不同因子对黄檗愈伤组织诱导的影响

为了提高黄檗组织培养的愈伤组织诱导率,研究了植物激素、基本培养基、外植体、蔗糖质量浓度、pH值和光照等因子对黄檗愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明,以叶片为外植体,MS为基本培养基,培养基中添加BA1.5 mg/L和2,4-D 2.0 mg/L,培养基中蔗糖质量浓度20 g/L,pH值5.8,在光照强度40μmol.m-2s-1条件下培养最有利于黄檗叶片愈伤组织的诱导。在此条件下,愈伤组织诱导率最高可达100%。     

屋久岛紫薇子叶愈伤组织诱导及植株再生技术初探

以屋久岛紫薇子叶为外植体,通过添加不同种类和质量浓度的生长调节剂,对屋久岛紫薇进行组织培养试验,研究不同植物生长调节剂组合及质量浓度对屋久岛紫薇愈伤组织诱导、增殖及分化的影响,从而筛选出适宜屋久岛紫薇愈伤诱导、增殖和分化的培养条件。结果显示,屋久岛紫薇子叶外植体在组织培养过程中,适宜愈伤诱导培养基组合为1/2MS+1. 0 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L 2,4-D,诱导率为46. 5%;愈伤组织增殖的适宜培养基为MS+1. 0 mg/L 6-BA+0. 1mg/L NAA,增殖系数最大,为3. 1;愈伤组织分化的最适培养基为WPM+1. 0 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L IBA,分化率为18. 7%;移栽基质适宜为等容积的泥炭土+珍珠岩混合物,成活率为90%。     

农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织遗传转化体系

【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可能,为杜仲基因功能的研究与定向改良奠定基础。【方法】以杜仲成年植株叶片为材料诱导愈伤组织,通过添加不同浓度植物生长调节剂与大量元素的MS培养基进行不定芽的诱导与增殖,确定最适培养基。在此基础上,在培养基中添加不同浓度抗生素及抑菌剂,研究愈伤组织对其敏感性。以获得的叶片愈伤组织受体系统为基础,通过L_(16)(4~5)的正交试验,探索不同转化因子对农杆菌介导叶片愈伤组织遗传转化的瞬时转化效率的影响,建立最适瞬时转化体系。使用获得的瞬时转化体系对愈伤组织进行遗传转化操作,筛选抗性芽,对抗性芽进行GUS组织化学染色与PCR检验。【结果】再生体系优化的结果表明,3/4大量元素浓度的MS培养基能够促进杜仲愈伤组织不定芽的诱导及生长;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0. 27μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,诱导率为83%±10. 0%;不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,平均伸长长度为(2. 47±1. 33) cm。抗生素与抑菌剂敏感性试验表明,遗传转化的选择培养基中,抑菌剂头孢霉素的最适浓度为200 mg·L~(-1),筛选用的抗生素卡那霉素最适浓度为70 mg·L~(-1)。转化因子的正交试验表明,最适的农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化的转化因子组合为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天。使用最适瞬时转化体系对约200个愈伤组织进行遗传转化操作,共筛选获得3个抗卡那霉素的抗性芽; GUS组织化学染色显示GUS基因在抗性芽中得到了表达,PCR检测证明这些抗性芽中存在NPTⅡ基因。【结论】杜仲叶片愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0. 27μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA。农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织瞬时转化体系为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天,筛选培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA+200 mg·L~(-1)Cef+70 mg·L~(-1)Km。利用此体系共获得3个抗性芽,PCR分析和GUS组织化学染色都表明T-DNA已整合到抗性芽基因组中。     

龙凤竹愈伤组织诱导及再分化的试验

以龙凤竹茎段为外植体,采用不同培养基进行愈伤组织诱导试验。将获得的龙凤竹愈伤组织转入再分化培养基中,采用正交设计实验,添加不同浓度6-BA、NAA和蔗糖,组成9种不同的再生植株分化培养基,对龙凤竹愈伤组织进行再分化培养。结果表明:NMB为最适的基本培养基;诱导培养基中添加6-BA 1 mg/L+NAA0.1 mg/L时,有利于龙凤竹愈伤组织形成,诱导率达86.67%;再分化率最高的培养基配方为NMB+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+5%蔗糖。     

红松成熟合子胚愈伤组织诱导的适宜培养条件

为了探索以红松成熟合子胚为外植体诱导愈伤组织的适宜培养条件,以GD、DCR、LM、MS等为基本培养基,以2,4-D和6-BA组成不同浓度激素组合,进行愈伤组织诱导试验。结果表明,1供试培养基均可诱导红松成熟合子胚产生愈伤组织,但DCR培养基上诱导的愈伤组织出现最早,出愈率显著高于其他培养基,达93.3%;2在DCR培养基中添加2,4-D与6-BA的各种组合均获得了较好的愈伤组织发生,但以2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L和2,4-D6 mg/L+6-BA 1 mg/L的出愈率最高,达96.7%。综上所述,红松成熟合子胚外植体诱导愈伤组织时,适宜基本培养基为DCR,适宜激素组合为2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。     

朱顶红愈伤组织诱导及增殖发育体系的建立及优化

以朱顶红带有小鳞茎的试管苗作为外植体,进行愈伤组织的诱导、增殖及不定芽分化研究,结果表明:诱导愈伤组织形成的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+KT2.0mg/L。愈伤组织增殖需要的最佳2,4-D 2.0mg/L浓度为1.0mg/L,促进不定芽分化及植株再生的6-BA浓度为0.5mg/L。     

短柄五加愈伤组织诱导及再生体系的建立

以短柄五加(Acanthopanax brachypus Harms)当年生嫩枝为材料,选择叶片、叶柄为外植体,使用6-BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行短柄五加愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽增殖培养基的最佳配方,建立短柄五加植株的再生体系。结果表明,短柄五加叶片是较适宜诱导愈伤组织的外植体,愈伤组织诱导的培养基是MS+0.3mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA,诱导率为75.0%;愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L,不定芽诱导率为100%;适宜不定芽增殖的培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.2mg/L,增殖系数为5.80;同时活性炭能够有效防止愈伤组织诱导过程中的褐化问题。     

圆山药的离体培养

为建立圆山药的离体培养体系,将野生苗盆栽后,切取其嫩叶、茎段、地下块茎和不定根作为外植体,探讨不同消毒方式的影响及不同生长调节剂组合对愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽诱导及腋芽增殖的影响。结果表明:①腋芽增殖途径的培养基配方为MS+BA3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L(增殖系数为3.1);②适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4—D 4 mg/L+6—BA 0.5 mg/L,其中以带腋芽的茎段为外植体诱导率较高,可达85.7%。BA浓度为4.0~6.0 mg/L时,不定芽的形成率最高,达97.5%;③增加BA和琼脂的浓度利于防止圆山药的褐化。     

蓖麻离体培养体系的建立

为建立蓖麻的离体培养体系,以其无菌发芽的种子苗为材料,切取其根、茎、叶及顶芽为外植体,探讨不同诱导途径中不同生长调节剂对愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽诱导及腋芽增殖的影响。结果表明:(1)去种皮后消毒种子的萌发率最高,萌发所需时间最短,染菌率也低;筛选出种子萌发适宜培养基为MS 0;(2)器官发生型诱导途径中,诱导愈伤组织最适的培养基为MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L,其中以茎为外植体诱导率最高,可达90%,但愈伤组织的分化较困难;(3)器官型诱导途径中,叶基、叶脉处能直接诱导不定芽,最适培养基为MS+6-BA 2 mg/L+2,4-D 1 mg/L;(4)顶芽诱导腋芽增殖的效果最佳(51个芽/外植体),最适培养基为MS+6-BA 2 mg/L+TDZ 1 mg/L;(5)生根最适培养基为位1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L。     

不同激素对红豆杉愈伤组织诱导及增殖的影响

以南方红豆杉(T.chinensis varmairei)的嫩茎为外植体,探讨了不同激素对愈伤组织诱导及继代增殖的影响。结果表明:以嫩茎为外植体,愈伤组织诱导的最佳培养基为:B5+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L+AC1g/L+酪蛋白1g/L,但高浓度的2,4-D易使愈伤组织褐化。为了减缓愈伤组织褐化和使细胞持续增殖,继代时选用NAA替代2,4-D,继代培养的最佳培养基为:B,5(去掉Cu2+的B5培养基)+NAA 4.0mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L+AC0.5g/L+酪蛋白1g/L。     

南蛇藤愈伤组织的诱导和植株再生

以南蛇藤无菌苗子叶、上胚轴及幼根为材料,比较研究不同激素配比条件下不同外植体愈伤组织的诱导、分化及植株再生。结果表明:上胚轴是诱导产生胚性愈伤组织的最佳外植体;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.5¹.0mg/L);愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA(0.5mg/L)和MS+6-BA(2.0mg/L)+IBA(0.11.0mg/L);愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA(0.5mg/L)和MS+6-BA(2.0mg/L)+IBA(0.1⁰.5mg/L);芽增殖最佳培养基为MS+6-BA(1.00.5mg/L);芽增殖最佳培养基为MS+6-BA(1.0².0mg/L)+NAA(0.1mg/L),增殖系数平均达7.05;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L,生根率达88%。     

湿地松愈伤组织的诱导研究初报

取湿地松成熟胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的MS培养基上,诱导愈伤组织的最适培养基是MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+0.6%琼脂+25g/L蔗糖。实验同时证明,NAA是胚诱导愈伤组织的必需因子。     

胡杨组培及愈伤组织增殖研究

胡杨是我国西北荒漠珍贵先锋树种,但扦插繁殖难以生根。本文以胡杨的枝段为外植体,通过筛选最佳消毒方式和优化培养基,建立胡杨愈伤组织的诱导和增值的培养体系。结果显示:胡杨外植体最佳灭菌法为0.1% HgCl_2处理6 min;愈伤组织最佳诱导培养基MS+0.50 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,诱导率80%;愈伤组织适宜增殖培养基MS+0.05 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA,增殖程度最好。     

三角梅愈伤组织诱导和植株再生

以三角梅(Bougainvillea glabra choisy.)当年生枝条为材料,比较研究不同激素配比条件下外植体愈伤组织的诱导及植株再生。结果表明:三角梅茎段在MS+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.05mg/L培养基上,可诱导出愈伤组织,愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L,经再分化可获得无性系芽,继而产生丛生芽;将高度大于3cm的增殖芽接种于添加1/2MS+IAA 1.0mg/L培养基上可诱导产生不定根,生根率高达50%。生根后移栽成活,获得完整再生植株。     

丝棉木松散型胚性愈伤组织的诱导与增殖

通过建立丝棉木松散型胚性愈伤组织培养体系,为丝棉木组培快繁、体细胞离体诱变育种及遗传转化等研究奠定基础。本试验以丝棉木幼嫩茎段为外植体,研究植物生长调节剂不同种类和浓度对丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导与增殖的影响。结果显示,丝棉木茎段在MS+1.0 mg/L 2,4-D培养基上可诱导出松散型愈伤组织,愈伤组织诱导率达100%;将松散型愈伤组织转接到MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上可获得胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转接到MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上,每15 d继代培养一次,继代时选择结构松散、质地硬脆的愈伤组织,继代培养2～3次后可获得均质的丝棉木松散型胚性愈伤组织。本研究表明,丝棉木茎段理想的松散型愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D;最适松散型愈伤组织诱导培养基为MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D;最适胚性愈伤组织增殖培养基为MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D。     

金钱树叶片组培快繁成苗技术研究

以金钱树叶片及叶茎为外植体进行离体培养研究,结果表明:用浓度为0.1%的升汞溶液对金钱树材料进行消毒,时间10～15min效果较佳;在以叶片和叶茎为外植体的愈伤组织诱导中,叶片较叶茎易产生愈伤组织;MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的激素配比对诱导叶片愈伤组织的形成有利,诱导率高达74.1%;增殖培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L最佳;不定芽在1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.5mg/L的生根培养基上,生根最佳,生根率达86.2%,根多条、粗壮,植株长势良好、有活力;生根苗移栽在泥炭与椰糠2∶1的基质中,成活率较高。     

植物生长调节剂对黑果枸杞愈伤组织诱导、增殖及分化的影响

为建立黑果枸杞高频再生体系及进行细胞突变体筛选、遗传转化奠定基础,以黑果枸杞叶片、茎段和腋芽为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度的植物生长调节剂进行愈伤组织的诱导、增殖及不定芽分化研究。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的继代培养过程中,高浓度的2,4-D有利于愈伤组织的诱导,但对愈伤组织的生长有一定的抑制作用,最佳培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的再分化过程中,6-BA对再生芽的分化效果最好,出芽率高,且多诱导出丛芽,最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.10mg/L。试验表明:黑果枸杞叶片、茎段和腋芽均可诱导愈伤组织,茎段诱导率最高;筛选出了茎段愈伤组织诱导、增殖及再生芽分化的适宜培养基,为其细胞工程育种及规模化生产提供支撑。     

不同培养基对宿根福禄考不定芽诱导的影响

以宿根福禄考幼嫩叶片为外植体,探讨了添加不同浓度和比例外源激素的培养基,对宿根福禄考不定芽诱导、增殖、生根的影响。结果表明:(1)最适诱导培养基为MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L;(2)最适增殖培养基MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.2 mg/L;(3)最适生根培养基1/2MS+NAA0.5 mg/L。     

牡丹愈伤组织诱导和继代培养体系的建立

以牡丹为材料,研究了不同外植体、激素对愈伤组织诱导和继代增殖的影响,结果表明:①牡丹子叶、胚轴是诱导愈伤组织的最佳外植体;②牡丹子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+Ca2+;③牡丹愈伤组织增殖的最佳培养基为:MS+2,4-D 0.5 mg.L-1+NAA 1.5 mg.L-1+Vc 500 mg.L-1;④在培养基中添加500 mg.L-1Vc或去除Cu2+,具有较好的抗褐化效果。     

桔梗丛生芽的诱导及植株再生

用桔梗茎段为外植体,以MS为基本培养基,对添加不同浓度和比例的外源激素对桔梗丛生芽的诱导、增殖及植株再生的影响进行探讨。结果表明:丛生芽诱导培养基以MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L效果最佳;增殖培养基以MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L效果最佳;生根培养基以1/2MS+NAA0.2mg/L效果最佳。