新疆酿酒葡萄园可培养酵母菌多样性分析

对新疆石河子和吐鲁番2个地区酿酒葡萄园可培养酵母菌的种类鉴定及分布进行研究,旨在明确酿酒葡萄园主要酵母种类及分布规律,为酵母菌资源的开发利用打下基础。对酿酒葡萄园果实表面和土壤进行稀释后平板划线分离纯化,挑取单菌落,并对菌落和细胞显微特征进行形态观察。对分离获得的酵母菌株进行WL培养基培养观察,区分聚类,选取其代表菌株进行糖发酵及碳源利用试验,且对其26S rDNA D1/D2区序列测序鉴定并进行系统进化分析。结果发现,从酿酒葡萄园土壤及果实表面中共分离获得41株酵母菌株,其中在石河子地区分离获得28株,经鉴定属于隐球酵母属(Cryptococcus)、有孢汉逊酵母属(Hanseniaspora)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、棒孢酵母属(Clavispora)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、红酵母属(Rhodotorula)、假丝酵母属(Candida)、Rhodosporidiobolus和Kazachstania等10属13种,在吐鲁番地区共分离获得13株,经鉴定属于棒孢酵母属(Clavispora)、假丝酵母属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)、隐球酵母属(Cryptococcus)、Kazachstania和Rhodosporidiobolus等6属6种。结果表明,新疆酿酒葡萄园的酵母菌组成具有较为丰富的多样性,其应用价值值得进一步研究。     

神索葡萄自然发酵酵母菌群研究

利用WL营养琼脂培养基,对宁夏御马葡萄酒厂的神索葡萄自然发酵过程中不同阶段分离得到的105株葡萄酒相关酵母进行初步鉴定和聚类,进而对代表性菌株进行26S rDNA D1/D2区的序列分析。结果表明:供试酵母菌株经分类鉴定应归入4属5种,分别是葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum、毕赤克鲁维酵母Pichia kluyveri、假丝酵母Candida zemplinin、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae和巴氏酵母Saccharo-myces pastorianus,分别占分离菌株总数的3%、8%、1%、1%和87%;非酿酒酵母non-Saccharomyces在前期、中期和后期的数量分别占各发酵阶段菌株总数的24.7%、3.9%和0%,呈动态减少趋势。     

西藏拉鲁湿地土壤酵母菌多样性及产胞外 酶活性菌株分布特性研究

采用平板稀释法从西藏拉鲁湿地土壤中分离酵母菌,开展城市湿地酵母菌多样性研究。结合经典分类法及26S rDNA D1/D2区域序列分析,对获得的酵母菌菌株进行系统分类,并进行产胞外酶活性菌株的皿内初筛。结果显示,分离得到的83株酵母菌分属于隐球菌属Cryptococcus、假丝酵母属Candida、原囊菌属Protomyces、红酵母属Rhodotorula及孢囊线黑粉酵母Cystofilobasidium等5个属16个种,其中胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa相对丰度最高,约26%,其次为维多利亚隐球酵母Cryptococcus victoriae和山杨隐球酵母Cryptococcus aspenensis;多样性分析表明,LhWS6样点的酵母菌多样性最丰富,LhWS9样点则最低;产胞外酶活性菌株初筛结果表明,25℃下产脂肪酶活性菌株比例最高,为67%,而4℃下产淀粉酶活性菌株数最多,为49株。另外,低温条件下产淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和几丁质酶的活性菌株比例均高于常温条件。结果表明拉鲁湿地土壤酵母菌总体种类较丰富,但每个样点的种类相对单一,说明湿地生境或人为活动一定程度影响到该生态环境酵母菌的种群分布,开发青藏高原耐低温、产胞外酶等活性菌株具有一定的应用前景。     

南极德雷克海峡表层海水酵母菌多样性研究

为了研究德雷克海峡的微生物多样性,采集南极德雷克海峡表层海水,通过传统分离培养法获得可培养的酵母菌株,对其18S r DNA保守序列进行测序及系统发生分析。结果表明:共分离出45株酵母菌,属于9个属,12个种;其中,优势属为Meyerozyma属,优势种为Meyerozyma guilliermondii。对所有菌株的过氧化氢酶活性进行检测,发现23株酵母菌具有强烈的过氧化氢酶活性,13株具有弱过氧化氢酶活性,即可分解过氧化氢的菌株占总菌株数的80%。     

产几丁质酶酵母菌的筛选与鉴定

从番茄果实表面筛选到1株产几丁质酶酵母菌株CY-6,该菌株产生的几丁质酶对番茄镰刀菌果腐病菌(Fusarium oxysporum)有较强的抗菌活性并具有较广的抗菌谱。形态及生理生化特征测定结果表明:菌株CY-6与伊萨酵母属(Issatchenkia)中的陆生伊萨酵母(I.terricola)种的特征基本一致;测定了该菌株的26S rDNAD1/D2区域序列并根据26S rDNA构建了系统发育树;在系统发育树中,菌株CY-6与陆生伊萨酵母形成一个类群,序列同源性高达99.6%。因此,将菌株CY-6鉴定为陆生伊萨酵母。     

广西毛葡萄产区野生葡萄酒酵母种群分布与系统进化分析

[目的]对广西毛葡萄产区野生葡萄酒相关酵母菌的种类进行鉴定及分布研究,明确毛葡萄产区主要酵母种类及分布规律,为当地酿酒酵母资源的开发利用打下基础.[方法]从葡萄果实表面和果实自然发酵汁中分离、纯化野生葡萄酒相关酵母,利用WL培养基对分离获得的酵母菌株进行分类,从每一类型中选取代表菌株进行26S rDNA基因测序鉴定并进行系统进化分析.[结果]从葡萄果实表面及自然发酵汁中共分离获得180株酵母菌株,根据菌株在WL培养基上的颜色及菌落形态差异将180株酵母菌归为5类.26S rDNA基因序列分析结果表明,20株代表菌株分属于6个属9个种,分别为:汉逊酵母属的Hanseniaspora thailandica、H.opuntiae、H.occidentalis和H.guilliermondii;毕赤酵母属的Pichia pastoris;伊萨酵母属的Issatchenkia terricola;酿酒酵母属的Saccharomyces cerevisiae;Saturnispora属的S.diversa和红酵母属(Rhodutorula,未鉴定到种).葡萄汁自然发酵过程中由H.thailandica启动发酵,随后出现Hthailandica、H.opuntiae、H.occidentalis、H guil liermondii和S.diversa,最后由S.cerevisiae逐渐主导并控制发酵.[结论]在广西都安县毛葡萄产区生态环境中存在6个属9个种的葡萄酒相关酵母菌,其中H.guilliermondii是毛葡萄果表优势酵母菌种;在毛葡萄自然发酵汁中存在汉逊酵母的4个不同种及S.diversa和S.cerevisiae,随着发酵环境的变化此消彼长.     

云南弥勒葡萄酒产区云中舞葡萄酵母菌多样性研究

【目的】云南弥勒是中国西南地区传统的葡萄酒产区,以该产区云中舞葡萄为试验材料,对其果皮以及自然发酵过程中酵母菌的多样性进行研究。【方法】利用WL培养基的菌落培养形态,酵母细胞微观形态和分子生物学相结合的分类鉴定方法对弥勒云中舞葡萄果皮以及自然发酵过程中酵母菌进行分离鉴定和多样性分析。【结果】从云中舞葡萄分离得到的80株酵母菌共分为5个培养类型,采用26S r DNA D1/D2区序列分析对选出的具有典型特征的15株酵母菌进行了分子生物学鉴定,序列比对分析和WL培养基聚类表明80株被测菌株鉴定为5属5种,分别为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、陆生伊萨酵母(Issatchenkia terricola)、库德毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)和桔假丝酵母(Candida quercitrusa),显示了酵母菌种类多样性;其中葡萄汁有孢汉逊酵母占了所分离酵母总数的43.18%,为弥勒云中舞葡萄相关酵母菌的优势种。通过构建15株被测菌株与相关模式菌株的系统发育树,分析酵母菌的遗传多样性和菌株间的亲缘关系,结果表明:各供试菌株均与各自相关模式菌株聚为一枝,和序列比对鉴定结果相一致。另外,鉴定为同种酵母的不同菌株间以及和模式菌株间的亲缘关系具有一定的差异,显示了一定的遗传多样性。【结论】云南弥勒云中舞葡萄相关酵母菌具有多样性的特点,本研究为进一步选育优良的本土葡萄酒酵母提供了材料和参考。     

藏灵菇中有益微生物的分离与鉴定

从藏灵菇样品中分离出5株乳酸菌、3株醋酸菌和2株酵母菌.依据其形态、培养特征、部分生理学特性及细菌16S rRNA序列比对的结果,初步鉴定5株乳酸菌分属于乳杆菌属、乳球菌属和明串珠菌属;3株醋酸菌为醋杆菌属中3个不同种;2株酵母菌分属于酒香酵母属和克鲁维酵母属.     

喀什地区土壤放线菌区系及其拮抗植物病原真菌的研究

采用常规方法研究了喀什地区土壤中的放线菌区系和对植物病原真菌的拮抗性.结果表明喀什地区土壤中含有7个属的放线菌,以链霉菌属为主,占供试土壤中放线菌数量的96.9 %;从各种土壤类型所分离的放线菌数量上看,耕作土＞林地土＞草甸土＞沼泽土＞盐渍土＞风沙土;供试土样中的链霉菌可分为11个类群,其中优势类群为白孢类群,占链霉菌总数的23.2 %.对其分离得到放线菌406株,以14种植物病原真菌为靶标菌进行平板拮抗试验,得到42株拮抗活性菌株,占供试放线菌总数的10.3 %,发酵复筛试验结果表明有16株(RI＞80 %)供试菌株对14种靶标菌表现出了较好的生防效果,占供试菌株的1.2 %;其中对苹果轮纹病菌、番茄早疫病菌、油菜菌核病菌和小麦纹枯病菌的生防菌(RI＞80 %)最多.     

生防酵母菌株的分离筛选及其防治苹果果实轮纹病效果

为有效防控采后苹果果实轮纹病,从泰安市三地果园不同果树的叶片和果实中分离出30株酵母菌,分别进行离体抑菌活性测定和活体防病效果筛选,其中4株酵母菌抑菌活性较强,对4株酵母菌不同处理液对病原菌生长的影响、不同浓度下的防治效果及在苹果果实上的生长定殖动态等进行了研究。结果表明:酵母菌株H3、T2、T3、Z8对苹果轮纹病菌抑菌作用较强,第8 d的抑菌率分别为91.46%、91.06%、77.20%、88.66%。接种浓度为1×108cfu/m L的酵母菌7 d后,其防病效果分别是65.1%、82.5%、69.8%、84.1%。培养原液和菌悬液对病原菌抑制作用较强,菌落平均直径小于4 cm。显微镜观察发现只有菌株T3具有重寄生作用。酵母菌与病菌菌丝共培养试验中,酵母菌对菌丝生长量的抑制率都在99%以上。酵母菌浓度越高,防病效果越好,其中菌株Z8的防治效果达到59.4%。4株酵母菌在YPD培养基和苹果伤口中呈指数型增长,在YPD培养基中24 h达到峰值,在苹果伤口上48 h达到峰值。经形态学和分子生物学初步鉴定,4株酵母菌均属于季也蒙迈耶氏酵母(Meyerozyma guilliermondii)。     

兔眼蓝莓幼果内生真菌多样性及其抑菌活性鉴定

采用组织分离法和对峙培养法研究兔眼蓝莓幼果内生真菌多样性及其对6种植物病原真菌的拮抗作用,筛选具有抑菌作用的内生真菌。结果表明:从兔眼蓝莓幼果中共分离得到25株内生真菌,利用菌株rDNA-ITS序列进行blastn比对,将25株菌株划分为12属19种,相似度为97%～100%。其中,子囊菌门真菌共9属14种共20株,担子菌门有3属5种。间座壳属真菌为子囊菌门菌株的优势属,占子囊菌门菌株的25%。兔眼蓝莓幼果内生真菌Shannon-Wiener多样性指数(H)为2.287 0,Pielou均匀度指数(J)为0.920 3,Margalef丰富度指数(R)为3.417 3。在25株兔眼蓝莓幼果内生真菌中,裂褶菌属菌株G6对5种病原菌抑制率在40%以上,G18对4种病原菌抑制率在45%以上,抑制效果较好。     

内蒙古西部赤霞珠葡萄自然发酵酵母菌群的动态变化

在无菌条件下,对内蒙古西部地区赤霞珠葡萄汁进行自然发酵,分别在发酵初、中、后期分离酵母菌株,采用WL营养琼脂对其进行形态学分类,采用基于酵母5.8S rRNA-ITS区域的RFLP(restriction fragment length polymorphism)分析对分类酵母菌株进行分子生物学鉴定,统计不同发酵时期发酵液中酵母菌株的种类及数量。结果表明,分离到的327株酵母菌分属于5个属的5个酵母菌种,分别是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)、克鲁维毕赤氏酵母(Pichia kluyveri)、浅黄隐球酵母(Cryptococcus flavescens)及葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum);自然发酵初期,葡萄汁有孢汉逊酵母、克鲁维毕赤氏酵母的数量占据优势,分别占分离总菌株数的64.22%、17.43%;随着发酵进行,非酿酒酵母(non-Saccharomyces)菌株的数量有所减少,酿酒酵母的数量逐渐增加,至发酵后期,发酵液中仅能检测到酿酒酵母的存在。这表明内蒙古西部地区野生酵母菌种较为丰富,WL营养琼脂形态学分类法结合酵母5.8S rRNA-ITS区域的RFLP分析能够快速分类、鉴定野生酵母菌种,实时监测发酵液中酵母菌群的动态变化趋势。     

牛粪酵母菌的分离鉴定及其碳源代谢分析

牛粪中的酵母菌是重要的资源,在牛粪发酵的过程中具有重要作用。为了分离、鉴定牛粪中可培养的酵母菌,并研究其碳源代谢指纹图谱,以发酵牛粪为材料,采用稀释涂布平板法分离牛粪中的酵母菌,经菌落观察和镜检后,采用Biolog全自动微生物鉴定系统对分离菌株进行鉴定。结果表明,从发酵牛粪中共分离得到7株酵母菌,并且鉴定到了种水平,其中有3株为白吉利毛孢子菌(Trichosporon beigelii),2株为约翰逊锁掷孢酵母(Sporidiobolus johnsonii),1株为菱形伊萨酵母(Issatchenkia scutulata),1株为隐球酵母属的Cryptococcus tsukubaensis。分离得到的4种酵母菌的碳源代谢能力和同化能力存在差异,Trichosporon beigelii能够利用的碳源种类最多,具有较强的环境适应性,其次为Issatchenkia scutulata、Sporidiobolus johnsonii、Cryptococcus tsukubaensis;糊精是能被大部分酵母菌代谢的唯一碳源。牛粪中酵母菌代谢的特征性碳源信息及优势酵母菌菌株对于牛粪的快速腐熟堆肥具有一定的指导意义。     

火棘抑菌内生真菌的筛选与拮抗植物病原菌作用研究

采用常规分离方法从火棘的茎、叶、果实中分离得到15株内生真菌,以小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌等9种病原真菌作靶标菌,筛选出了一株具有较高抑菌活性的菌株-J4,采用形态学观察和ITS序列测定相结合的方法对J4进行鉴定。结果表明,J4菌株为子囊菌亚门间座壳属(Diaporthe)真菌。     

天山一号冰川产蛋白酶酵母菌的筛选及其系统发育分析

[目的]筛选天山一号冰川底部沉积层耐低温的产蛋白酶菌株,研究其生理生化特性并做系统发育分析.[方法]以天山一号冰川底部沉积层中耐低温产蛋白的酵母菌株为材料,用Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(YPD)培养基活化60株酵母菌;再用选择性培养基筛选产蛋白酶的菌株,观察菌落形态;测定产酶菌株最适温度;最后基于26S r DNA基因D1/D2区序列进行系统发育分析.[结果]从60株酵母菌中共筛选出10株产蛋白酶菌株,其中产酶优势菌为BCY-8、BCY-20,产酶酵母细胞平均大小为2.60～5.00μm,最适生长温度为24℃.经系统发育分析可知,10株产酶酵母菌属于隐球菌(Cryptococcus)、红酵母属(Rhodotonla)、南极酵母(Antarcticyeast)、Uncultured fungus、Mazocraeoides gonialosae.[结论]研究可为低温蛋白酶生物技术的研发奠定基础.     

苹果原料中酵母菌的分离鉴定

利用酵母粉-葡萄糖琼脂培养基对15个批次苹果原料样本中的酵母菌进行分离，并用API 20C AUX菌种鉴定系统进行鉴定，得到的25株酵母菌分别属于假丝酵母菌属、酿酒酵母菌属和克勒克酵母菌属的6个种：克柔/平常假丝酵母菌(Candida krusei)13株，酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)5株，克勒克酵母菌属酵母菌(Kloeckera spp.)2株，木蓝假丝酵母菌(C.magnoliae)2株，热带假丝酵母菌(C.tropicalis)和乳酒假丝酵母菌(C.kefyr)各1株，鉴定准确率均超过95％，其中模式菌酿酒酵母的鉴定准确率为98.7％，相似度1.00；鉴定评价均为“好”。该系统能够快速、准确地鉴定苹果原料中的酵母菌。     

梨采后病害拮抗菌的分离与筛选

以梨采后病原菌链格孢菌(Alternaria alternata)、镰刀菌(Fusarlum poae)、毛霉菌(Mucoraceae racemosus)为靶标菌,从各种水果和叶片表面分离到89株细菌;通过平板对峙试验,筛选出对梨链格孢菌有拮抗作用的细菌10株,占菌株总数的11.2%;对梨镰刀菌有抑制作用的细菌15株,占菌株总数的16.9%;对梨毛霉菌有抑制作用的细菌11株,占菌株总数的12.4%。按抑菌率的大小,将拮抗菌分为强、中、弱3类;对3种病原菌均有很好抑制作用的是HM3和XY1。     

红肉蜜柚内生菌的分离及抑菌活性分析

选取牛肉膏蛋白胨、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)和高氏1号3种培养基,利用组织块法对红肉蜜柚(Citrus grandis)果实的内生菌进行分离纯化,得到9株菌株,经生物学性状分析,9株菌株均为放线菌,分属于诺卡氏菌属(Norcardia)和链霉菌属(Streptomyces)。采用平皿对峙法测定供试菌株的拮抗活性,有6株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的66.7%,其中1株对大肠杆菌(Escherichia coli)、4株对金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、3株对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有明显的抑菌效果;在3种柑橘病原菌的抑菌试验中,有7株菌株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的77.8%,其中7株对指状青霉(Penicillium digitatum Sacc.)、3株对意大利青霉(Penicillium italicum Wehmer)、3株对柑橘链格孢(Alternaria citri Ellis et.Pierce)的抑菌率超过75%。菌株P1、R2对3种柑橘病原菌均有很高的抑菌活性。     

天山一号冰川产淀粉酶酵母菌的筛选及其系统发育分析

[目的]筛选并分析天山一号冰川冰层产淀粉酶的低温酵母菌。[方法]对天山一号冰川冰层含冰冻土产低温淀粉酶的低温酵母菌菌株进行筛选、纯化,并对其生理多样性和系统发育多样性进行研究。[结果]从天山一号冰川冰层含冰冻土中分离出60株酵母菌,并从中筛选出6株产低温淀粉酶的菌株,根据细胞菌落形态、菌体特征和26S rDNA D1/D2区域序列系统发育分析,6株菌分别隶属于红酵母属(Rhodotorula)、隐球菌属(Cryptococcus)和掷孢酵母属(Sporobolomyces),最适生长温度为20~24℃,为兼性耐冷细菌。[结论]研究可为了解冰川酵母菌的系统发育多样性以及低温淀粉酶的生物技术研发奠定基础。     

药用植物马蔺的内生真菌分离及其抑菌活性的研究

[目的]研究药用植物马蔺内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征。[方法]通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。[结果]从马蔺不同组织器官中分离出32株内生真菌,以根部的最多,茎叶次之;经形态学初步分类鉴定其属于3个目,3个科,4个属。其中,有22株内生真菌对2种或2种以上的植物病原真菌指示菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的68.8%;有12株内生真菌对2种或2种以上的供试细菌指示菌具有不同程度的抑制作用,占分离菌株总数的37.5%;有7株内生真菌对3种以上的植物病原真菌指示菌具有明显的抑制作用,占菌株总数的21.9%;有2株内生真菌对2种供试细菌指示菌有明显的抑制作用,占分离菌株总数的6.3%。马蔺内生真菌对供试植物病原真菌指示菌和供试细菌指示菌有明显抑制作用,且抑制植物病原真菌的范围较宽;2株高活性菌株来源于马蔺叶部,对5种供试真菌指示菌具有明显抑制作用;2株高活性菌株来源于马蔺根部,对2种供试细菌指示菌具有明显抑制作用;1株高活性菌株对4种供试真菌指示菌和1种供试细菌指示菌有明显抑制作用。这5株高活性内生真菌菌株属于束丝菌属、镰孢霉属、梭孢霉属和组丝核菌属。[结论]药用植物马蔺具有丰富的内生真菌资源,并具有明显的抑菌活性。