兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶疫苗的研制及安全、效力试验

本试验以免疫原性良好的兔多杀性巴氏杆菌Pm90株以及兔支气管败血波氏杆菌Bb82株作为菌种,选择蜂胶乙醇提取液的水溶物作为佐剂,研制兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶灭活苗,并进行了该疫苗的安全、效力试验。实验室生产的4批疫苗对巴氏杆菌和波氏杆菌的攻毒保护率均在90%以上。     

竹鼠多杀性巴氏杆菌灭活苗的制备及免疫效果

以蜂胶为佐剂,将已灭活的竹鼠多杀性巴氏杆菌菌株与蜂胶乙醇浸液等体积混合,制备蜂胶佐剂灭活苗,并对其物理性状、安全性和免疫保护率进行检测.结果表明,制备出的灭活苗物理性状稳定,上层为淡黄色的澄明液体,下层为灰白色沉淀,振摇后呈均匀的乳黄色悬浊液体.建立动物模型,小白鼠接种后没有出现不良反应,灭活苗具有较好的安全性.攻毒试验结果表明,灭活苗的保护率达78.6％,免疫效果良好.     

兔巴氏杆菌大肠杆菌油乳灭活苗的制备及效果测定

以多杀性巴氏杆菌(C-481)、致病性大肠杆菌O85、O119、O18等菌株制备的兔巴氏杆菌 大肠杆菌油乳灭活菌苗，经实验室免疫实验和中间实验表明，该菌苗在免疫后第14天即可产生坚强的免疫力；攻毒实验表明。该菌苗的保护率为93％，免疫期为9个月。免疫效果普遍反应良好。该菌苗在4℃可保存18个月以上。室温阴暗处可保存10个月以上。临床证明该菌苗能有效地控制巴氏杆菌与大肠杆菌在兔群中的流行。可进行推广应用。     

兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的小鼠免疫效果分析

 【目的】本试验以小鼠为动物模型，比较了兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白（IROMPs）的免疫原性及分析交叉免疫保护效果。【方法】分别以正常培养基和限铁培养基增殖兔多杀性巴氏杆菌C51-12和C51-3，采用Sarcosyl沉淀—超离法提取IROMPs和OMPs，并用SDS-PAGE比较两株之间的差异，同时用正常培养基增殖该菌制备灭活全菌抗原。免疫原性分析，将清洁级小鼠20只随机分成4组，5只/组，以C51-12株的全菌、IROMPs和OMPs作抗原分别免疫，采用间接ELISA检测免疫小鼠的相应抗体动态变化；免疫保护试验，分别采集经4次免疫后小鼠的抗血清，作1﹕10稀释腹腔注射小鼠，每组6只，18 h后用C51-12和 C51-3分别攻毒，比较上述抗血清所提供的交叉免疫保护力。【结果】前21 d，抗体滴度以全菌免疫组抗体滴度较高，随后IROMPs免疫组反超。最终抗体滴度：IROMPs组＞OMPs组＞全菌组。被动免疫时全菌抗血清和OMPs抗血清能够抵抗C51-12株攻毒，但对C51-3株提供的保护力较差；C51-12株攻毒，IROMPs抗血清组能够全部保护，C51-3株攻毒，5/6获得保护。【结论】IROMPs在小鼠动物模型中具有一定的交叉保护力，为进一步研究交叉保护因子奠定基础。     

禽多杀性巴氏杆菌、H9亚型禽流感二联灭活疫苗研制及免疫效力试验

采用鸡胚共同增殖禽多杀性巴氏杆菌和H9亚型禽流感病毒的方法制备的抗原中含巴氏杆菌数≥4×1010CFU/mL、H9亚型禽流感病毒含量≥109.38EID50/mL,经灭活后制备3批二联灭活疫苗并进行了相关检验。结果表明,所研制的3批二联疫苗的物理性状、无菌检验以及安全检验均符合相关质量标准;用3批疫苗分别免疫试验鸡和试验鸭,21 d后对禽多杀性巴氏杆菌免疫保护率均为90%以上,对H9亚型禽流感免疫保护率均为85%以上。     

猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达

根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌（T＋Pm）toxA基因序列（AF240778）设计1对引物,从猪源D型T＋Pm中扩增出toxA基因片段（3858 bp）,再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ（1084 bp）、ZH（1092 bp）、HM（906 bp）3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。     

新型基因工程亚单位菌苗对猪传染性胸膜肺炎的保护效力研究

 利用分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的重组表达产物和胸膜肺炎放线杆菌7型菌，研制了一种新型的基因工程亚单位菌苗并对此疫苗的免疫效力进行了研究。利用该疫苗免疫断奶仔猪，间隔3周加强1次，同时设空白对照组和一种商品化的三价细菌灭活苗组。首免后每周采血检测ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的ELISA抗体和7型菌的血凝抗体，第2次免疫两周后用猪胸膜肺炎放线杆菌1型菌株进行气管攻毒。从攻毒后症状、细菌分离、抗体检测、死后剖检对免疫效果进行评价。结果显示亚单位菌苗对于猪传染性胸膜肺炎有显著的保护力，能明显减轻临床症状和降低肺部损伤，效果优于商品化的细菌灭活苗。     

草鱼对点状气单胞菌和柱状屈桡杆菌二联菌苗的免疫反应

将酚灭活的点状气单胞菌和柱状屈桡杆菌菌苗按不同比例制备成二联菌苗，注射接种草鱼后，通过检测受免草鱼血清中的凝集抗体效价和攻毒试验，初步证明了由这两种菌制备的酚灭活菌苗，可刺激草鱼产生良好的免疫反应，免疫保护力达到５６．０％～７３．０％。     

应用ELISA检测鸭抗多杀性巴氏杆菌抗体的动态变化

应用ＥＬＩＳＡ间接法检测鸭抗多杀性巴氏杆菌抗体，具有快速及特异的优点。鸭免疫禽霍乱疫苗１周后，抗体滴度开始上升，４周后达到高峰。用巴氏杆菌Ｃ４８－１攻击不同抗体滴度的鸭只，抗体滴度为１：４００时，保护率为９０％，抗体滴度下降时，攻毒保护率也随即降低。     

湖北麻鸡多杀性巴氏杆菌的分离和PCR鉴定

从发病的湖北麻鸡中采集病料,通过细菌分离、生化鉴定,初步判定分离菌株为多杀性巴氏杆菌;应用PCR分别对病料组织和分离菌株进行检测,均能扩增出特异性的条带,PCR产物测序后经NCBIBlast分析,与多杀性巴氏杆菌同源性为99%。经过以上的试验分析,确诊为多杀性巴氏杆菌感染。