株高,SDAY培养基上生长15d的菌落直径分别为6. 0、6. 3 cm,产孢量为1. 41×10~8、1. 35×10~8孢子·cm~(-2);接种这2个菌株15 d后,油桐鹰尺蠖幼虫校正死亡率分别达到96. 4%、90. 9%,僵虫率分别为73. 3%、71. 7%,致死中时(LT_(50))分别为4. 45、4. 72 d,均比其他菌株高。说明球孢白僵菌BbFZ-58、BbAX-07菌株对油桐鹰尺蠖的致病力强,可作为优良菌株进一步开发应用。     

枯斑盘多毛孢菌生物学特性的研究

本文研究了影响松赤枯病病原菌枯斑盘多毛孢菌生长及产孢的因子.枯斑盘多毛孢菌可在较宽的温度范围内生长,自然光照、空气充足有利于产孢;该菌在改良的察氏培养基1号上在25℃恒温条件下菌丝生长速度最快,在改良的察氏培养基2号上产孢量最大且培养8天即可获得最大产孢量,7.47×107个孢子/皿.     

载体半固体砖式开放培养白僵菌纯孢子粉工业化生产工艺研究

载体半固体砖式开放培养白僵菌新工艺的主要特点为:采用塔板式发酵罐通气搅拌,不易污染,空气的分散性好,溶解氧较多,发酵效率高;采用R粒体做载体,疏松通气,培养面大,产孢量高;采用搅散转盘式旋风分离机集菌,不需粉碎,不损伤孢子,分离率高,效果好。纯孢子粉产品每克含量达2261.1亿—2422.2亿分生孢子,平均每平方米培养物可产纯孢子粉221.9g,活孢率为86.2—87%。采用本工艺成本下降26.6%。