羧甲基赖氨酸的毒理学研究进展(英文)

晚期糖基化终末产物(Advanced Glycation End-products,AGEs)是蛋白质、脂质或核酸等大分子物质的非酶糖基化产物。其中,羧甲基赖氨酸(CML)是AGEs的主要结构成分之一,在体内广泛分布,其在生物体内及食品加工和加热过程中均有生成。研究表明,羧甲基赖氨酸(CML)作为AGEs的主要抗原表位,在糖尿病及多种并发症以及衰老的发生发展过程中起着重要作用。该研究对羧甲基赖氨酸(CML)的主要来源、毒理危害以及控制等进展进行综述。     

根皮苷对平邑甜茶根系TCA循环酶的影响

【目的】研究平邑甜茶根系TCA循环对根皮苷的响应,为深入探讨根皮苷等酚酸类物质在苹果连作障碍中造成的伤害机理提供参考。【方法】以根皮苷和根皮苷﹢KMnO4(两者摩尔浓度比4﹕1)处理盆栽平邑甜茶植株,测定根系呼吸速率、TCA循环相关的9种酶活性、根皮苷的含量。【结果】4 mmol•L-1根皮苷处理抑制了根系基础呼吸速率,显著抑制了柠檬酸合酶(CS)、顺乌头酸酶、异柠檬酸脱氢酶 (ICDH)、琥珀酸硫激酶(SCS)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、延胡索酸酶(FUM)、苹果酸脱氢酶(MDH)的活性。根皮苷﹢KMnO4处理显著提高了CS、顺乌头酸酶、MDH活性,分别是对照的3.79倍、1.27倍、1.11倍;也不同程度地提高了SCS、ICDH、SDH和FUM活性。4 mmol•L-1根皮苷处理显著提高了α-酮戊二酸脱氢酶系(α-KGDH)和丙酮酸脱氢酶系(PDH)的活性,而根皮苷﹢KMnO4处理明显降低了α-KGDH和PDH的活性但仍明显高于对照水平。根皮苷﹢KMnO4处理土壤中根皮苷的含量显著低于根皮苷处理。【结论】4 mmol•L-1根皮苷抑制平邑甜茶根系呼吸速率,降低根系TCA循环7种酶活性,1 mmol•L-1 KMnO4能缓解上述不利影响。     

苹果树腐烂病菌发酵液中根皮苷主要降解成分的分析

【目的】明确苹果树腐烂病菌致病过程中对降解根皮苷发挥主要作用的物质,为揭示该病原菌的致病机理提供理论依据。【方法】以根皮苷为碳源发酵培养苹果树腐烂病菌10 d后,测量菌丝干质量及病原菌对根皮苷的降解率;以淀粉为碳源获取病原菌30 d的无菌发酵液,进一步分离发酵液中的有机酸和蛋白类物质。用HPLC法分别检测病原菌、淀粉无菌发酵液、有机酸类、蛋白类物质及发酵剩余液对根皮苷的降解作用。【结果】以根皮苷为碳源发酵培养病原菌10 d后,每100 mL发酵液中菌丝干质量为48 mg,病原菌对根皮苷的降解率为92.46%,发酵液对根皮苷的降解率为99.88%。1 mg/mL蛋白类物质与根皮苷作用5 d的降解率为90.4%,有机酸类对根皮苷的降解率仅为1.6%,发酵剩余液对根皮苷的降解率为5.9%。根皮苷的降解率随蛋白液质量浓度的增加和作用时间的延长而升高。【结论】在根皮苷降解过程中起主要作用的物质为苹果树腐烂病菌代谢产生的蛋白,其可能为细胞壁降解酶类。     

沙田柚幼果中柚皮苷提取工艺研究

[目的]研究沙田柚幼果中柚皮苷的提取工艺。[方法]以柚皮苷的含量为指标,采用正交试验法进行优选,并用高效液相法测定柚皮苷含量。[结果]沙田柚幼果中柚皮苷最佳提取工艺为10倍量浓度50%乙醇,在50℃条件下提取1.5 h。[结论]该工艺提取率高、成本较低,可用于中试生产。     

化州柚种质资源的SSR分析及其果实不同发育期柚皮苷含量变化

采用SSR分子标记技术研究化州柚不同品系及柑橘属各代表种质间的亲缘关系,结果表明:25对SSR引物在15个样品中扩增得到175个等位基因,聚类分析证实化州柚与柚类亲缘关系较近,而且一些化州柚同名材料在遗传上存在差异。利用高效液相色谱(HPLC)法检测不同种质幼果及不同果径果实不同组织中柚皮苷含量,结果表明:化州柚幼果中柚皮苷含量显著高于化州本地柚光青及其他地区普通柚,且受年份和环境的影响较大;随着果径的增大,2个化州柚种质正毛(吴)和假西洋(吴)果皮及果肉中柚皮苷含量均呈现下降趋势,且果肉中柚皮苷含量比果皮中高。综合分析果实大小和有效成分含量得出,果实直径4～8cm时是化州柚适宜采收期,果径6cm左右为最适采果期。     

外裹糊处理对油炸草鱼块的晚期糖基化终末产物的影响

以草鱼(Ctenopharyngodon idella)为原料,制备油炸时间为0、30、90、120、180、240、300 s的直接油炸草鱼块(deep-fried fish nuggets,DFN)和外裹糊油炸草鱼块(breaded fish nuggets,BFN),对鱼块内外层的晚期糖基化终末产物(AGEs)含量和理化特性进行测定。结果表明:草鱼油炸过程中,水分流失、油脂吸收、美拉德反应和油脂氧化主要发生在鱼块外层。因此,油炸300 s后,DFN和BFN外层的羧甲基赖氨酸(CML)含量分别是内层的5.6和6.4倍。油炸时间延长会加剧鱼块内外层的水分流失和油脂吸收,丙二醛含量则先升高后趋于稳定。长时间加热还会引起鱼块外层的美拉德褐变颜色加深,CML和荧光AGEs含量显著增加。与DFN相比,BFN外层水分含量更低,油脂含量更高,在油炸后期美拉德褐变和荧光AGEs含量加速上升,但外裹糊的使用阻止了蛋白质与高温油脂直接接触,因此,油炸300 s后BFN外层的CML和荧光AGEs含量比DFN外层分别减少了34.6%和20.8%。外裹糊的使用还显著降低了鱼块内层的CML含量,对内层荧光AGEs含量则没有显著影响。以上结果表明,外裹糊的使用以及减少油炸时间均可以降低鱼块内外层的AGEs含量。     

苹果多酚及其活性单体的提取·分离纯化及降脂效果研究

[目的]分离并分析苹果多酚组分及活性单体纯度,并评价了它们的降脂活性。[方法]利用乙醇提取苹果多酚,并分离纯化了4种(绿原酸、儿茶素、根皮苷、槲皮素)活性单体,采用高效液相色谱与质谱联用分析多酚组分及活性单体纯度,建立小鼠糖尿病模型。[结果]苹果多酚中绿原酸的含量是35.207%、儿茶素3.991%、根皮苷15.662%、槲皮素0.274%。4个活性单体成分(绿原酸、儿茶素、根皮苷、槲皮素),经过液相质谱分析,绿原酸的纯度是99.298%、儿茶素99.426%、根皮苷99.857%、槲皮素99.317%。动物试验表明,苹果多酚、绿原酸、儿茶素、根皮苷、槲皮素均能有效降低糖尿病鼠血总胆固醇(TG)、甘油三脂(TC)、低密度脂蛋白(LDL-c)水平,增加血高密度脂蛋白(HDL-c)水平。相比较苹果多酚,4种单体(绿原酸、儿茶素、根皮苷、槲皮素)均显示了更好的降脂活性。其中,根皮苷的降脂效果最好。[结论]苹果多酚及活性单体有着较好的降脂活性。     

根皮苷氧化物POP2的酶促反应体系及其结构表征

【目的】根皮苷氧化物POP2是苹果汁加工过程中由酶促氧化生成的一种多酚氧化物,对果汁的褐变和劣变有着重要影响。通过多酚氧化酶氧化根皮苷反应体系的建立,POP2的分离纯化与结构表征,探讨根皮苷氧化物POP2合成条件与反应历程,为苹果汁中POP2的检测分析,及弄清其对果汁褐变和劣变的影响奠定基础。【方法】通过pH、温度、底物浓度3个单因素试验建立根皮苷酶促氧化体系的基础上,研究乙醇溶液对酶促反应的促进作用和反应历程,通过高效液相色谱法检测根皮苷酶促氧化过程中根皮苷、中间产物及POP2含量的变化,通过乙酸乙酯萃取、无水乙醇除盐、重结晶等方法对氧化产物POP2进行分离纯化,并采用质谱（ESI-MS）和红外光谱（IR）对POP2进行结构表征。【结果】根皮苷酶促氧化反应的最佳条件为pH 6.5、35℃、底物浓度3 mg?mL^-1,添加不同浓度的无水乙醇均能显著提高根皮苷酶促氧化速率,当添加浓度为20%时,可提高反应转化率,最大为2.4倍;根皮苷反应液随时间的变化颜色也发生改变,反应刚开始溶液颜色呈微黄色,随着反应的进行颜色逐渐从亮黄色变为橙黄色,最终产物的颜色为橙红色;高效液相色谱法分析根皮苷酶促氧化反应历程发现,当底物浓度为3 mg?mL^-1,反应48 h时,根皮苷的转化率最大为90.2%,中间产物X1和POP1也基本接近痕量,POP2的积累量基本不再发生变化;通过乙酸乙酯萃取可以将反应液中残留的根皮苷除去,用无水乙醇除盐并经甲醇重结晶后,获得纯度为96.8%的POP2;经正离子模式ESI-MS分析,POP2的m/z为467,分子式为C₂₁H₂₂O₁₂;IR结果发现POP2具有特征性的醚、氧化羧基、酮基及苯环官能团,与推测的根皮苷氧化物结构式吻合。【结论】根皮苷酶促氧化体系中的主要氧化物为POP2,可以根据POP2的含量高低建立苹果汁褐变和劣变的标志性检测指标。     

肉苁蓉多糖闪式提取工艺及其抗糖基化分析

【目的】确定肉苁蓉多糖的闪式提取工艺条件并分析其抗糖基化活性.【方法】采用单因素和响应面试验优化料液比、转速以及提取时间对多糖得率的影响,及其对赖氨酸/葡萄糖模拟体系中形成的晚期糖基化终产物(AGEs)的抑制效果.【结果】当料液比1∶53 (g/mL)、提取转速5 387 r/min、提取时间60 s时,多糖得率可达12.35%.制备多糖和阳性对照氨基胍(AG)对模拟体系中AGEs半数抑制浓度IC_(50)分别为0.438和0.341 mg/mL.【结论】采用闪式提取肉苁蓉多糖方法简单可行,回收率高,其多糖具有一定糖基化抑制效果.     

山荆子中根皮苷和黄酮含量的测定及其乙醇提取物的抗氧化活性

【目的】测定山荆子鲜叶、茎皮和果中根皮苷及阴干的果实和叶中黄酮的含量,并比较阴干叶和果实乙醇提取物的抗氧化活性。【方法】采用超声波辅助甲醇提取山荆子鲜叶、茎皮和果实中的根皮苷,用高效液相色谱法测定提取物中目标产物的含量;用超声波辅助乙醇提取山荆子阴干叶和果实中的黄酮,用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法测定其叶和果实中的黄酮含量,并通过清除DPPH、ABTS自由基和还原力比较研究其乙醇提取物的抗氧化活性。【结果】山荆子鲜叶、茎皮和果实中的根皮苷含量分别为(12.00±3.60),(21.60±6.10)和(1.18±0.15)mg/g;阴干的叶和果实中黄酮含量分别为(4.78±0.62)和(0.68±0.04)mg/g。在清除DPPH自由基、ABTS自由基活性及还原力方面,山荆子阴干叶乙醇提取物较果实的抗氧化活性强。【结论】超声波辅助提取技术结合HPLC法测定山荆子叶、茎皮和果实中根皮苷含量操作简单,重复性好,结果准确。山荆子阴干叶和果实的乙醇提取物都具有较强的抗氧化活性,且叶乙醇提取物的抗氧化活性较强。     

根皮苷对平邑甜茶幼苗生理特性的影响

 【目的】探讨不同浓度根皮苷对平邑甜茶幼苗生理特性的影响。【方法】以平邑甜茶幼苗为试材，研究砂培条件下，不同浓度根皮苷对幼苗生物量和生理特性的影响。【结果】根皮苷浓度为0.001 mmol•L-1时促进幼苗生长，浓度达到1 mmol•L-1时开始抑制幼苗的生长，降低了干物质积累。随着处理浓度的增加，抑制作用加强。用浓度为1 mmol•L-1的根皮苷处理幼苗，叶片和根尖的超微结构受到破坏。保护性酶活性在处理初期提高，随着根皮苷浓度的增加和处理时间的延长，超氧化物歧化酶（SOD）活性一直增加，过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性先上升后下降，丙二醛（MDA）含量增加，造成细胞膜伤害，膜脂过氧化。高浓度根皮苷降低了幼苗的光合速率和蒸腾速率。【结论】高浓度根皮苷对幼苗的生长有抑制作用，是造成重茬障碍的重要因素。     

烟台不同优系富士品种的酚类物质和褐变关系探讨

为探讨苹果果实酚类物质组成与褐变的相关性,本研究以响富、烟富8、烟富10和普通苹果为试材,测定果实褐变度及总酚含量,并采用超高效液相色谱(UPLC)及液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)对苹果中儿茶素、绿原酸、隐绿原酸、表儿茶素、根皮苷、根皮素、原花青素B2、原花青素B4、槲皮素3-半乳糖苷、槲皮苷10种酚类的组成和含量进行分析。结果表明,烟富10的总酚含量以及褐变度较高,且仅在烟富10中检测到槲皮素3-半乳糖苷;不同品种中绿原酸含量均最高,根皮苷、表儿茶素含量较高,为主要的酚类物质;3个优系富士品种果实的褐变度与总酚含量、儿茶素、表儿茶素、根皮苷、绿原酸、槲皮素3-半乳糖苷均呈极显著正相关,果实总酚含量对褐变度影响最大。     

苹果树腐烂病菌根皮苷水解酶基因Vmlph1的功能

为明确根皮苷降解酶在苹果树腐烂病菌侵染过程中的作用,从苹果树腐烂病菌基因组序列中鉴定出候选根皮苷降解酶基因Vmlph1,利用Double-joint PCR和PEG介导的原生质体转化技术构建Vmlph1敲除突变体,观察突变体营养生长状况、产孢情况以及致病力的变化;利用HPLC方法检测基因敲除对根皮苷降解速率的影响。结果发现,经PCR及Southern blot验证后获得Vmlph1基因的敲除突变体;与野生型菌株相比,突变体菌落颜色变白,生长速率和产孢能力显著降低;接种到叶片和枝条上,突变体致病力显著降低;突变体根皮苷降解能力与野生型没有显著差异;在根皮苷诱导下,野生型菌株黑色素合成调控转录因子Cmr1基因的表达量显著上调,但突变体Cmr1基因的上调倍数显著低于野生型菌株。表明,根皮苷降解酶基因Vmlph1与苹果树腐烂病菌营养生长、致病力、分生孢子的产生及黑色素合成有关。     

糙叶五加根皮化学成分研究

目的基于抗炎活性研究糙叶五加根皮的化学成分。方法采用XAD-4、正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20等常规柱色谱技术结合实时直接分析质谱技术(DART-MS)进行分离纯化,并根据其理化性质和波谱数据鉴定结构。结果通过常规柱色谱从糙叶五加根皮中分离鉴定了7个化合物,分别为:豆甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、海松酸(3)、(+)-芝麻素(4)、洒维宁(5)、丁香苷(6)和刺五加苷E(7);另外,通过实时直接分析质谱与标准图谱比较推测糙叶五加根皮中可能存在taiwanin C、10-羟基-2,8-癸二烯-4,6-二炔酸、3,7,11-trimethyl-2,6,10-dodecatrienoic acid、咖啡酸和stigmast-7-ene-3,6-diol。结论化合物3,4,5,7为首次从该种植物中分离得到。     

苹果园土壤中一株根皮苷降解菌的筛选

为筛选能够有效降解苹果主要自毒物质——根皮苷的降解菌,采用分光光度法选取对根皮苷具有较高降解效果的菌株,并进行盆栽试验以验证其实际生产效果。结果表明,筛选到的菌株6-3属于粘质沙雷菌属,能够有效降解根皮苷,且对平邑甜茶的根系及地上部无明显负面作用,对其生长发育有一定的促进作用。     

槲皮苷对实验性高脂血症大鼠血脂代谢的影响

研究槲皮苷对实验性高脂血症大鼠抗氧化能力和血脂代谢的影响。采用实验性高脂血症大鼠为模型,探讨槲皮苷高剂量、中剂量、低剂量3个剂量组对实验性高脂血症大鼠血脂水平、肝脂水平以及血清和肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响。结果表明,与高脂血症对照组相比较,槲皮苷高剂量组能显著降低高脂血症大鼠血清和肝脏总胆固醇和甘油三酯水平,并显著降低血清低密度脂蛋白,升高血清高密度脂蛋白水平,还可明显降低血清和肝脏中MDA含量,升高SOD活性。槲皮苷能调节实验性高脂血症大鼠血脂代谢,抑制肝脏脂肪沉积,这可能与其抗自由基介导的脂质过氧化作用有关。     

赖氨酸抑制铜绿微囊藻生长的机理研究

为了探讨赖氨酸对铜绿微囊藻的抑制机理,采用人工光照培养箱培养方法,研究了不同浓度的赖氨酸对铜绿微囊藻各种生理生化特性的影响.结果表明,5 mg·L-1以上的赖氨酸对铜绿微囊藻具有致死作用.赖氨酸在抑制铜绿微囊藻细胞ca2 Mg2 -ATPase活性的同时,实现对铜绿微囊藻的抑制.赖氨酸在光照条件下抑制铜绿微囊藻叶绿素a含量并影响其藻胆蛋白组分构成;在黑暗条件下铜绿微囊藻具有微弱的化能异养生长能力;在微弱光照条件下对铜绿微囊藻没有抑制作用,微囊藻也不呈现光能异养生长能力.光合作用系统(PSⅡ)是赖氨酸抑制铜绿微囊藻生长的一个作用位点,赖氨酸通过使叶绿素a含量下降来抑制其光合作用能力.     

金丝桃苷在刺五加各部位中的分布及其对胰脂肪酶活性的抑制作用

采用高效液相色谱法测定了刺五加根、茎干、新枝、茎皮、茎韧皮部、叶、花蕾、果中金丝桃苷的含量,并研究了金丝桃苷体外抑制胰脂肪酶的活性.结果表明:刺五加花蕾中金丝桃苷含量最高,达2.4％,金丝桃苷对胰脂肪酶活性有一定的抑制作用,质量浓度为1mg/mL时抑制率为24.852％.     

植物根际放线菌分离方法初探及根皮苷降解活性分析

【目的】研究不同培养基及不同土样处理方法对植物根际放线菌分离效果的影响,并从中挖掘具有开发潜力的高活性根皮苷降解放线菌株,为苹果连作障碍机制研究及微生物修复提供理论和实践指导。【方法】从吉林、河北、山东、陕西、甘肃、河南、湖北、四川、重庆、上海、江西、安徽、浙江等13个省(市)采集植物根际土样40份,自然风干处理后分别经10mmol/L的MOPS溶液及CaCO3预处理,用涂布平板法在7种不同的培养基中进行放线菌的分离培养。将分离获得的菌株点种于根皮苷筛选培养基进行活性检测。【结果】在7种培养基B、MSC、MG、MT、Chi、HSG、HV中分别分离获得100、78、108、64、79、113和88株放线菌。土样用MOPS溶液处理后所分离得到的放线菌总数明显高于用CaCO3预处理所得。分离所得630株菌株中有29株对根皮苷有降解活性。对其中41株高活性菌株及形态特殊菌株进行16SrRNA基因测序分析,发现分属于14个不同的放线菌属。【结论】7种分离培养基中HSG培养基的分离效果最好,MG培养基次之,MT培养基最差。土样处理中用MOPS溶液处理的方法优于用CaCO3预处理。根际放线菌株中有一定数量具有降解根皮苷能力的菌株。根际放线菌资源具有丰富的生物多样性。     

杀虫活性化合物杠柳新苷P对东方粘虫中肠细胞上结合蛋白的影响

杠柳新苷P是从杠柳根皮提取物中分离得到的一种甾体糖苷类化合物,对东方粘虫表现出较好的杀虫活性。为了进一步研究其杀虫机理,探究杠柳新苷P作用于东方粘虫中肠疑似作用位点,通过对杠柳新苷P进行结构修饰,与东方粘虫幼虫中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)组织体外孵育,利用其结构修饰后增强的紫外吸收特性,经蛋白分离、纯化,进而得到杠柳新苷P作用于粘虫中肠BBMV上的结合蛋白。结果表明:在粘虫中肠BBMV上存在杠柳新苷P的疑似结合蛋白,且经分离鉴定得到5种疑似结合蛋白,分别为类异翅盘蛋白、氨肽酶、二硫键异构酶、苯基贮存蛋白以及精氨酸激酶;通过进一步的分析推测,氨肽酶可能是杠柳新苷P作用于东方粘虫幼虫中肠BBMV上的结合蛋白。初步明确杠柳新苷P作用于东方粘虫中肠的疑似作用位点,但仍需进一步的验证工作进行确认,为今后研究杠柳新苷类化合物的作用机理及靶标提供依据。