凝集素亲和层析技术分离金花茶多糖的研究

以蓖麻凝集素（RCA）为亲和配体制备亲和层析树脂,在比较2种固定载体制备亲和树脂对金花茶多糖分离效果的基础上,探讨了多糖上样量、NaCl浓度以及洗涤量对RCA-Sepharose-2B亲和树脂结合率或再生效果的影响,并采用高效液相色谱（HPLC）对亲和多糖进行分离效果分析,为将亲和层析技术应用于金花茶活性多糖的分离纯化提供科学依据。研究结果显示,相比AF-Amino-650 m树脂,RCA-Sepharose 2B亲和树脂的分离效果比较好,而且可以进行反复使用多次。多糖上样量显著影响多糖与树脂的亲和效果,多糖结合率随上样量增加呈倒U型变化,当多糖上样量为10.4 mg/g亲和层析树脂时,其亲合率最高,达到57%左右;NaCl浓度对树脂的再生效果也有显著影响,用含0.2 mol/L NaCl的磷酸缓冲液洗涤树脂可以有效恢复树脂对多糖的亲和效果。HPLC分析结果显示分离获得的亲和活性多糖是由3种不同分子量的多糖组分组成。     

八种食用菌多糖成分测定及其对淋巴细胞的转化作用

 测定表明,香菇、金针茹、猴头菇、毛木耳、黑木耳、平菇、凤尾菇等菌类的多糖主要由葡萄糖组成，其含量分别变化在70%～94%之间，并且均以墨角藻糖最低，仅1%～2%。各菌类中除猴头菇不含甘露糖，毛木耳不含半乳糖外，其余尚含一定数量的半乳糖和甘露糖。金耳的多糖组成特殊，其多糖组成以甘露糖为主，数量变化顺序是：甘露糖（73%）>葡萄糖(15%)>半乳糖(11%)>墨角藻糖(1%)。本试验中，8种食用菌多糖均较对照（不加多糖）能提高淋巴细胞转化功能，其转化值大小顺序是：猴头菇多糖>黑木耳多糖>金针菇多糖>平菇多糖>凤尾菇多糖>金耳、香菇多糖>毛木耳多糖>对照。其中黑木耳、猴头菇、金针菇中的任一种多糖与5μg/ml浓度的伴刀豆球蛋白A相配合，则较单纯使用脂多糖或伴刀豆球蛋白A更能促进淋巴细胞的有丝分裂，增加它的转化值；反之，毛木耳多糖若与伴刀豆球蛋白A或脂多糖配合使用，则可抑制淋巴细胞的转化功能，其原因尚待进一步研究。     

白头翁汤中总多糖对微血管内皮细胞糖萼糖链表达的影响

[目的]研究白头翁汤中总多糖对微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MVECs)糖萼糖链的影响.[方法]体外培养猪小肠黏膜MVECs,以50μg/mL白头翁汤中总多糖刺激48 h后,利用凝集素荧光技术检测刀豆凝集素(concanavalin A,Con A)、麦胚凝集素(wheat germ agglutinin,WGA)、双花扁豆凝集素(dolichos bifows agglutinin,DBA)、荆豆凝集素(ulex europaeus agglutinin Ⅰ,UEA Ⅰ)、花生凝集素(peanut agglutinin,PNA)、雪花莲凝集素(galanthus nivalis lectin,GNL)、番茄凝集素(lycopersicon esculentum lectin,LEL)受体糖链的表达.[结果]正常情况下猪小肠黏膜MVECs WGA、LEL、Con A和GNL四种凝集素荧光染色呈强阳性,DBA和PNA荧光染色呈弱阳性,UEA Ⅰ荧光染色呈阴性;白头翁汤中总多糖能显著提高WGA和LEL荧光染色的强度.[结论]白头翁汤中总多糖能上调猪小肠黏膜MVECs表达N-乙酰氨基葡萄糖.     

生长猪消化道大肠杆菌、乳杆菌和双歧杆菌凝集素活性及其化学性质

 采用红细胞凝集试验 (HA)和凝集抑制试验 (HIA) ,对大肠杆菌、乳杆菌和双歧杆菌凝集素活性和化学性质进行了研究。HA结果表明 ,在 3种菌的细胞表面均存在凝集素并能够凝集猪和兔红细胞 ,且乳杆菌对 2种红细胞的凝集活性较高。细菌经化学试剂 (高碘酸钠、SDS、EDTA、LiCl)和酶 (蛋白酶、胰蛋白酶、脂酶 )处理后的HA结果表明 ,凝集素为糖蛋白类物质。HIA的结果表明 ,大肠杆菌的凝集反应可被甘露糖 (1.43mg/ml)、半乳糖(2 .5 3mg/ml)抑制 ;乳杆菌的凝集反应可被鼠李糖 (1.45mg/ml)、甲基 β 呋喃半乳糖苷 (3.75mg/ml)抑制 ;双歧杆菌的凝集反应可被鼠李糖 (2 .2mg/ml)、半乳糖 (2 .3mg/ml)、墨角藻糖 (3.14mg/ml)、阿拉伯糖 (3.44mg/ml)、甘露糖 (3.74mg/ml)和果糖 (3.98mg/ml)抑制。兔红细胞经神经氨酸酶修饰后可显著提高 3种菌的凝集素活性 ,而经 β 半乳糖苷酶修饰后大肠杆菌对其凝集活性完全丧失 ,而后二者的凝集活性不受影响。上述结果提示 ,3种菌对红细胞的凝集反应是以细菌表面的糖蛋白类物质特异性识别红细胞表面的受体的方式来介导的。     

植物凝集素对蚜虫的抗生效应

凝集素在植物的防御体系中起着重要作用。采用全纯营养液人工饲养技术对４种植物凝集素的抗蚜效应进行了测试。结果表明,天南星凝集素（ＡＭＡ）在低浓度（１０ｇ／Ｌ）时即对棉蚜有明显的致死性和降低生殖、抑制发育进程的作用。而棉花凝集素（ＧＨＡ）和蓖麻凝集素（ＲＣＡ）在较高浓度（２０ｇ／Ｌ）下才显示抗蚜效应。伴刀豆凝集素（ＣｏｎＡ）对棉蚜抗生作用不明显。这为进一步分离具有高效杀蚜活性的凝集素基因并应用于抗虫基因工程奠定了基础。     

水飞蓟综合利用基础研究：水飞蓟凝集素

研究发现水飞蓟种仁中存在凝集素（ＳＭＬ）。提取ＳＭＬ时,种仁粉与Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ（ｐＨ７．２）的缓冲液的抽提比例为１：５时较为合适,此时的滴度为２＾４,发生凝集反应的蛋白质浓度为３８７ｕｇ／ｍｌ。水飞蓟凝集素的最适ｐＨ为６～８。其热稳定性较强,能耐６０℃温度处理。其专一性糖为Ｄ－半乳糖。经硫酸铵分级沉淀,其活性最强的是２０～４０组分。     

宁夏枸杞果实和叶片糖积累及其枸杞多糖单糖组成研究

以宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)成熟期果实和果实着生处叶片为材料,通过洲定果实及叶片内葡萄糖、果糖、蔗糖和多糖含量,粗多糖得率,粗多糖的单糖组成,比较枸杞果实和叶片在糖分积累及枸杞粗多糖含量和单糖组成上的差异,结果表明:枸杞果实和叶片内葡萄糖、果糖、蔗糖及多糖变化规律为果实内主要以积累己糖(葡萄糖、果糖)为主,占果实内这3种糖总量的97.2%,蔗糖仅占2.8%;枸杞叶片内这3种糖占其总糖分的比例差别不大,蔗糖为36.1%,果糖为33.6%,葡萄糖为30.3%.枸杞果实内多糖质量比达2.95%,而叶片内多糖质量比仅为0.20%.枸杞果实和叶片粗多糖的单糖组成有明显差异,果实内粗多糖主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖6种单糖组成,而叶片中粗多糖主要由鼠李糖、阿拉伯搪、葡萄糖和半乳糖4种单糖组成,说明枸杞叶片内存在的多糖与枸杞果实内存在的多糖在糖链结构组成上存在明显差异.     

牛精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白的分离与定位

牛精子膜用非离子去污剂 NP-40增溶,经固相凝集素亲和层析,初步分离了精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白,经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色显示出了四条蛋白质带,分子量分别为78,60.42和33 kD。用分离到的糖蛋白制备抗血清,对牛精子进行免疫细胞化学标记,结果顶体区显示为强阳性,与麦芽凝集素亲和细胞化学的染色一致。用抗血清处理精子再进行亲和细胞化学染色时,顶体区的麦芽凝集素结合糖残基多数被封闭,揭示麦芽凝集素结合糖残基是构成抗原决定簇的成分。     

一个重要的精子受体—猪透明带糖蛋白β-D-半乳糖残基

 【目的】证明末端半乳糖残基在猪透明带糖蛋白中的分布以及它在精子结合和侵入中的作用。【方法】体外成熟的猪卵母细胞去除周围卵丘细胞，用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC) 络合西非单叶豆凝集素(Bandeiraea simplicifolia lectin-I，BS-I) 或蓖麻凝集素(Ricinus communis agglutinin，RCA-I)处理30min，分别观察末端-D-半乳糖残基或-D-半乳糖残基在透明带中的定位分布。荧光显微镜观察显示，BS-I和RCA-I都标记于整个透明带上且比较集中于透明带的外层，其中BS-I显示微弱荧光反应，而RCA-I呈强荧光反应且在透明带的外层反应尤为强烈。植物凝集素处理的卵母细胞用于体外受精，分别在受精2h或12h观察精-卵结合和精子入卵情况。【结果】RCA-I处理组卵母细胞平均精子结合数显著低于对照组（18 vs 95），而精子入卵则完全被阻断；可是BS-I处理组的卵母细胞的精子结合数少量被抑制（59 vs 95），而且精子入卵率与对照组无显著差异。【结论】猪透明带末端-D-半乳糖残基作为精子受体的重要组成成分，参与精-卵结合和受精。     

烟夜蛾血淋巴凝集素活性的研究

利用血凝法检测烟夜蛾Helicoverpa assulta血淋巴对红细胞的凝集活性和不同发育期凝集素水平,同时选取13种糖进行凝集素糖抑制反应,以明确该凝集素与烟夜蛾发育的关系和糖结合特性.研究结果表明,在烟夜蛾的不同发育期均检测有凝集素,但各龄幼虫及不同日龄蛹的凝集活性存在明显差异,雌蛹凝集素水平高于同日龄的雄蛹,表明凝集素与发育期、虫龄及蜕皮过程有关,且与性别相关.烟夜蛾蛹血淋巴凝集素活性与近缘种棉铃虫H.armigera的相类似,均被D-半乳糖、L-鼠李糖、麦芽糖、乳糖明显抑制;D-葡萄糖、D-果糖、L-岩藻糖和蔗糖等也有抑制作用,但抑制程度不同;L-阿拉伯糖与棉铃虫凝集素的专一性结合更强;N-乙酰葡萄糖胺和L-山梨糖只对棉铃虫凝集素有抑制作用,而对烟夜蛾凝集素无抑制作用,说明这2个近缘种的凝集素不完全相同.     

Separation of the sperm agglutinin and the acrosome reaction-inducing substance in egg jelly of starfish

The egg jelly of the starfish Asterias amurensis was separated into the fractions J1, J2, and J3 on a Sephadex G-100 column. The Jl fraction induced the acrosome reaction and J2 induced sperm agglutination. Chemical analysis and chromatography revealed that sperm agglutinin is similar to asterosaponin A.     

Mobility and the restriction of mobility of plasma membrane lectin-binding components

Labeling by ferritin-conjugated agglutinins from Ricinus communis was used to demonstrate the relative mobilities of the agglutinin receptors located in specific regions on plasma membranes of rabbit spermatozoa. The relative mobility of lectin receptors was higher on postacrosomal regions of sperm than on acrosomal and tail regions. Lectin-induced clustering could not be demonstrated in the acrosomal and tail regions, an indication of the existence of localized restraints on the mobilities of lectin receptors. A system of transmembrane restraints may maintain the segregation of plasma membrane components into membrane domains on certain highly differentiated cells.     

不同地区马铃薯凝集素含量与活性的测定分析

植物凝集素是一个超级蛋白质家族,能凝集细胞.不同植物凝集素含量和活性均不相同,即使同一品种植物由于所生长的地区环境不同,其含量和活性也各不相同.本试验对两个不同地区的白瓤马铃薯就此两方面进行了初步研究.结果发现.东北马铃薯的凝集素含量和活性远大于山东马铃薯.     

冰冻条件下两种外源植物凝集素对水曲柳幼叶叶绿体外膜的影响

水曲柳是我国东北林区重要的造林树种。在其幼叶展开期间经常受到霜浆的危害，如何提高其幼叶的低温抗性对于延长其生长期具有重要的实际意义。从水曲柳幼叶中分离完整叶绿体，然后使具有半乳糖专一性的花生凝集素和大豆凝集素结合至水曲柳叶绿体外膜，此后经－10℃冰冻处理3h，经测试，它们对外膜膜脂的流动性的影响不同。大豆凝集素的 疏水性小于花生北集素的疏水性。大豆凝集素降低了膜脂酰基链和甘油主链的流动性，而花生凝集素则增强了这两个部位的流动性，这与它们的疏水性大小相关。这表明花生凝集素能在冰冻条件下增加水风柳叶的叶绿体外被膜的流动性。     

Lectin-Induced Mucus Release in the Urn Cell Complex of the Marine Invertebrate Sipunculus nudus (Linnaeus)

The mucociliary urn cell complex of the marine coelomate Sipunculus nudus secretes mucus 4 to 5 minutes after being exposed to Lotus tetragonolobus and Ricinus communis I agglutinins. Surface binding of both lectins is confined to the secretory area of the urn cell complex and, like the release of mucus, is inhibited by the specific saccharides L-fucose and D-galactose or by incubation in L-fucosidase and D-galactosidase. Mucus secretion may therefore be initiated by the interaction of mucus-releasing stimuli with fucosyl or galactosyl residues of specific membrane receptors.     

非洲山毛豆种子凝集素性质的研究

以非洲山毛豆种子为材料,通过热稳定性试验、酸碱稳定性试验、糖专一性试验及金属离子试验对其凝集素的性质进行研究。结果表明:当温度大于70℃,凝集素活性全部丧失;凝集素在pH5.8~9.1范围内具有凝集活性;凝集素的抑制糖主要是乳糖、蔗糖,而D-半乳糖、海藻糖和麦芽糖对其完全没有抑制效果;山毛豆种子凝集素凝集兔红细胞的活性依赖于Ca2+和Mg2+,Mn2+对山毛豆种子凝集素凝集兔红细胞的活性无影响。     

Cytostructural localization of a tumor-associated antigen

Tumor cell membrane glycoproteins may be involved in the induction of tumor immunity or in the escape of tumors from immunologic defense mechanisms. Forty-four benign and malignant breast lesions were examined for the presence of a carbohydrate precursor antigen (T antigen) of the human blood group system MN. T antigen was demonstrated by means of an immunohistochemical technique to detect tissue binding of peanut agglutinin, a plant lectin, with affinity for T antigen. Malignant breast lesions showed a pattern of T antigen expression different from that of benign breast tissues. A possible role for T antigen in the modulation of the immune response to breast carcinoma is suggested.