粳型恢复系C418转基因再生体系的建立

为水稻转基因育种和突变体库的建立创造有利条件,以粳稻C418成熟胚为外植体,通过植物组织培养技术,考察不同基础培养基(N6、MS、MSN、NMB、NB、MB和NBD)和生长素2,4-D浓度(1mg/L、2mg/L和3mg/L)对外植体愈伤组织诱导效果;将继代培养获得的优良愈伤组织采用农杆菌介导法进行遗传转化,并考察适宜的共培养时间以及不同抗生素(头孢霉素、氨苄霉素和m潮霉素)对愈伤组织的分化效果,以建立北方骨干粳型恢复系C418转基因再生体系。结果表明:在愈伤组织诱导过程中,基础培养基NBD+3mg/L 2,4-D处理粳稻C418成熟胚愈伤组织诱导率最高,达90.38%,愈伤组织生长状态最佳;水稻愈伤组织共培养2d获得的抗性愈伤组织最多,筛选培养基中降低头孢霉素浓度并添加氨苄霉素可提高水稻愈伤组织分化率。通过培养基类型、激素浓度、共培养时间及抗生素种类的最佳组合,成功建立北方骨干粳型恢复系C418转基因再生体系,即水稻外植体经次氯酸钠处理后接种于诱导培养基NBD+3mg/L 2,4-D,获得愈伤组织,再用农杆菌悬浮液(含目的基因)侵染愈伤组织,最后获得含目的基因的转基因植株。     

农杆菌介导的旱稻遗传转化主要影响因素

以旱稻品种鲲旱1号为材料,对农杆菌介导的遗传转化中愈伤组织的诱导、筛选、分化等的影响因素进行了研究。将PPA抗虫基因和bar抗性基因成功导入旱稻愈伤组织,经过筛选和分化最终获得了抗性植株。结果表明,改良的NB培养基适合于旱稻愈伤组织的诱导;当农杆菌浓度在OD600 nm为0.2~0.3,侵染时间为20 min时,转化效果最好;用40 mg/L的PPT筛选30 d后,可以获得抗性愈伤组织;将已筛选的抗性愈伤组织在预分化培养基上培养5~7 d能有效提高分化率。     

不同激素配比对旱稻愈伤组织诱导率的影响

以2个不同旱稻品种为材料,利用不同的培养基和激素相结合,对影响旱稻成熟种子愈伤组织诱导率的因素进行了研究.结果表明,NB培养基可提高旱稻愈伤组织出愈率,且2,4-D与6 - BA不同质量浓度配比对愈伤组织的培养效果不同.2,4-D为4.0mg/L,6- BA为1.0mg/L时品种旱1愈伤组织的诱导率最高(76.8％),...     

抗逆转基因旱稻转化体系的优化

以粳糯型常规旱稻品种"冀旱糯3号"为受体材料,利用农杆菌转化法将bar基因和lea-1基因转入旱稻细胞,建立了适用于旱稻的高效转化体系,最终获得转基因植株,并对转基因植株进行PCR检测。结果表明:当农杆菌浓度(以D_(600 nm)表示)为0.2时,转化效果最好。在筛选抗性愈伤时,除草剂的最佳浓度为40 mg/L,对抗性愈伤组织进行预分化能提高其分化率,对转基因植株进行分子检测,优化后的转化率提高到37.5%。     

玉米幼胚愈伤组织诱导及植株再生研究

以玉米幼胚为外植体,研究了2,4-D不同浓度对愈伤组织诱导以及6-BA不同浓度对愈伤组织分化的影响.结果表明,2,4-D浓度显著影响愈伤组织的诱导,愈伤组织诱导培养基中2,4-D适宜的浓度范围是2～3 mg/L,但不同品种的外植体对2,4-D浓度反应不同,其中辽单565愈伤组织诱导2,4-D最佳浓度为2.62 mg/L,自交系742愈伤组织诱导2,4-D理论最佳浓度为2.60 mg/L;6-BA对植株的再生有促进作用,胚性愈伤组织分化的最适6-BA浓度为1.0 mg/L.     

早熟棉‘中棉所16’再生纯合系的创制及遗传转化

为拓展可再生陆地棉的基因型,利用转基因技术直接改良已有的优良早熟棉品种,设置不同浓度的2,4-D和激动素(KT)4种组合进行诱导,成功获得体细胞胚和再生植株,构建早熟棉品种‘中棉所16’再生体系。研究表明:诱导初生愈伤组织以添加0.1 mg/L 2,4-D、0.1 mg/L KT的组合诱导培养基效果最佳,愈伤组织形态较好,有利于撤除激素的胚胎发生和植株再生;‘中棉所16’胚胎发生状态只有1种,在去掉2,4-D和KT的第一次继代便开始分化出白-灰色粗颗粒胚性愈伤组织,继代1～2次后有胚状体出现和植株再生,整个再生过程需要6～8个月。经过2次组培获得再生系,其不同株系胚胎发生率均有不同程度的明显提高。随后获得后代种子100%可再生纯合系材料,经过进一步自交扩繁,其后代种子用于转化受体,提高了转化和再生效率,并利用该体系将EDT1基因成功导入‘中棉所16’基因组。以9个月为限统计,其遗传转化胚胎发生率高达40%以上。     

玉米愈伤组织培养体系优化及ICE1基因的遗传转化

选取3个骨干玉米自交系丹988、齐319、郑58幼胚为材料,利用正交试验设计L9(34),研究了基因型、幼胚大小、2,4-D浓度和AgNO_3浓度4个因素对胚性愈伤诱导率的影响。结果表明:各因素对愈伤诱导结果的影响大小依次为基因型幼胚大小2,4-D浓度AgNO_3浓度,最优组合为"齐319"、幼胚为1.5~2.0 mm、2,4-D浓度为2 mg/L和AgNO_3浓度为8 mg/L,愈伤组织诱导率为60.58%。用农杆菌介导法将植物超表达载体p CAMBIA3301-ICE1-Bar转入玉米自交系"齐319"中,得到的转化植株经除草剂basta初步筛选后,通过PCR检测,获得了5棵T_0代阳性植株。     

旱稻愈伤组织培养研究

以旱-1(H-1)和秦爱(QA)两种旱稻种子为材料,研究了不同培养基以及不同浓度的激素对旱稻愈伤组织培养的影响。结果表明,NB培养基可明显提高旱稻愈伤组织的出愈率,对旱-1而言,当2,4-D浓度为4.0mg/L、6-BA浓度为1.0mg/L时的愈伤组织出愈率最高;对秦爱而言,当2,4-D浓度为2.0mg/L、6-BA浓度为1.0mg/L时的愈伤组织出愈率最高。     

羊草的愈伤组织诱导

用MS培养基添加不同浓度的2,4-D对羊草根、茎、叶外植体进行愈伤组织诱导。结果表明,2,4-D在较低浓度下对羊草的根茎愈伤组织诱导效果比较好。在MS培养基中加入2,4-D浓度在0.1、0.5、1.0mg/L均可出现愈伤组织,但2,4-D浓度在0.5mg/L时愈伤组织出愈率最高,其次是1.0mg/L,然后是0.1mg/L。     

旱稻成熟胚愈伤组织诱导的影响因素

以旱稻品种鲲旱1号的种子为材料,研究了不同培养基成分及不同浓度的激素对愈伤组织诱导效率的影响。结果表明,NB培养基较MS培养基更加有利于旱稻愈伤组织的诱导和继代培养;当2,4-D浓度为2 mg/L时的愈伤组织出愈率最高;添加脯氨酸不利于鲲旱1号愈伤组织的形成和生长;选用麦芽糖作为碳源可明显提高愈伤组织的诱导率。     

抗旱调控基因DREB2A转化辽荞5号的研究

通过农杆菌介导,将来源于干旱诱导下拟南芥的干旱调控基因DREB2A导入辽宁甜荞品种辽荞5号中,以提高其耐旱性。通过正交试验分析影响农杆菌转化的相关因素,建立并优化了转化体系。结果表明:(1)愈伤组织诱导过程中,选择子叶作为愈伤组织诱导受体,诱导愈伤培养基激素的配比为:2,4-D浓度为2 mg/L;6-BA浓度为1 mg/L;(2)农杆菌转化过程中,最适农杆菌OD_(600)为0.5、侵染时间3 min、共培养3 d,乙酰丁香酮浓度100 mg/L、筛选培养羧苄霉素浓度50mg/L,草丁膦浓度100 mg/L;(3)通过对转化植株的PCR检测,印证了DREB2A基因已转化到辽荞5号中;(4)通过对转化植株的生理检测初步表明转基因荞麦比非转基因荞麦具有更高的抗旱性。     

2,4-D和KT对大花金挖耳愈伤组织诱导的影响

以大花金挖耳无菌苗的根为外植体,研究了不同质量浓度的2,4-D和KT对愈伤组织诱导的影响。结果表明:低浓度的2,4-D(0.25~0.5 mg/L)单独使用促进愈伤组织形成,随着2,4-D质量浓度的增加,愈伤组织的形成逐渐变弱;在培养基、2,4-D和KT诱导愈伤组织的正交试验中,发现2,4-D对愈伤组织诱导率的影响最大,基本培养基次之,KT影响最小,对愈伤组织诱导的较优组合为B5 2,4-D 0.1 mg/L KT 0.4mg/L;在优化诱导愈伤组织的激素浓度配比试验中发现B5 2,4-D 0.1 mg/L KT0.2~0.4 mg/L对大花金挖耳愈伤组织的诱导率为100%,且产生的愈伤组织多为淡黄色、质地疏松、生长快、褐化时间长,适合于大花金挖耳愈伤组织的诱导。     

几个马铃薯栽培种的茎段愈伤组织诱导

试验采用继代培养中的多余茎段进行愈伤组织的诱导,尽可能充分和有效地运用有限的试管苗生长量获取用于诱变的愈伤组织.研究表明：大多数马铃薯品种茎段在浓度为0.5-1.0mg/L的2,4-D和1.0mg/L的KT配合作用下都能获得胚性愈伤组织.添加浓度为0.5mg/L的NAA能够增进2,4-D和KT对夏坡蒂的诱导效应,获得最好的愈伤组织.而高于2.0mg/L的激素浓度会产生体积过大、膨松、褐变的非胚性愈伤组织,不能得到胚性愈伤组织和再生植株.     

玉米再生体系建立及其影响因素的研究

以玉米骨干自交系K12、137、87-1和综3的幼胚为外植体,研究基因型、胚龄、继代次数、诱导（分化）培养基中激素浓度对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导、保持和植株分化的影响。结果表明,基因型是玉米幼胚培养能力的主要影响因子。中等大小（1.0～2.0 mm）的幼胚都具有较高的愈伤组织诱导率。2,4-D浓度对玉米幼胚的胚性愈伤组织诱导率有很大的影响,而且不同基因型的最大诱导率所需的2,4-D浓度也不相同。为防止2,4-D浓度过高引起无性系的变异,本试验确定的诱导培养基的2,4-D浓度为2.0 mg/L。继代培养基中1 mg/L的2,4-D对胚性愈伤组织诱导和保持起关键作用。最佳分化培养基为N6盐＋B5有机＋2.0 mg/L甘氨酸＋1 g/L CH＋1.0 mg/L 6-BA＋30 g/L蔗糖。     

不同基因型甜高粱愈伤组织与丛生芽诱导条件优化

【目的】探讨不同培养基类型和激素配比对不同基因型甜高粱的愈伤组织和丛生芽诱导的影响,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。【方法】以不同基因型甜高粱辽甜三号和北甜三号的成熟种子为外植体,在MS培养基中添加不同浓度2,4-D及2,4-D与NAA、6-BA或KT配比组合,对愈伤组织和丛生芽进行诱导;分别在B5、N6、MS和1/2MS培养基中添加不同2,4-D、NAA、6-BA组合,对愈伤组织进行诱导。【结果】适宜北甜三号愈伤组织和胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋2.0mg/L2,4-D＋0.1mg/LNAA,辽甜三号为MS＋2.0mg/L2,4-D＋0.2mg/LNAA,可获得质量较好的愈伤组织,愈伤组织块大且色泽鲜艳。适于两个基因型甜高粱丛生芽诱导的最佳基本培养基为MS＋1.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA＋0.5mg/L2,4-D,但不同基因型的诱导率有明显差异,以辽甜三号的诱导效果较好。【结论】不同浓度2,4-D与其他激素配比对两个基因型甜高粱的愈伤组织诱导有明显影响,以对辽甜三号的诱导效果较好;在MS、B5、N6、1/2MS基本培养基中,MS可作为愈伤组织诱导的最佳基本培养基。     

不同基因型甜高粱愈伤组织与丛生芽诱导条件优化

【目的】探讨不同培养基类型和激素配比对不同基因型甜高粱的愈伤组织和丛生芽诱导的影响,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。【方法】以不同基因型甜高粱辽甜三号和北甜三号的成熟种子为外植体,在MS培养基中添加不同浓度2,4-D及2,4-D与NAA、6-BA或KT配比组合,对愈伤组织和丛生芽进行诱导;分别在B5、N6、MS和1/2MS培养基中添加不同2,4-D、NAA、6-BA组合,对愈伤组织进行诱导。【结果】适宜北甜三号愈伤组织和胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA,辽甜三号为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA,可获得质量较好的愈伤组织,愈伤组织块大且色泽鲜艳。适于两个基因型甜高粱丛生芽诱导的最佳基本培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D,但不同基因型的诱导率有明显差异,以辽甜三号的诱导效果较好。【结论】不同浓度2,4-D与其他激素配比对两个基因型甜高粱的愈伤组织诱导有明显影响,以对辽甜三号的诱导效果较好;在MS、B5、N6、1/2MS基本培养基中,MS可作为愈伤组织诱导的最佳基本培养基。     

郑麦9023胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

为建立高效稳定的小麦遗传转化体系,以小麦郑麦9023的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中不同质量浓度2,4-D、KT对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响,进而完成整个植株再生的进程。结果表明:以小麦郑麦9023的幼胚作为外植体来诱导愈伤组织,诱导效果最好的培养基是含有3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,出愈率最高达92.5%;愈伤组织进行继代培养的最佳培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮系继代时间为16 d;悬浮系中的成熟胚在基本培养基上可以发育成正常的植株。所建立的悬浮系可以用来进行小麦基因工程遗传改良和体细胞无性系突变体的筛选。     

玉米成熟胚愈伤组织诱导的初步研究

试验以H99、综31和郑58三个玉米自交系的成熟胚为外植体,利用正交试验设计L9(34),对影响愈伤组织诱导的基因型、培养基、2,4-D浓度和Ag NO3浓度4个因素进行了研究。结果表明:各因素对初级愈伤诱导率影响大小为基因型培养基2,4-D浓度Ag NO3浓度;对胚性愈伤诱导率影响大小为基因型Ag NO3浓度2,4-D浓度培养基。诱导中最优组合为综31+10 mg/L Ag NO_3+MN+2 mg/L 2,4-D,继代中最优组合为综31+10 mg/L Ag NO3+MN+1 mg/L 2,4-D,其初级愈伤诱导率为87.41%,胚性愈伤诱导率为29.74%。     

不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响

以萝卜直根形成层为试验材料,比较不同激素NAA、2,4-D和6-BA浓度配比对萝卜外植体形成愈伤组织诱导率和质量的影响。结果表明:(1)与不添加任何激素相比,不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织诱导效果明显。(2)6-BA分别与NAA、2,4-D配比诱导萝卜愈伤组织的比较表明,2,4-D较NAA更适于诱导萝卜愈伤组织。(3)6-BA与2,4-D浓度均为0.050~0.075 mg/mL的配比对萝卜愈伤组织诱导效果最好。     

粳型超级稻胚性细胞悬浮系的建立及植株再生

以北方粳型超级稻沈农265成熟胚为材料,对其胚性悬浮细胞系建立与植株再生进行了研究.结果表明,弱光下培养20 d,有利于成熟胚诱导出质量较好的愈伤组织,这些愈伤组织在添加2,4-D(3.0 mg/L)和脯氨酸(500 mg/L)的N<,6>固体培养基上进行状态调整后,可获得适于悬浮培养的胚性愈伤组织.悬浮培养时适宜的2,4-D浓度为2～3 mg/L;起始接种量以20 mg/mL的效果较好;最佳继代时间是7 d.悬浮细胞团先经固体继代培养获得愈伤组织小块,再将愈伤小块干燥处理2 h后进行分化,可显著提高植株再生率,愈伤组织绿点分化率和成苗率分别达58.6%和27.2%.