鱼类淋巴囊肿病毒免疫诊断技术的研究

在获得鱼类淋巴囊肿病毒(lymphocystis disease virus,LCDV)单克隆抗体的基础上,建立了淋巴囊肿病毒的免疫电镜(IEM)和斑点免疫印迹(Dot-blot)诊断方法。应用免疫电镜方法检测样品,观察结果显示:胶体金颗粒集中结合在淋巴囊肿病毒粒子囊膜周围,在病毒外区域没有胶体金颗粒散布,整个视野背景清洁,无散在的金颗粒和其他污染物;斑点免疫印迹诊断结果显示:在使用EDTA抑制内源酶后,所检测样品发色后呈明显褐色,呈现明显的LCDV阳性反应,而设立的两组阴性对照结果均不发色;诊断结果说明所建立的淋巴囊肿病毒单克隆抗体诊断技术灵敏、稳定、特异、可靠。     

淋巴囊肿病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用

根据淋巴囊肿病毒的主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因保守序列,利用Primer Explorer 3软件设计了5条引物,对LAMP反应温度和反应时间等参数进行了优化.与流行性造血器官坏死病毒、虎纹蛙病毒、蛙虹彩病毒、新加坡石斑虹彩病毒、鳜传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒等其它虹彩病毒及对虾白斑综合症病毒都没有交叉反应.将LAMP检测方法与常规PCR进行灵敏度的比较分析,结果显示LAMP的检测灵敏度约为15fg,比常规PCR灵敏度高一个数量级.该方法检测时间短,在1 h内即可完成检测.用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明12尾外观有淋巴囊肿病症状的牙鲆样品中都含有淋巴囊肿病毒,而10尾外观正常牙鲆鱼苗则没有检测到淋巴囊肿病毒(与预期结果一致),说明LAMP方法比较适合淋巴囊肿病毒的早期及现场诊断.     

新疆哈密瓜病毒研究进展

为减轻哈密瓜病毒病的危害,本文主要从新疆哈密瓜病毒的早期研究、哈密瓜病毒的种类鉴定、哈密瓜病毒的生物学特性以及哈密瓜病毒的分子生物学特征等方面进行了综述,并从哈密瓜病毒与寄主互作、哈密瓜病毒的群体遗传结构、基因组分子变异和重组、全基因组序列分子生物学特征、分子进化、抗病毒品种的选育、哈密瓜病毒病在田间发生流行规律和病毒防控等方面进行了展望。     

鱼类淋巴囊肿病毒感染牙鲆鳃细胞系的研究

以患病牙鲆的囊肿组织为试验材料,冰浴匀浆后采用低速离心的方法提取淋巴囊肿病毒,用粗提的病毒液感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,同时应用以抗淋巴囊肿病毒单克隆抗体为第一抗体的间接免疫荧光抗体技术检测淋巴囊肿病毒是否感染了牙鲆鳃细胞并在其中增殖.结果发现生长旺盛的单层牙鲆鳃细胞接种淋巴囊肿病毒2天后出现明显的细胞病变效应,形成空斑,应用间接免疫荧光抗体方法检测结果为抗淋巴囊肿病毒单抗与未接种淋巴囊肿病毒的牙鲆鳃细胞呈阴性反应,而接种病毒的牙鲆鳃细胞,细胞质中有明显的特异性荧光,该结果说明牙鲆鳃细胞系是淋巴囊肿病毒的敏感细胞系.     

蛙病毒的转录组和蛋白质组分析研究进展

蛙病毒属是一群大型的胞浆型DNA 病毒属虹彩病毒科能导致包括鱼类、两栖类和爬行类等冷血动 物产生严重疾病,蛙病毒分子生物学研究是阐明病毒复制,疾病产生各种相关因子作用机制的基础,微阵列分析技 术,蛋白和DNA 复制抑制下的转录产物分析,质谱蛋白质组学等分子生物学技术已被广泛应用于分析蛙病毒的基 因转录和蛋白表达多种蛙病毒转录组和蛋白质组分析使人们能够了解这一类病毒基因的转录产物转录时相病 毒蛋白表达的整体状态功能结构和可能的调控方式.     

羊痘病毒研究综述

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病,是所有动物痘病毒中最为重要的一种,严重影响养羊业和国际贸易的发展。从病原学、分子生物学、检测和预防控制等方面对羊痘病毒进行综述,以促进对羊逗病的进一步研究。     

6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析

根据已报道的鱼类病毒性神经坏死病毒(viral nervous necrosis virus, VNNV)衣壳蛋白基因(coat protein gene, cp基因)设计引物,对2006年从我国沿海养殖石斑鱼中分离到的6株鱼类神经坏死病毒进行RTPCR扩增,特异性扩增出6株病毒的完整衣壳蛋白基因,分别连接到pMD18-T载体中,并进行序列测定和分析.结果发现,6个VNNV分离株的cp基因核苷酸序列的同源性在97.3%以上;推导的氨基酸序列同源性在79.6%～99.1%之间.根据cp基因核苷酸序列绘制分子进化树,发现6个VNNV分离株在进化树同一分枝上,属于RGNNV基因型,与已报道的点带石斑鱼神经坏死病病毒(ECNNV)、巨石斑鱼神经坏死病病毒(ETNNV)及玛拉巴石斑鱼神经坏死病病毒(MGNNV)亲缘关系较近.试验结果表明,目前我国沿海养殖场发生的鱼类病毒性神经坏死病均由同一来源的病毒引起,该基因型的鱼类神经坏死病毒在我国沿海养殖的石斑鱼中广泛传播流行.     

传染病法氏囊病毒基因组、蛋白和分子致病机理研究

 近年来，由于分子生物学技术的发展，传染性法氏囊病（IBD）的得到了较好的控制。但传染性法氏囊病是一种主要传染幼鸡和雏火鸡的急性、高度接触性、杀淋巴细胞性疾病，可引起免疫抑制进而混合感染或继发感染其它传染性疾病。因此，该病仍引起有关学者的关注。该病由传染性法氏囊病毒（IBDV）引起。主要对该病毒的基因、蛋白及其分子致病机理研究的最新进展进行综述。     

新城疫病毒的分子生物学研究进展（综述）

新城疫病毒是重要的禽畜传染病原物之一,本文综述了该病毒的分子生物学研究进展,包括基因组分析,致病的分子基础和抗ＮＤＶ的基因工程疫苗研究,并对基因工程疫苗研究前景进行了讨论。     

海鲂鱼类的分类学研究

在鱼类分类研究中,形态学差异最为简单和直观,被广泛应用于生物进化、物种起源及物种分类鉴定等研究中。但是,许多生物的形态特征容易受环境的影响,同一类群的生物可能由于生境条件的差异或者对同一生境的反应和适应能力不同而呈现显著的形态学特征差异,影响正确的鉴定分类。随着现代分子生物学技术的发展,越来越多的分子生物学技术被应用于分类学研究。DNA条形码技术是分子分类学中主要的方法,与传统形态进行鉴定的方法相比DNA条形码不会受到生物性别、发育阶段、性状相似性和表型可塑性的限制和影响。通过对海鲂鱼类研究现状的了解,得知目前国内对海鲂鱼类的相关研究相对较少。综上可以利用传统形态学描述为基础结合DNA条形码技术来准确鉴定海鲂鱼类。     

Lymphocystis virus: isolation and propagation in centrarchid fish cell lines

A virus from fish with lymphocystis disease was isolated in fish cell cultures. Eleven serial transfers were made and the pathognomonic lymphocystis cells were produced in vitro in each transfer. Fish inoculated with 6th- and 9th-passage material developed the disease, and virus was reisolated front them.     

神经坏死病毒对卵形鲳鲹的致病性及外壳蛋白基因序列分析

2008年5月,湛江市某网箱养殖场的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼发生大规模死亡,调查发现病鱼呈现体色发黑、反应迟钝、呈螺旋状或旋转游动等典型的病毒性神经坏死症症状,在鱼体没有发现寄生虫或细菌感染,PCR检测发现病鱼感染了鱼类神经坏死病毒(NNV)。利用已经发表的NNV核酸序列设计引物,克隆外壳蛋白基因并测序,根据同源性比较和系统进化分析,该病毒与斜带石斑神经坏死病毒(ECNNV)碱基相似率达99.2%,属于赤点石斑鱼神经坏死病毒基因型(RGNNV)。同时进行人工感染试验,采用4种方法感染该病毒,累计死亡率均达100%,并对感染样品进行克隆测序鉴定,证明导致此次湛江卵形鲳鲹大规模死亡的病原为神经坏死病毒。     

锦鲤疱疹病毒潜伏感染实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为42拷贝/μL,灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测,有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;从有临床症状的鱼中得到的15份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;30份无任何临床症状鱼中的6份被检测为阳性,阳性率为20%。本试验中建立的水生动物疱疹病毒潜伏感染快速检测方法,可为潜伏感染KHV的临床检测提供一种快速、敏感和特异的检测手段,可为KHVD的分子流行病学调查和预防提供参考。     

传染性法氏囊病基因工程疫苗研究进展

综述了导致近年来传染性法氏囊病(IBD)疫苗免疫发生重大变化的主要原因,即:传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株的出现和IBDV分子生物学研究和分子克隆技术与手段的长足进步.介绍了目前IBD基因工程疫苗的4种主要类型:活病毒疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、可食用转基因植物疫苗.     

欧盟鱼病水平测试样品中DNA病毒检测

[目的]通过参加欧盟鱼病水平测试,评价试验室检测能力,加强对检测方法的掌握。[方法]按照水平测试说明的方法进行病毒分离鉴定,测试的10个样品在病毒分离后用PCR方法检测DNA病毒。[结果]PTⅡ检测为流行性造血器官坏死病毒(Epizootic haemato-poietic necrosis virus,EHNV),PTⅢ为欧洲鮰病毒(European catfish virus,ECV),PTⅧ和PTⅩ为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus disease vi-rus,KHDV),PTⅨ为流行性溃疡综合征(Epizootic ulcerative syndrome,EUS)。[结论]该实验室检出了2011年欧盟鱼病水平测试样品中的4种DNA病毒,与最后公布的测试结果完全一致。     

草莓病毒病及其脱毒与检测技术研究进展

介绍了在草莓病毒病为害特点及其作用机理。综述了热处理、茎尖培养、花药培养等草莓脱毒技术和运用指示植物、血清学和分子生物学等检测技术。介绍了草莓无毒苗的栽培效果。     

分子生物学技术在植物病毒检测中的应用

建立快速、高灵敏度、高通量的病毒检测体系是预防和控制植物病毒病的先决条件。综述了包括核酸杂交技术、反转录聚合酶链式反应、荧光定量PCR、DNA微阵列技术在内的分子生物学技术的特点及其在植物病毒检测和植物病毒病诊断中的应用。