向日葵(Helianthus annuus L.)不同外植体组织培养及其再生的研究

【目的】建立向日葵不同外植体离体培养再生体系，为向日葵遗传转化、突变体筛选奠定基础。【方法】以不同基因型向日葵为材料，研究了向日葵不同外植体在不同的培养基中诱导不定芽再生的频率。【结果】向日葵不同基因型外植体在含适宜吲哚-3-乙酸（IAA）、6-苄氨基嘌呤（6-BA）等激素的培养基中均较易形成愈伤组织，但愈伤组织诱导不定芽的能力则较弱；不同基因型向日葵外植体的不定芽诱导率依次为子叶节＞下胚轴＞子叶＞真叶；诱导子叶节不定芽再生的适宜6-BA浓度为1.2～1.8 mg•L-1， 下胚轴为1.8 mg•L-1，子叶为0.6 mg•L-1，真叶却未见到诱导出不定芽；MS + 0.03 mg•L-1 IAA + 1.2～1.5 mg•L-1 6-BA培养基可用于向日葵子叶、子叶节和下胚轴再生体系；不同基因型向日葵诱导不定芽的能力差别较大，其中，基因型PR29再生能力较强。【结论】本研究成功地建立了向日葵不同外植体离体培养再生途径，并获得了再生植株。     

矮牵牛细胞的长期离体培养及再生植株的ISSR分析

 【目的】实现矮牵牛细胞的长期离体培养和再生，不但可以获得矮牵牛体细胞突变体，从中选出优良株系，而且可以为研究外源基因在矮牵牛细胞增殖与分化过程中的稳定性提供技术体系。【方法】以重瓣矮牵牛叶片为外植体，使用不同浓度BA与NAA的组合在黑暗条件下诱导愈伤组织。在不同光条件下，将愈伤组织在MS+ BA 2.0 mg•L-1+0.5 mg•L-1 NAA+200 mg•L-1 CH 与 MS+ BA 0.5 mg•L-1+0.5 mg•L-1 NAA+200 mg•L-1 CH两种培养基进行愈伤组织3年多的继代培养，并利用筛选的8个引物对20个再生植株的总DNA进行ISSR分析。【结果】不同的生长素与分裂素配比诱导的愈伤组织状态明显不同，继代后的愈伤组织在低激素培养基上分化出不定芽，再生芽复壮后可得到正常植株。对再生植株的总DNA进行ISSR分析发现，再生植株之间存在很大的遗传变异。【结论】矮牵牛愈伤组织在高BA浓度培养基上可长期继代保存；在低激素培养基上可实现植株再生。长期离体培养矮牵牛是获得其突变体的有效方法。     

月季萨蔓莎不定芽的直接诱导和植株再生的研究

 以月季品种萨蔓莎为试材研究不同外植体、叶片位置、暗培养时间和激素组合对月季不定芽诱导和植株再生的影响。结果表明，月季萨蔓莎在含1.5 mg·L－1TDZ和0.05 mg·L－1NAA的MS培养基上黑暗培养8 d后转入含0.5 mg·L－1 BA和0.01 mg·L－1NAA的MS培养基光下培养，再生效果最好，小叶外植体和复叶柄的再生率分别为51.8%和10%。小叶的叶位对植株再生无显著影响，暗培养时间过长，外植体易形成愈伤组织而不利于不定芽的分化，植物生长调节剂中生长素浓度升高易导致愈伤组织形成而影响植株再生。本研究所建立的不定芽直接再生系统可用于该品种的转基因遗传改良研究。     

油柿下胚轴培养再生植株

试验于2004～2006在广东省汕头大学生物系遗传实验室进行。供试油柿幼果6月中旬采自汕头市澄海区栽培的成年油柿树。切取油柿幼果种子，用70%酒精表面消毒30 s，0.1%升汞浸泡15 min，无菌水冲洗6次。切开种子，取出幼胚，切除胚根、胚芽和子叶，将胚轴横切几处伤口后接种于预先配好的培养基上培养。分别以MS、1/2MS、MS（1/2N）为基础培养基，添加0.05 mg•L-1IAA和2.0 mg•L-1 ZT，将胚轴接种于培养基上培养，试验基础培养基种类对不定芽再生的影响。以MS（1/2N）为基础培养基，附加不同浓度的IAA（0.01、0.05、0.1 mg•L-1）和ZT（0.5、2.0、5.0 mg•L-1），确定不同浓度的激素组合对不定芽再生的影响。以1/2MS为基础培养基，添加0.1 mg•L-1 IAA和不同浓度的ZT（0.5、2.0、5.0 mg•L-1）和BA（2.0 、5.0、10.0 mg•L-1），试验不同种类和浓度的细胞分裂素对胚轴不定芽再生的影响。培养8周后统计再生结果。所有培养基均添加0.8%琼脂、3%蔗糖和500 mg•L-1PVP，pH调至5.8后于121℃高温灭菌15 min（下同）。培养物置于28℃、光周期为12 h、光照度为60 µmol•m-2•s-1的条件下培养。 用两种方法诱导生根：一种是把再生芽基部浸入250 mg•L-1 IBA溶液中不同时间（15、30、45 s）后接种于无激素的MS(1/2N)培养基；另一种是切取再生芽直接接种于单独或组合添加了IAA（0、0.25、0.5、1.0 mg•L-1）、IBA（0、0.25、0.5、1.0 mg•L-1）、NAA（0、0.5 mg•L-1）的MS（1/2N）培养基。先暗培养9 d再移至光照下培养。 结果表明，外植体接种后逐渐从乳白色转为暗黄色，2周左右即有褐色、致密的愈伤组织形成，3周后开始出现绿色芽点。大部分不定芽形成于胚轴基部的伤口末端和侧面，而顶部较少，单个外植体最多可再生17个不定芽。试验的3种基础培养基中，MS（1/2N）效果最好，其愈伤形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别为100%、48.3%和4.3个；MS培养基效果最差，各指标分别为90.4%、22.4%和3.5个；1/2MS的效果居于前两者之间。 在不同浓度的IAA与ZT组合中，IAA 0.1 mg•L-1与ZT 2.0 mg•L-1组合的愈伤形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别达到100%、81.7%和5.3个，均显著高于其它组合。ZT浓度较高（大于2.0 mg•L-1）时再生率均超过40%，随着IAA浓度的增加，形成的愈伤组织也增加。ZT诱导不定芽的效果明显好于BA，BA浓度从2.0 mg•L-1升高到10.0 mg•L-1，不定芽再生率和平均不定芽数分别从20.5%和2.2个下降到0。 试验结果显示，用250 mg•L-1IBA浸泡基部30 s和45 s时生根最快，第7天即有不定根出现，但形成的不定根较细，植株生长缓慢。添加了不同浓度、不同种类生长素的培养基中，以IAA和IBA各0.5 mg•L-1的组合，再生苗生根较快，生根率和平均根数分别达到100%和3.2条，且愈伤少、侧根多、植株生长快且健壮，移栽后易成活，为本试验中的最佳组合。再生植株经炼苗后移栽，30 d时成活率达96.2%。     

不同培养条件下长寿花叶片再生体系的构建

以长寿花粉红色品种离体叶片为外植体,探讨了基本培养基、暗培养以及不同植物生长调节剂组合对不定芽再生的影响。结果表明,基本培养基以MS最为合适,以1/2MS BA2.0mg/L NAA0.1mg/L可以使粉红色品种的叶片不定芽的再生率高达5.2,暗培养15天可以将叶片的不定芽再生率提高到5.47。生根培养用1/2MS IBA0.1mg/L最好。     

黄金梨叶片再生体系建立研究

从外植体接种方式选择、暗培养时间、植物生长调节剂浓度和配比等方面研究了黄金梨叶片再生植株的影响因素。结果表明:适于黄金梨叶片再生的诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,在此培养基上,叶面朝上接种的叶片经过15 d的暗培养转入光照培养,可获得45%的再生率和平均2.2个不定芽;1 cm以上的不定芽经1/2 MS+3.5 mg/L IBA诱导10 d后,转入1/4 MS无激素培养基继续培养可获得高达91.6%的生根率和5个以上的不定根数。     

美女樱叶片离体培养研究

以美女樱品种"Quartz"离体叶片为外植体,探讨了不同细胞分裂素、暗培养、硝酸银质量浓度以及不同植物生长调节剂组合对不定芽再生的影响。结果表明:6-BA的诱导效果好于TDZ。在培养基MS+6-BA4.0mg/L+IBA0.15mg/L+蔗糖30g/L上可以使美女樱叶片不定芽的再生率达26.8%。2mg/LAgNO3可以将美女樱叶片的不定芽再生率提高到31.3%,并缩短不定芽发生时间。暗培养5d可以促进美女樱叶片不定芽的再生,活性炭对美女樱叶片离体再生有一定抑制作用。     

砀山酥梨叶片培养和植株再生

以砀山酥梨叶片为外植体,首次系统地研究了基本培养基、植物生长调节剂、碳源、暗培养时间和琼脂用量等对其再生不定芽的影响。结果表明,砀山酥梨叶片再生不定芽的适宜组合为NN69 6-BA 2.5 mg.L-1 IBA 0.3 mg.L-1 山梨醇20 g.L-1 琼脂8.0 g.L-1,暗培养20 d。叶片再生频率最高为83%,平均再生芽数2.17。叶片再生苗在生根培养基1/4 MS IBA 0.5 mg.L-1 NAA0.3 mg.L-1 蔗糖20 g.L-1 琼脂6.0 g.L-1上已经生根。     

火焰南天竹叶片不定芽再生研究

以火焰南天竹组培苗叶片为外植体,研究不同植物生长调节剂、不同营养物质、暗培养时间、接种方式对其不定芽再生的影响。结果表明:继代30~35 d的火焰南天竹组培苗叶片适用于叶片不定芽再生;外植体在添加1.5 mg/L TDZ、0.2 mg/L 2,4-D的MS培养基上暗培养14 d,再生率可达80.6%,平均每张叶片的再生芽数达到3.1个,且玻璃化现象较少,为最佳组合;生根试验表明,再生芽在1/2MS+0.4 mg/L NAA的生根培养基上生根效果最好,生根率可达76.3%。     

君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生

以君迁子(Diospyros lotus Linn.)休眠芽和叶片为外植体,研究基础培养基种类和外植体基因型对休眠芽初代培养的影响,比较叶片放置方式、TDZ浓度、ZT与TDZ不同浓度组合及暗培养时间对叶片愈伤组织形成和不定芽再生的影响;然后对再生芽进行生根。结果表明:君迁子休眠芽初代培养中,DKW培养基最适合其生长发育,休眠芽生长势最佳;初代培养中,不同基因型的外植体在DKW培养基中生长势基本相同,说明外植体基因型对其初代培养没有影响,但对继代培养影响较大。叶片下表面朝上放置在MS+ZT 0.1 mg/L+TDZ2.0mg/L中暗培养20d,愈伤组织形成率达100%,在(1/2N)MS+2.200 mg/L TDZ上愈伤组织形成率为81.4%;叶片下表面朝上放置在MS+ZT 1.0mg/L+TDZ 2.0mg/L中暗培养0d,不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高,分别为34.4%和2.1±0.3。组培苗在1/2MS(1/2N)+IBA 1.0mg/L中培养5d后,转入1/2MS(1/2N)+1g/L活性炭培养20d,生根率为58.14%,平均根数为4条。     

尾赤桉叶片及茎段的离体培养与植株再生

以无菌生根苗的叶片和茎段为外植体进行了尾赤桉无性系DH201-2不定芽的诱导及植株再生。通过对外植体的筛选、激素种类和浓度的调整、培养条件的选择,结果表明,取自生根培养基上培养30 d植株的上部和中部的茎段在改良MS+TDZ 0.05 mg.L-1+NAA 0.50 mg.L-1的培养基中获得高达57.0%的丛生芽诱导;取在生根培养基上培养20 d的植株,顶端叶片在改良MS+TDZ 0.05 mg.L-1+IBA 0.10 mg.L-1的培养基中获得48.3%的植株再生;适合于茎段和叶片不定芽分化的Ca(NO3)2浓度为0.706 0 g.L-1。     

油柿叶片离体再生体系的建立

 以油柿叶片为材料开展了离体培养研究，旨在建立其再生体系，为转基因操作奠定基础。结果表明，油柿叶盘在MS（1/2N）+IBA0.1mg/L+ ZT3.0mg/L培养基上，经前期暗处理3周后移至正常光照下培养的再生效果最好，其不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高，分别为80.5%和（4.1±0.8）个。再生苗接种于添加IAA和IBA各0.5mg/L的MS(1/2N)培养基上，4周时生根率可达92%，成功地建立了油柿叶片的离体再生体系。     

地被菊花Fall Color体细胞胚途径再生、遗传转化及转基因植株的抗寒性检测

【目的】培育耐寒性强的地被菊花[Dendranthema grandiflorum (Ramat.) Kitamura]新材料。【方法】 以Fall Color品种的幼嫩叶片为外植体，探讨胚状体诱导所需的植物生长调节剂浓度和诱导培养时间等条件。【结果】叶片外植体在添加0.75 mg·L-1 2,4-D的诱导培养基上诱导15 d，再进行分生培养，不仅能够诱导胚性愈伤组织形成，还能够诱导胚状体发生，并进一步诱导芽再生，最终93%的供试外植体通过胚状体途径获得芽的再生。通过根癌农杆菌介导法将35S启动子驱动的逆境诱导转录因子DREB1A基因导入该品种。转化株在低温下的种子发芽率、扦插苗生长以及植株露地越冬生长状况等方面都明显优于对照。【结论】本研究成功地建立了地被菊花Fall Color体细胞胚再生途径，并成功地获得了具有越冬耐性的地被菊花转化株系。     

薄皮核桃组织培养与快速繁殖

[目的]研究薄皮核桃组织培养与快速繁殖的方法.[方法]以薄皮核桃腋芽为外植体,DKW为基本培养基,通过不同的激素种类和浓度配比,建立薄皮核桃组培快繁体系.[结果]组织培养与快速繁殖最适培养基为:启动培养基:DKW/MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L;增殖培养基:DKW+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L;壮芽培养基:DKW+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.05 mg/L;生根培养基:1/2 DKW+IBA1.0mg/L,生根率可达70;以上.[结论]研究筛选获得适宜薄皮核桃快繁的最佳培养条件,为建立新疆薄皮核桃快繁体系、扩大优质薄皮核桃种植规模奠定一定基础.     

建立甜高粱(Sorghum bicolor)高频、高效再生体系的研究

【目的】建立能源植物甜高粱(Sorghum bicolor L.Moench)的高频、高效离体培养再生体系,为遗传转化奠定基础。【方法】以甜高粱品种凯勒的芽顶端分生组织为外植体,探讨在甜高粱直接诱导丛生芽的培养过程中,无菌实生苗的适合苗龄,适宜的激素组合与比例;并将获得的最佳培养方法应用于其它两个甜高粱品种:M-81E和意达利,以研究此途径的基因型依赖性。【结果】利用3d苗龄的芽顶端分生组织作为外植体容易获得较高的分生组织膨大率。甜高粱丛生芽诱导的适宜激素组合为4.0mg·L-16-苄基腺嘌呤+0.5mg·L-12,4-二氯苯氧乙酸+0.5mg·L-1噻重氮苯基脲,可获得91%的丛生芽诱导频率。适合甜高粱快速生根的激素配方为0.5mg·L-1萘乙酸。通过芽顶端分生组织直接诱导丛生芽途径,每个外植体可诱导出上百个芽,最终产生30—40株再生苗。M-81E和意达利具有与凯勒相似的丛生芽诱导频率及效率。【结论】本研究成功地建立了甜高粱的高频、高效离体培养再生体系,且具有外植体来源不受限制,基因型依赖性弱,遗传稳定性好的优点。     

花生茎尖组培和植株再生研究

以 0 .5mm以下的花生茎尖为外植体 ,在MS附加不同激素和有机物的培养基上进行诱芽和诱根培养 ,结果表明 :①在MS + 1.0mg/LBA + 1.0mg/LNAA培养基上愈伤组织和丛生芽发生率分别达到 90 .0 %和 80 .6% ;在 1/2MS(I) +MS(Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ )+ 2 .0mg/LNAA + 0 .1mg/LBA培养基上生根率和单个外植体产根数分别达到 86.7%和 5 .1个。② 2 ,4 D可促进愈伤组织增生 ,但无诱根效果 ;烟酸和VB6 可促进丛生芽发生 ;NAA对促进生根和生芽均有效果。③不同基因型间诱导愈伤组织和丛生芽存在一定差异。茎尖经诱芽、诱根培养出完整植株 ,炼苗后移至室外能正常开花、结荚。     

青岛大花脱毒种苗快繁技术研究

【目的】探讨啤酒花品种青岛大花脱毒苗植株再生技术,以期获得青岛大花脱毒苗快速繁殖的便捷途径。【方法】以青岛大花脱毒苗的单芽茎段为外植体,分别以不同水质（自来水、凉开水、蒸馏水、当地井水）、不同前茬和简易营养液处理（带芽根茬、带芽根茬+简易营养液、新鲜培养基）及不同激素组合进行芽诱导和植株再生。【结果】在芽诱导及植株再生培养过程中,以当地井水进行外植体培养的效果较好,虽然其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数稍低于对照蒸馏水,但生根茎段数、生根率、平均根长、茎粗和株高均最高,其次为凉开水处理;自来水处理的生根茎段数、诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高等均明显低于蒸馏水对照。在前茬培养基上添加10 mL简易培养液对外植体培养20 d, 其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高均明显高于新鲜固体培养基处理,且叶色均浓绿。在不同激素组合中,随着6-BA、IAA浓度的增加,单芽茎段的诱导芽数、生根率、增殖倍数呈先降低后增加的趋势,其中以原继代培养的激素组合6-BA 0.1 mg/L +IAA 0.2 mg/L的诱导芽数、生根率、增殖倍数最高,其次为激素组合6-BA 0.01 mg/L +IAA 0.02 mg/L。【结论】在外植体诱导和植株再生培养中,可用当地井水、凉开水作为培养基介质取代蒸馏水;继续利用前代培养基并留茬、再适量添加简易培养液对外植体进行培养,可有效提高脱毒苗的增殖倍数,且再生苗质量不受影响;可使用含低浓度激素组合（6-BA 0.01 mg/L+IAA 0.02 mg/L）进行脱毒试管苗芽诱导和植株再生培养,从而节省生产成本。     

烈香杜鹃嫩茎腋芽丛生芽诱导和植株再生

【目的】建立烈香杜鹃嫩茎段腋芽丛生芽诱导和植株再生体系,为烈香杜鹃工厂化育苗奠定技术基础。【方法】以烈香杜鹃嫩茎为外植体,应用均匀设计法对影响烈香杜鹃腋芽丛生芽诱导和生根的各主要植物生长调节剂及其水平的作用进行探讨。【结果】适宜的烈香杜鹃嫩茎段腋芽丛生芽诱导培养基为：1/2 DR+TDZ 2.80 mg/L+IAA 0.01 mg/L+GA₃ 1.85 mg/L,诱导率为99.8%;生根培养基为：1/2 DR+IAA 0.07 mg/L+NAA 0.02 mg/L,生根率达99.7%。在生根培养基中添加GA₃ 2.00 mg/L,再生植株茎节在35 d的培养周期内,每段增殖倍数平均达5以上,植株再生率为97.0%。再生植株炼苗移培后成活率达95.0%以上。【结论】建立了烈香杜鹃嫩茎段腋芽丛生芽植株再生体系。