桃褐腐病防治及抗药性研究新进展

介绍了用于防治桃褐腐病菌的化学防治、物理防治、微生物防治及植物源农药防治等方法的研究进展,其中重点阐述了化学农药β梁微管蛋白抑制剂(BZIs)、甾醇脱甲基酶抑制剂(DMIs)、二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)、笨醌外部抑制剂(QoIs)和琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHIs)的抗菌机制及桃褐腐病菌的抗药性机理,最后展望了今后的研究方向.     

山西运城温室番茄灰葡萄孢对啶酰菌胺的抗性

针对山西运城温室番茄灰葡萄孢对杀菌剂啶酰菌胺的抗性进行调查与分析,从温室番茄病果和病叶上利用单孢分离法获得灰葡萄孢菌株105个。通过菌丝生长速率法测定菌株的EC_(50)值,结果表明,灰葡萄孢对啶酰菌胺的EC_(50)值为0.40～132μg/mL,抗性菌株81个,占测试菌株总数的77.14%;敏感性菌株24个。选取对啶酰菌胺表现敏感、低抗、中抗和高抗的菌株各10个,并对其SdhA、SdhB、SdhC和SdhD基因序列比对分析,结果显示, 30个抗性菌株SdhB的272位组氨酸发生点突变,而SdhA、SdhC和SdhD基因无突变。适应性分析显示抗性菌株与敏感性菌株在菌丝生长、产孢量、孢子萌发及致病性方面都存在明显差异。     

几种QoIs和DMIs杀菌剂对山东不同地区黄瓜白粉病菌的毒力差异及年度间的防效变化

为明确QoIs和DMIs杀菌剂防治黄瓜白粉病的有效性,在山东省黄瓜主产区采集黄瓜白粉病菌菌株,测定不同地区及不同年份的黄瓜白粉病菌对常用QoIs和DMIs杀菌剂的敏感性,并在泰安岱岳区进行3年的田间防治试验。结果显示,除氟硅唑以外,城阳黄瓜白粉病菌对QoIs和DMIs 2类杀菌剂的敏感性最低;淄川黄瓜白粉病菌对吡唑醚菌酯、醚菌酯、嘧菌酯和苯醚甲环唑的敏感性最高,对4种药剂的相对毒力倍数分别为7.29,19.66,27.40,250.00倍。与2011年相比,2013年和2017年常用QoIs和DMIs杀菌剂对泰安黄瓜白粉病菌的毒力均不同程度降低。泰安地区的田间防效结果显示,与2011年相比,2013年除吡唑醚菌酯外2类杀菌剂对黄瓜白粉病的防效均有不同程度降低;2017年几种杀菌剂对黄瓜白粉病的防效均有较大幅度的下降,其中吡唑醚菌酯、醚菌酯和己唑醇的防效下降尤为明显。综合室内和田间试验结果表明,山东省不同地区黄瓜白粉病菌对QoIs和DMIs两类杀菌剂的敏感程度有一定的异质性,并且随着使用时间的延长,泰安岱岳区黄瓜白粉病菌对常用杀菌剂的敏感度呈显著下降趋势,药剂对黄瓜白粉病的防治效果也逐年降低。     

等位基因特异性扩增技术鉴定慈姑对磺酰脲类除草剂抗药性

以抗感磺酰脲类除草剂慈姑为材料,采用ASPCR技术鉴定ALS功能区第324位氨基酸突变位点.结果表明,抗性慈姑生态型ALS第324位点发生了丙氨酸替代苏氨酸（感性生态型）的突变.同时发现,抗性慈姑生态型ALS第197位点也发生了非脯氨酸的替代突变.说明简便的ASPCR技术对ALS基因单碱基抗性突变鉴定是可行的.     

柑橘黑斑病菌与柚黑斑病菌对苯并咪唑类杀菌剂的抗性及其分子机制

为了对柑橘黑斑病和柚黑斑病提出更科学的化学防治方法,该文研究了柑橘黑斑病菌和柚黑斑病菌对杀菌剂多菌灵的抗性频率、抗性水平及其抗性分子机制。结果表明:在江西114个柑橘黑斑病菌株中发现了2个多菌灵抗性菌株,抗性频率为1.75%,抗性系数分别为5 333.6和379.2;在四川32个柑橘黑斑病菌株中发现了1个多菌灵抗性菌株,抗性频率为3.13%,抗性系数为303.3;在浙江23个菌株和重庆3个菌株中没有出现抗性菌株。在广东收集的54个柚黑斑病菌株中发现了1个抗性菌株,抗性频率为1.85%,抗性系数为13 719.5;在广西和福建分别收集的34个柚黑斑病菌株中没有发现抗性菌株。柑橘黑斑病菌和柚黑斑病菌对甲基硫菌灵和多菌灵存在正交互抗性,对嘧菌酯和多菌灵无交互抗性。因此,建议多菌灵可继续在柑橘黑斑病和柚黑斑病防治中使用,鉴于高抗菌株已出现,使用时应与其他作用机制的杀菌剂轮换使用。本实验还发现,柑橘黑斑病菌存在2种抗苯并咪唑类的分子机制,即β-微管蛋白基因上第198位氨基酸位点由谷氨酸突变为赖氨酸(抗性系数为5 333.6的菌株)和第200位氨基酸位点由苯丙氨酸突变为酪氨酸(抗性系数为379.2的菌株);而柚黑斑病菌抗苯并咪唑类的分子机制则与β-微管蛋白基因第198位氨基酸由谷氨酸突变为丙氨酸有关。     

河北省大豆主要病原真菌鉴定及防治药剂筛选

【目的】明确引起河北省大豆植株主要病害的病原真菌种类,筛选能有效抑制所鉴定病原菌的杀菌剂,为河北省大豆病害化学防治提供依据。【方法】对采自河北省的大豆主要病原真菌根据病症采用组织分离法纯化培养,初步利用超景深和正置光学显微镜分别进行菌落、菌丝和孢子形态学的观察鉴定,然后利用通用引物ITS1-ITS4对5种不同病症的致病菌株rDNA-ITS区进行PCR扩增、测序分析,采用MEGA 7.0中邻接法（neighbor-joining,NJ）构建系统发育树,分析病原菌种之间的亲缘关系,对具有特异性引物序列的病原菌进行分子鉴定,通过病害和病原菌宏观形态、显微特征与分子生物学技术相结合从而明确引起河北省大豆植株主要真菌病害的病原菌种类;采用菌丝生长速率法和不同种类杀菌剂在离体叶片或幼茎上对大豆主要病害的防治效果筛选防治药剂。【结果】通过病原菌的宏观形态、显微结构和分子序列综合分析,确定分离自河北省大豆主产区的病原菌分别为木贼镰孢(Fusarium equiseti）、大豆炭疽菌(Colletotrichum chlorophyti）、茎点霉菌（Phoma herbarum）、链格孢(Alternaria alternata）、嘴突凸脐蠕孢(Exserohilum rostratum）,对应病害分别为大豆根腐病、炭疽病、茎点霉叶斑病、大豆黑斑病、凸脐蠕孢叶斑病。毒力测定结果显示,5种病原菌对三唑类杀菌剂苯醚甲环唑、氟菌唑、叶菌唑和甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂吡唑醚菌酯均敏感,木贼镰孢对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂肟菌酯敏感,除木贼镰孢外的病原菌对酰胺类杀菌剂氟吡菌酰胺敏感,大豆炭疽菌和嘴突凸脐蠕孢对烷基多胺类杀菌剂辛菌胺敏感,大豆炭疽菌对有机硫类仿生杀菌剂乙蒜素敏感,EC₅₀值均低于10 μg·mL^-1;杀菌剂对大豆主要病害的防治效果结果显示,苯醚甲环唑、氟菌唑、叶菌唑、吡唑醚菌酯和肟菌酯对上述大豆主要病害防治效果均显著,氟吡菌酰胺对除大豆根腐病外的病害防治效果显著,辛菌胺、乙蒜素对大豆炭疽病和凸脐蠕孢叶斑病防治效果显著,防治效果分别达到90%以上。【结论】共鉴定出河北省大豆病原真菌及其对应病症病害5种;推荐三唑类甾醇抑制剂苯醚甲环唑、氟菌唑、叶菌唑和甲氧基丙烯酸酯类呼吸抑制剂吡唑醚菌酯作为河北省大豆主要真菌病害的优选兼治药剂。     

延边慈姑抗磺酰脲类除草剂的分子机制

以延边地区对磺酰脲类除草剂具抗、感性的慈姑为材料,采用RACE方法克隆了抗、感性慈姑的乙酰乳酸合酶(Acetolactate synthase,ALS)基因全长,分析了对除草剂抗、感性慈姑ALS基因c DNA编码区域的碱基差异,找出ALS基因的突变位点,为阐明慈姑对磺酰脲类除草剂抗性的突变机理提供分子依据。结果表明:与感性相比延边地区抗除草剂慈姑ALS基因共发生了7个碱基位点的突变,除了保守区域内第324位的苏氨酸(T3 24)突变为丙氨酸(A3 24)外,还包括非保守区域第17位的苏氨酸(T17)突变为脯氨酸(P17),而其他5个位点是氨基酸未改变的同义突变。这种错义突变和同义突变可能是延边地区抗性慈姑响应环境胁迫的分子基础。     

多主棒孢SdhB-H278R突变位点AS-real-time PCR定量检测体系的建立

【目的】建立一种快速、高效、定量检测黄瓜多主棒孢(Corynespora cassiicola)琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB)H278R突变的实时荧光定量PCR(AS-real-time PCR)检测方法,并进行效果验证。【方法】从北京市大兴区采集、分离纯化病原菌,获得24株多主棒孢的单孢菌株,采用菌丝生长速率法测定其对啶酰菌胺的EC50,随机选取4株敏感(S)和8株抗性(R)菌株测其菌丝生长速率、产孢量和致病性。采用引物对Cc-SdhB-F/R测定多主棒孢SdhB基因序列,检测SdhB的碱基变化。基于多主棒孢SdhB的相同核酸序列和SNP位点设计内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14,建立并优化AS-real-time PCR定量检测体系,并对引物的特异性、熔解曲线和灵敏度进行评价。利用该体系分别检测含有H278R不同突变比例的DNA和孢子悬浮液。【结果】测定的24个菌株中,敏感菌株占66.7%,EC50值为0.057—0.563μg·mL~(-1);抗性菌株占33.3%,EC50值为5.395—11.710μg·mL~(-1)。抗性和敏感菌株仅在菌丝生长速率方面存在显著性差异,且菌丝生长速率与EC50之间存在显著负相关。在产孢量和致病性方面不存在显著性差异。测序分析发现抗性菌株均携带SdhB-H278R突变。本研究设计的引物B-H278R-2F和B-H278R-2F2R14特异性强,仅对多主棒孢SdhB-H278R突变菌株的DNA有扩增条带,对其余供试菌株均无条带扩增。普通AS-PCR检测的灵敏度为91 pg·μL~(-1),而AS-real-time PCR的灵敏度可达9.1 pg·μL~(-1),灵敏度为普通AS-PCR的10倍。以基因组DNA为标准品,构建的AS-real-time PCR标准曲线ΔCT值与相对模板浓度的对数有良好的线性关系,相关系数为0.9857,扩增效率为92.59%。熔解曲线吸收峰单一,内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14分别在87.81℃和91.62℃处出现单一特异性峰。用DNA和孢子悬浮液对标准曲线进行验证,结果表明随着相对模板浓度逐渐降低,该检测体系的准确性逐渐升高且检测下限为5%,同时预期值与试验值呈线性相关(R~2=0.9998和R~2=0.9922)。【结论】建立了一种高效、定量、快速的AS-real-time PCR检测体系用于SdhB-H278R突变位点的检测,可为杀菌剂的抗性治理提供理论依据。     

套袋苹果黑点病发生规律及其对几种化学药剂的敏感性

经过5年的研究,初步明确了陕西苹果产区套袋苹果黑点病的病原菌及病害的发生规律。该病害是由粉红聚端孢TrictothecumroseumLink和点枝顶孢AcremoniumstictumLink共同引起的真菌病害;病原菌主要以菌丝体在枯枝和病果上越冬,其分生孢子主要靠风雨传播,从伤口入侵或直接从皮孔入侵;从苹果套袋后到9月份,病菌均可侵染果实;高温高湿是该病发生流行的条件;不同结果部位、不同质地果袋发病轻重不同;套袋苹果黑点病菌对杀菌剂多菌灵、甲基托布津敏感。     

湖北省灰葡萄孢抗药性测定及抗药分子机制研究

评价湖北省灰葡萄孢(Botrytis cinerea)群体抗药性水平,为防治灰霉病提供理论依据,评估了源于湖北省的96个灰葡萄孢菌株对4种杀菌剂的抗性。结果表明,大部分菌株对多菌灵、农利灵和菌核净敏感,抗性菌株出现的频率分别为5%、2%和3%;所有供试菌株均对环酰菌胺敏感,EC50为0.004~0.200μg/mL;对Bc-hch基因序列扩增和酶解谱带分析结果进一步证实了供试菌株对环酰菌胺敏感。抗性菌株抗药相关基因β-微管蛋白和组氨酸激酶基因的氨基酸序列比对结果显示,部分位点的突变是抗药性形成的可能机制之一,另外也发现了新的突变位点。     

山东省多主棒孢对三种常用杀菌剂的敏感性监测及对氟吡菌酰胺的抗性

[目的]由多主棒孢(Corynespora cassiicola)引起的黄瓜靶斑病是世界公认的黄瓜三大病害之一,严重影响着黄瓜的产量和品质.随着防治药剂的连续使用,其抗药性问题日益突出.本研究旨在明确山东省多主棒孢对常用杀菌剂的抗性情况,为黄瓜靶斑病的药剂防治提供理论依据,同时筛选高效混配药剂为多主棒孢的抗药性治理提供...     

Mitochondrial dynamics caused by QoIs and SDHIs fungicides depended on FgDnm1 in Fusarium graminearum

Fusarium head blight (FHB) caused by Fusarium graminearum is a devastating fungal disease on small grain cereal crops, because it reduces yield and quality and causes the mycotoxin contamination to the grain. Dynamins and dynamin-related proteins (DRPs) are large GTPase superfamily members, which are typically involved in the budding and division of vesicles in eukaryotic cells, but their roles in Fusarium spp. remain unexplored. Here, we found that FgDnm1, a DRP and homolog to Dnm1 in Saccharomyces cerevisiae, contributes to the normal fungal growth, sexual reproduction and sensitivity to fungicides. In addition, we found FgDnm1 co-localizes with mitochondria and is involved in toxisome formation and deoxynivalenol (DON) production. Several quinone outside inhibitors (QoIs) and succinate dehydrogenase inhibitors (SDHIs) cause fragmentated morphology of mitochondria. Importantly, the deletion of FgDnm1 displays filamentous mitochondria and blocks the mitochondrial fragmentation induced by QoIs and SDHIs. Taken together, our studies uncover the effect of mitochondrial dynamics in fungal normal growth and how such events link to fungicides sensitivity and toxisome formation. Thus, we concluded that altered mitochondrial morphology induced by QoIs and SDHIs depends on FgDnm1.     

马铃薯晚疫病菌抗药性研究现状

由于马铃薯晚疫病菌对常用杀菌剂产生抗药性,降低了化学防治晚疫病的效果,对马铃薯晚疫病的化学防治药剂及晚疫病菌抗药性的研究进展进行了综述,建议生产上应避免长期使用单一的杀菌剂,应与其它无交互抗性的药剂交替使用或混合使用,以避免或延缓抗药性的产生。     

致病疫霉(Phytophthora infestans)对杀菌剂 抗药性研究进展

综述了致病疫霉（Ｐhytohthora infestans)对内吸性杀菌剂甲霜灵、霜脲氰和保护性杀菌剂代森锰锌和百菌清的抗性研究进展，总结了当前用于防治晚疫病的药剂种类并提出了抗性治理策略，对于致病 霉抗性遗传研究和抗性治理及药剂防治都具有一定的参考价值。     

柑橘炭疽病高效杀菌剂的筛选及抗药性菌株的发现

采用生长速率法,用50%多菌灵可湿性粉剂(WP)、80%代森锰锌可湿性粉剂(WP)、10%苯醚甲环唑水分散剂(WG)、45%咪鲜胺水乳剂(EW)和25%嘧菌酯悬浮剂(FW)5种杀菌剂对来自广东不同地区和不同柑橘品种的10个柑橘炭疽病菌菌株进行了毒力测定.结果表明,咪鲜胺对柑橘炭疽病菌具有最好的抑制效果,其次是苯醚甲环唑;所有供试菌株对嘧菌酯和代森锰锌都具有一定程度的抗药性;不同地区的菌株对多菌灵的敏感性存在明显的差异,其中菌株CCMZ035、CCMZ004、CCST003和CCST026对多菌灵表现出很强的耐药性(抗药性).因此,咪鲜胺和苯醚甲环唑可作为防治柑橘炭疽病的首选药剂.     

竹荪球腐烂致病真菌种类鉴定与药剂筛选

对采集于贵州省水城县、清镇市等地竹荪种植基地的腐烂竹荪球进行病原菌分离、培养、鉴定,分离到4种致病真菌:茄病镰刀菌[Fusarium Solani(M art.)Sacc.]、绿色木霉(Trichoderma viridePers.)、匍枝根霉(Rhizopus stoloniferL ind)、拟青霉(Paecilomyces variotiBain.)。用70%甲基托布津、50%多菌灵、施宝功、抑唑霉、70%敌克松等5种杀菌剂对以上4种病菌进行室内抑菌试验,施宝功500倍液对以上4种病菌的抑制率分别为71.3%,67.4%,58.7%和73.2%,甲基托布津500倍液对以上4种病菌的抑制率分别为68.4%,64.5%,60.7%,63.6%。多菌灵、抑唑霉、敌克松的防治效果不明显。     

重庆万州红桔褐斑类病害病原菌的分离鉴定及抑菌药剂筛选

近年来,一种严重危害重庆万州红桔的真菌性病害大规模流行,已成为生产上亟待解决的难题.该试验取田间病果、病叶及病枝样本进行发病组织培养和菌株分离纯化,根据病原菌的形态特征和致病性进行种类鉴定,并选用19种杀菌剂分别对致病病原菌进行抑菌活性测定.结果表明:重庆万州红桔上发生的病害为以褐斑类病原菌危害为主的复合型病害,致病病原菌为交链格孢菌Alternaria Nees ex Wallr.和炭疽病菌Colletoirichum gloeospori-oides Penz..不同药剂对两种致病病原菌菌丝生长的抑制作用的差异具有统计学意义.其中25%腐霉.福美双600倍、25%咪鲜胺750倍、60%甲硫.异菌脲500倍、拿敌稳(肟菌脂25%.50%戊唑醇)3 000倍等杀菌剂对两种病原菌的抑菌率达100%,凯润(吡唑醚菌酯250g/L)2 000倍对两种病原菌的抑菌率也达90%以上.根据室内抑菌药剂筛选结果、防治用药成本和抗药性等综合因素考虑,推荐25%咪鲜胺可湿性粉剂750倍为生产上化学防治首选药剂,混用、轮用药剂可选择上述其他药剂及药剂组合.     

丛枝菌根真菌菌剂的生产及应用概述

丛枝菌根真菌(AM真菌)是一种新型的微生物肥料,对减少化肥和农药施用,减少环境污染,提高农作物产量等方面具有不可替代的作用。介绍了AM真菌的特点及我国生产的微生物肥料种类,对AM真菌菌剂的生产方法及其应用情况进行了概述,指出AM真菌菌剂的应用前景。