HRM分析方法中不同扩增片段、染料和仪器的比较

高分辨率熔解曲线技术(High resolution melting,HRM)是近年发展起来的基于实时荧光定量技术分析核苷酸突变而进行基因分型的一种新型技术。比较了几种动物疫病病原(猪瘟病毒、禽白血病病毒、鸡艾美耳球虫株)的不同扩增片段(C202、ALV450、En573和C965)、不同荧光染料(LC Green、SYTO9和SYBR GreenⅠ)和不同仪器[Light Scanner96(Idaho),Light Cycler480(Roche)和Rotor-Gene Q(Qiagen)]在HRM基因分型上的异同,揭示了HRM技术对病原体进行分型时,不同扩增片段和不同性质荧光染料对其分型结果影响较大:拥有多个熔解区间的核酸序列比单独1个SNP位点特异性高,更适合于分型;核酸相邻熔解区间Tm差值影响实际HRM分型结果;饱和荧光染料(LC Green和SYTO9)比非饱和染料(SYBR GreenⅠ)分辨率更高,更适合用于HRM分析,并且不同浓度荧光染料对Tm值有一定的影响;不同HRM仪器之间HRM结果无明显差异。     

TaNPR1 在小麦抵抗叶锈菌过程中的作用

叶锈病是一种影响小麦(Triticum aestivum)产量的重要病害，挖掘广谱有效的抗病基因有利于促进小麦品种改良。NPR(Nonexpressor of pathogenesis-related genes,NPR)是一类具有广谱抗病作用的关键因子，本研究分析了TaNPR1在抵抗叶锈菌过程中的功能。通过qRT-PCR(quantitative Real-time-Polymerase Chain Reaction)检测，亚细胞定位观察，VIGS技术沉默TaNPR1后试验，表明TaNPR1影响寄主HR(Hypersensitive reaction)的产生，在小麦抵抗叶锈菌侵染过程中发挥正调控作用。     

高分辨熔解曲线基因分型技术及其在水稻分子育种中的应用

高分辨熔解曲线(high-resolution melting, HRM)分型技术是基于不同DNA片段双链熔解温度差异而进行基因分型的技术,理论上可以区分单个碱基差异的不同DNA分子。由于其较高的分辨率及无需传统的凝胶电泳等优点,HRM技术发明后在医学诊断、植物分子育种等方面得到了大量应用。通过分析HRM的技术特点,并总结HRM技术在水稻分子育种中的应用进展,最后展望了HRM技术在水稻分子育种中的发展方向及应用前景。     

基于改进GEV分布的腐蚀油气管道剩余寿命预测

为了预测在役油气管道腐蚀剩余寿命,基于广义极值(Generalized Extreme Value ,GEV)自适应优选分布研究,建立了基于改进GEV分布的腐蚀油气管道剩余寿命预测模型。首先,利用马尔科夫链蒙特卡罗(Markov Chain Monte Carlo, MCMC)方法估计GEV分布函数的参数并由此确定极值分布类型,若图形检验合理,则采用该分布预测其最大腐蚀深度;其次,基于管道的可靠度及安全性建立腐蚀裕量预测模型;最后,根据管道最大腐蚀深度、腐蚀裕量及管道使用年限等数据,建立三者关系指数模型,以此预测管道剩余寿命。以中国某油气管道为研究对象,利用新建模型对管道剩余寿命进行预测,结果表明:模型的预测精度较高且不受限于数据的具体分布,作为管道剩余寿命的预测模型通用性较好。     

大数据时代企业人力资源管理变革的思考

我国的社会经济处于飞速发展阶段,信息技术水平也获得了质的飞跃,因此大数据在社会的各个领域中都得到了大力的推广和应用。在社会主义现代化建设中,大数据在企业HR(人力资源)中的应用,为其合理化管理带来了极大的便利性,并且随着人们对HR的关注度越来越高,企业的HR管理者的思维也在大数据的影响下更具备现代化的思考能力。文章中详细阐述了大数据时代下企业HR管理的影响因素,并深刻探讨了大数据时代企业HR管理存在的问题,同时也提出了对HR管理工作的变革策略。     

企业价值链优化的数量分析方法

分析企业价值链结构，进行企业价值链优化，对于提升企业核心竞争优势具有重要意义。通过对价值链的内涵和结构的重新思考，探讨了价值链优化的目标和方法。在对企业顾客价值实现程度和内部资源条件进行分析的基础上，结合动态成本分析和边际成本分析2种方法，建立了价值链优化的模糊线性规划模型。通过对轿车企业价值链结构的分析，给出了价值链优化模型的数值算例，并运用运筹学方法得出了最优的价值链成本结构。     

基于HRM技术的大白菜InDel标记高效检测技术构建及其应用

高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是基于核酸小片段之间的GC含量差异而导致双链核酸解链温度差异的一门检测技术,更多地被用于特定类型的单碱基突变筛查,很少见用于插入/缺失突变的检测。本研究从前期鉴定的可以有效区分大白菜自交系He102与06-247的593对多态性InDel引物中筛选到271对特异性好、呈共显性分布的InDel引物,采用软件TMUtility_1.5预测了差异目标片段的熔解温度(Tm)值,发现63对标记的Tm差值满足HRM分型的灵敏度(差值绝对值≥0.2℃)要求,进一步采用梯度PCR技术对上述63对引物进行PCR扩增和HRM分型,从中鉴定出20对适宜进行HRM分型的InDel标记。构建了适宜LightScanner-96高分辨率熔解曲线分析仪分析的高效检测体系,并在大白菜种质基因型精准鉴定、杂交种纯度高效鉴定方面得到成功应用。本研究开发的适宜HRM分型的InDel标记还可以作为一种标记储备用于构建遗传连锁图谱和DNA指纹图谱、鉴定杂交种纯度和真实性、关联分析、分子标记辅助育种等。基于此构建的高通量检测方法也为其它动植物材料InDel标记的高通量检测和应用提供借鉴。     

一部优秀的农业技术创新著作——学习《农业科技价值链系统创新论》有感

最近,中国农业科技出版社出版了由黄钢、徐玖平二位同志撰写的《农业科技价值链系统创新论》专著,全书分十二章探讨了科技价值链系统创新管理理论渊源,基于创新主体多元论的科技价值链和科技价值链的技术创新阶段发育理论,论述了技术创新三环模式、科技价值链链接机制、企业科技价值链的链接模式,并将科技价值链理论用于知识产权管理,用于跨国种子企业和中国种子企业的实证研究,用于中国种子企业和农业产业化龙头企业的实证研究.     

基于价值链的施工企业核心竞争力评价

以价值链理论为基础,在分析施工企业的价值链构成的基础上,将施工企业核心竞争力分解为价值链和延伸价值链各环节的能力及总体资源整合能力,并运用模糊综合评价方法建立了施工企业核心竞争力的模糊综合评价模型.     

农村电商不得不知道的六大行业知识

正一、农村电子商务概念1.什么是电子商务?电子商务是指以信息网络技术为手段,以商品交换为中心的商务活动。也可理解为在互联网(Internet)、企业内部网(Intranet)和增值网(VAN,Value Added Network)上以电子交易方式进行交易活动和相关服务的活动,是传统商业活动各环节的电子化、网络化。(摘自维基百科)     

基于MCMC模拟的MGPD模型及其在地质灾害风险度量中的应用

基于马尔科夫链蒙特卡洛(简记为MCMC)模拟的参数贝叶斯估计,对改进的广义帕累托分布(简记为MGPD)模型进行了优化,并利用该模型得到了地质灾害损失的在险损失值(简记为VaR)和条件损失值(简记为CVaR).以湖南娄底市地质灾害损失数据进行实证分析及模型适应性检验,结果表明:优化后的模型不仅具有很好的极值数据描述能力,而且具有较强的适用性.     

时标上具有正负项的非线性中立型动力方程非振动解的存在性

基于对微分方程非振动解的存在性的研究,考虑时标上的具有正负项的二阶非线性动力方程非振动解的存在性,主要通过时标上的导数积分运算,链式法则,含参量积分求导及中值定理,构造适当的映射,用Banach压缩映射原理得到它们非振动解存在的充分条件,进一步完善动力方程的振动性理论.     

网络环境下中小企业技术创新模式研究

以网络环境下的技术创新理论作为研究的理论基础,从网络环境的界定、技术创新的涵义、特征和中小企业技术创新概述入手,在全面、深入分析中小企业技术创新模式的基础上,分析了网络环境下影响中小企业技术创新模式的因素,指出了在网络环境下中小企业技术创新的主要模式,即产学研合作模式、虚拟企业模式、产业集群合作模式和价值链创新模式。结合我国目前的现状,就如何推动中小企业实现技术创新模式提出了建议。     

应用高分辨率熔解曲线技术分析水稻分子标记基因型

 【目的】验证高分辨熔解曲线（high-resolution melting curve analysis，HRM）技术在水稻分子标记分析中应用的可行性和可靠性，应用该技术对水稻重组自交系（RIL）群体及其亲本进行SSR、InDel和SNP标记基因型分析。【方法】以粳稻品种丽江新团黑谷（LTH）和籼稻品种三黄占2号（SHZ-2）及其衍生的RIL群体为材料，以纯合亲本LTH作为参比基因型，利用HRM技术分析一个G/A转换的SNP标记以及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）难以分辨的一个SSR标记和一个InDel标记的基因型。【结果】通过加入适量的参比DNA，HRM能够分辨2个纯合亲本及其衍生的纯合体和杂合体RI系的分子标记基因型，并且以加入20%模板量的参比DNA对3种基因型的分辨最好。利用该方法对作图群体的部分RI系进行分子标记基因型分析，结果与变性PAGE的分析结果完全吻合。【结论】验证了HRM应用于水稻SSR、InDel以及SNP标记分析的可行性和可靠性。相对于凝胶电泳分析，HRM具有分辨率高、高效、快速、操作简单、安全等优点，是一种在水稻分子标记分析中很有应用前景的技术。     

应用高分辨熔点曲线分析区分类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型

为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HRM分析可区分相差1个碱基的靶序列。因此,HRM分析可为P1和PCV2的分子诊断提供一种新的技术手段。     

柔性管理对新时期乡镇企业人力资源管理的启示

知识经济时代,乡镇企业迅猛发展,并面临前所未有的挑战,如何使乡镇企业在日趋激烈的市场竞争中立于不败之地,实施人力资源柔性化管理是其关键因素之一。据此,在对人力资源柔性管理的内涵、作用进行深入分析的基础上,从战略高度论述了乡镇企业组织对农民工实施人力资源柔性管理的意义,并提出乡镇企业柔性化管理农民工的具体对策。     

基于HRM获得与桃Tssd紧密连锁的SNP标记

【目的】植物中,SNP标记具有分布广泛、分辨率高、共显性和多态性高等特点,是遗传研究的常用分子标记。桃全基因组测序完成,获得了大量SNP位点。利用现有的SNP数据进行简单、快速的SNP基因分型是基因定位、品种鉴定和图谱构建等后续研究的基础。文章拟建立采用高分辨率熔解曲线进行不同类型SNP的基因分型方法,以获得与桃温度敏感半矮生型基因紧密连锁的分子标记。【方法】以普通生长型(ST)单株97-32-46为母本,温度敏感半矮生型单株03-94-2(Tssd)为父本进行人工杂交,利用其分离群体96个后代单株为研究材料。在定位目标基因的区间内开发连锁和不同类型的SNP标记的基础上,采用高分辨率熔解曲线进行SNP的基因分型并获得与目标性状紧密连锁的SNP标记。【结果】明确了DNA模板和Mg~(2+)是影响基因分型的关键因子,并确立了反应体系最佳浓度区间。在15μL反应体系中模板DNA的量低于5.0 ng时或Mg~(2+)浓度低于1.6μmol·L~(-1)时则不能完成PCR扩增和基因分型;根据亲本基因型和表型一致的SNP位点设计引物,扩增片段长度在140 bp左右。高分辨率熔解曲线分析可对由单个核苷酸变异引起的4种不同类型的SNP(A/T、A/G、A/C和C/G)进行基因分型,并正确区分了温度敏感半矮生型和普通生长型,与进行Sanger测序鉴定的结果一致。采用96孔板对温度敏感半矮生型和普通生长型各48个分离后代单株进行了PCR扩增和基因分型,确定了遗传距离。分型结果表明高分辨率熔解曲线分析技术可以将96个样杂交后代单株分为温度敏感半矮生型和普通生长型2种,正确地区分了A/A基因型和A/T基因型。在96个样品中仅1个没有成功扩增,在温度敏感半矮生型和普通生长型中各存在1个重组单株。获得与温度敏感半矮生型基因紧密连锁的SNP标记,遗传距离为2.11 cM。【结论】建立了基于高分辨率熔解曲线分析的SNP基因分型。尽管高分辨率熔解曲线分析技术无法区分两种不同纯合类型的SNP变异,但仍不失为区分已知变异SNP的有效方法。在已经获得桃大量SNP的基础上,该体系可用于桃的基因定位、遗传多样性和品种鉴定等研究。     

叠加马尔科夫链在年降水量预测中的应用

[目的]采用叠加马尔科夫链方法预测年降水量。[方法]利用位于川西高原的小金站1961～2010年年降水量资料,运用叠加马尔科夫链方法预测2001～2010年小金站的年降水量,并与该站实际观测值进行对比。[结果]2001～2010年小金站降水量的预测误差控制在10%以内的年份有7年,其中在5%以内的年份有4年,说明叠加马尔科夫链方法能较好地预测年降水量。但对于大旱或大涝年份降水量的预测,该方法仍存在着一定的缺陷,有待进一步改进。[结论]叠加马尔科夫链预测方法物理概念清晰,计算简便,为降水量预测精度的提高提供了一条值得探索的途径。