波长585 nm脉冲染料激光对成纤维细胞增殖以及其前胶原基因mRNA表达的影响

以不同能量密度的脉冲染料激光照射体外培养的正常皮肤的成纤维细胞,照射后继续培养24h,分别以MTT法检测其增殖功能,以定量PCR(LightCycler)法检测其细胞内不同类型的前胶原基因及SMADs mRNA的表达.结果显示能量密度为5 J/cm2和7 J/cm2的脉冲染料激光能抑制体外培养的正常皮肤的成纤维细胞的增殖功能(P＜0.05),在能量密度为5 J/cm2时能显著抑制Ⅰ型前胶原基因α1(P＜0.01)以及SMAD 2,3,4,7 mRNA的表达(P＜0.05或P＜0.01),下调Ⅰ型前胶原基因α1与Ⅲ型前胶原基因mRNA的比率.在能量密度为6,7 J/cm2时能抑制Ⅲ型前胶原基因α1mRNA的表达(P＜0.05),而对Ⅰ型前胶原基因α1,α2的表达与对照无显著性差异.提示波长585 nm脉冲染料激光对成纤维细胞的增殖及其胶原产生的某些相关基因的表达具有直接的作用,且与能量密度有关.     

玉米幼芽提取物对小鼠皮肤成纤维细胞体外抗氧化能力的影响

分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,将传代细胞均匀分成4组:Ⅰ组为空白对照组;Ⅱ组在培养体系中加入终浓度为200μm o l/L的H2O2作用2 h,复制氧化损伤模型;Ⅲ组和Ⅳ组分别用含20 m g/L的0501和0502号玉米幼芽提取物培养液培养24 h,然后再用Ⅱ组的处理方法对细胞进行氧化损伤,研究玉米幼芽提取物对皮肤成纤维细胞体外抗氧化效应的影响。结果表明,Ⅲ组和Ⅳ组细胞凋亡率极显著低于Ⅱ组(P<0.01);扫描电镜下Ⅱ组细胞的细胞膜出现皱缩穿孔等现象,Ⅲ组和Ⅳ组细胞完整性较好,细胞联系紧密;透射电镜观察,Ⅱ组细胞粗面内质网扩张,染色质边集,细胞内出现大量空泡,Ⅲ组和Ⅳ组细胞结构清晰,出现轻度的粗面内质网扩张。表明富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物对体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞具有抗凋亡保护作用,在细胞氧化损伤过程中,对细胞膜蛋白和结构性蛋白有保护作用。     

紫杉醇对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的；研究紫杉醇对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响。方法：用MTT法及RT—PCR法分别检测紫杉醇对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果：紫杉醇能明显抑制人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达，并呈剂量依赖性。结论：紫杉醇可通过抑制人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达而起到抑制病理性瘢痕增生的作用。     

急性心肌梗死患者血清Ⅰ型前胶原羧基端肽及Ⅲ型前胶原氨基端肽的变化及意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者发病后1个月内心肌纤维化指标的变化规律及其临床意义.方法采用放射免疫分析法测定42例急性心肌梗死发病后第2、7、14、28天血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)含量.结果AMI发病后第7、14、28天的血清PⅠCP和PⅢNP水平与对照组比较均明显升高(P>0.001),发病后第7、14、28天的血清PⅠCP及PⅢNP维持在较高水平,互相比较差异无显著性(P>0.05).结论〖HT5"F〗AMI患者血清PⅠCP和PⅢNP含量明显升高并持续1个月以上,反映AMI后心肌间质胶原的合成增加,致心肌过度纤维化.     

急性心肌梗死患者血清Ⅰ型前胶原羧基端肽及Ⅲ型前胶原氨基端肽的变化及意义

目的 :探讨急性心肌梗死 (AMI)患者发病后 1个月内心肌纤维化指标的变化规律及其临床意义。方法 :采用放射免疫分析法测定 42例急性心肌梗死发病后第 2、7、14、2 8天血清Ⅰ型前胶原羧基端肽 (PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽 (PⅢNP)含量。结果 :AMI发病后第 7、14、2 8天的血清PⅠCP和PⅢNP水平与对照组比较均明显升高 (P >0 .0 0 1) ,发病后第 7、14、2 8天的血清PⅠCP及PⅢNP维持在较高水平 ,互相比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :AMI患者血清PⅠCP和PⅢNP含量明显升高并持续 1个月以上 ,反映AMI后心肌间质胶原的合成增加 ,致心肌过度纤维化     

三氧化二砷对瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的影响

目的 研究三氧化二砷对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法 以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法和吸光度检测法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定三氧化二砷对成纤维细胞增殖和培养基中的胶原含量以及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响.结果 三氧化二砷对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,还能显著降低培养基中可溶性胶原的...     

shRNA抑制病理性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原的研究

目的 探讨RNA干扰阻断人Ⅰ型胶原α 1链(COL1α1)基因表达对病理性瘢痕的影响.方法 设计并合成针对COL1α1基因的短发夹状RNA(shRNA),构建shRNA达质粒.转染病理性瘢痕成纤维细胞后,分别用RT-PCR、比色法检测COL1α1 mRNA达、Ⅰ型胶原含量.结果 转染特异性shRNA质粒后.成纤维细胞中COL1α1 mRNA表达下降,Ⅰ型胶原合成减少.结论 shRNA表达质粒可下调病理性瘢痕成纤维细胞COL1α1基因表达,抑制了Ⅰ型胶原合成.     

半边旗5F对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究天然药物半边旗 5 F对瘢痕成纤维细胞的作用 ,以期寻找新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法 :以四甲基偶氮唑盐 (MTT)方法和吸光度检测法及逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法测定半边旗 5 F对成纤维细胞增殖和培养基中的胶原含量以及 、 型前胶原 m RNA表达的影响。结果 :半边旗 5 F对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,还能显著降低培养基中可溶性胶原的含量 (P<0 .0 1 )。上述抑制作用呈现药物浓度和作用时间依赖性。采用 RT- PCR法对 、 型前胶原的 m RNA检测显示随着药物质量浓度增高前两者的表达量降低。结论 :半边旗 5 F对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有显著的抑制作用 ,为寻找有效治疗病理性瘢痕的药物提供了新的思路     

美洲大蠊提取液对慢性难愈合创面Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白调控研究

目的 观察美洲大蠊提取液对大鼠慢性难愈合创面组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的表达,探讨其促愈机制。方法 将48只SPF大鼠随机分为急性创面对照组,慢性创面模型组、贝复济阳性组及美洲大蠊实验组,药物干预5、7、11 d后分批留取创面组织并处死,运用PCR方法测定创面组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达。结果 Ⅰ、Ⅲ型胶原在各组中的表达趋势曲线一致,第5天,对照组表达最高,模型组最低,从第5天开始,美洲大蠊实验组中Ⅰ、Ⅲ型胶原中表达呈上升趋势并高于阳性组,第7天达到高峰后逐渐稳定下降,第11天略低于阳性组（P<0.01）。结论 美洲大蠊提取液能有效提高大鼠难愈合创面前中期Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的表达从而促进创面愈合,并在后期能有效降低胶原蛋白的过度表达而减少瘢痕形成。     

玉米幼芽提取物对小鼠皮肤UVA照射损伤的保护作用

研究了玉米幼芽提取物(extract of maize plumule,EMP)对长波紫外线(UVA)损伤的小鼠皮肤超微结构、抗氧化酶活性及脂质过氧化作用的影响。结果表明,UVA模型小鼠真皮细胞内出现空泡变性,线粒体肿胀、嵴减少,粗面内质网和核周间隙扩张;表皮细胞微绒毛减少,细胞固缩,细胞核染色质边集。EMP保护的小鼠皮肤细胞损伤程度明显减轻,结构基本正常。EMP可显著提高UVA辐射小鼠皮肤组织中的SOD活性(P<0.01)及CAT活性(P<0.05),降低MDA含量(P<0.05),与VC的抗氧化作用一致。表明EMP能够抵抗UVA对皮肤组织的氧化损伤。     

五种甘肃道地中药对衰老模型小鼠皮肤的抗衰老作用研究

【目的】研究5种甘肃道地中药抗皮肤衰老作用的差异.【方法】用D-半乳糖处理体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞,分别用纹党、红芪、当归、大黄和半夏的水煎液干预后,试剂盒法检测皮肤成纤维细胞脂褐素(lipofuscin,LF)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bax蛋白的表达情况.【结果】与正常组相比,模型组小鼠皮肤成纤维细胞LF、MDA、Ⅲ型胶原蛋白含量、细胞凋亡及Bax蛋白表达显著增加,Ⅰ型胶原蛋白和HYP含量、细胞增殖能力及SOD、GSH-Px活性均显著降低.与模型组比较,各中药组小鼠皮肤成纤维细胞LF、MDA、Ⅲ型胶原蛋白含量、细胞凋亡及Bax蛋白表达呈降低趋势,Ⅰ型胶原蛋白和HYP含量、细胞增殖能力及SOD、GSH-Px活性均呈增高趋势,其中纹党组和红芪组上述指标改变更为明显.【结论】纹党、红芪、当归、大黄和半夏的水煎液可通过促进皮肤成纤维细胞增殖、提高抗氧化能力和抑制皮肤细胞凋亡发挥抗皮肤衰老的作用,纹党和红芪对皮肤的调节作用优于当归、大黄和半夏.     

扶正活血解毒方干预ANE诱导口腔黏膜成纤维细胞I型胶原表达的实验研究

目的 观察槟榔提取液（areca nut extract,ANE）对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原分泌的诱导作用及扶正活血解毒方的干预作用。方法 体外培养口腔黏膜成纤维细胞,ANE为诱导剂,扶正活血解毒中药药物血清（低、中、高）为干预物;用免疫细胞化学法检测细胞内I型胶原的表达,用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测培养上清I型胶原的含量。结果 ANE对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的合成有促进作用（P<0.01）,扶正活血解毒方含药血清（中、高）对ANE刺激下的FB胶原合成有抑制作用（P<0.05）。结论 扶正活血解毒中药可下调ANE诱导的口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的表达。     

shRNA抑制病理性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原的研究

目的 探讨RNA干扰阻断人Ⅰ型胶原α 1链(COL1α1)基因表达对病理性瘢痕的影响.方法 设计并合成针对COL1α1基因的短发夹状RNA(shRNA),构建shRNA达质粒.转染病理性瘢痕成纤维细胞后,分别用RT-PCR、比色法检测COL1α1 mRNA达、Ⅰ型胶原含量.结果 转染特异性shRNA质粒后.成纤维细胞中...     

跌打通痹膏对兔膝骨关节炎关节软骨MMP-13、Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的 观察跌打通痹膏对兔膝骨性关节炎关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、Ⅱ型胶原mRNA（COL-Ⅱ mRNA）表达的影响。方法 选用65只新西兰兔随机分成正常对照组、假手术组、模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组,每组13只。模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组采用改良Hulth造模法,正常组、假手术组不予处理,模型组、跌打通痹膏组、骨痛贴组分别用肢带、跌打通痹膏、骨痛贴膏贴敷4周,观察治疗后各组实验兔关节软骨改变情况,并检测关节软骨中MMP-13、COL-Ⅱ mRNA的表达。结果 （1）组织学关节软骨评分:跌打通痹膏组评分较模型组低（P<0.05）。（2）WMP-13mRNA检测：模型组MMP-13表达较正常对照组显著提高（P<0.01）,跌打通痹膏组MMP-13 mRNA表达较模型组降低（P<0.01）。（3）COL-Ⅱ mRNA检测：跌打通痹膏组COL-Ⅱ表达较模型组升高（P<0.01）。结论 跌打通痹膏能通过降低Ⅱ型胶原降解,抑制MMP-13 mRNA表达,从而有效保护膝骨关节炎模型兔关节软骨,延缓关节软骨退变。     

GX-50对中波紫外线辐射皮肤成纤维细胞的保护作用

为观察花椒中的提取物GX-50是否对UVB诱导的光老化皮肤细胞具保护作用,使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,通过观察不同剂量UVB照射后的细胞形态学改变确定后续实验的UVB单次照射剂量;MTT法检测不同浓度GX-50处理后的细胞活性;采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)细胞化学染色法确定皮肤细胞衰老程度;测定丙二醛(MDA)和ROS含量评估皮肤细胞氧化损伤的程度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞TGF-β1表达量的变化;Western blot法检测细胞胶原蛋白表达量的变化。结果显示UVB辐射成纤维细胞后,细胞胞体增大、颗粒增多、部分细胞死亡,在不引起细胞明显死亡的UVB最大剂量50 mJ/cm2作用下,10-6mol/L的GX-50在孵育24h时可显著增加成纤维细胞存活率(125.7%,P0.01);经UVB照射后细胞SA-β-Gal染色阳性率增加,GX-50预处理后辐射组的阳性率明显降低(45.9%,P0.05);UVB组与对照组相比,MDA、ROS含量明显上升,GX-50预处理后辐射组MDA、ROS含量分别下降了22.6%(P0.01),22.8%(P0.05),基本与对照组持平;UVB辐射后TGF-β1分泌减少,GX-50预处理后辐射组则明显上升(14.7%,P0.05);Western blot结果显示,UVB可显著抑制胶原蛋白的表达,而GX-50预处理后表达量则基本恢复。推断GX-50对UVB引起的皮肤成纤维细胞损伤起到了保护作用,其机制可能是清除自由基和抗氧化,同时活化被UVB抑制的TGF-β信号通路,从而增加了胶原蛋白的表达。     

CaM对小鼠胎儿成纤维细胞Hsp70表达的影响

[目的]证实小鼠胎儿成纤维细胞中钙调蛋白 (calmodulin,CaM) 基因参与热应激诱导型热休克蛋白70(Hsp70)的基因表达并明确其作用条件.[方法]取12.5 d孕鼠胚胎制备成纤维细胞(MEF),上述细胞随机分为对照组和热应激组:对照组在37℃条件下培养,热应激组包括I组(39℃、0.5 h),Ⅱ组(39℃,1 h),Ⅲ组(39℃,1.5 h),Ⅳ组(41℃、0.5 h),V组(41℃、1 h),Ⅵ组(41℃、1.5 h);每组3个重复.将选择的热应激组和对照组细胞分别加入不同浓度(25、50及100 mm=ol·L<'-1>)钙调蛋白拮抗剂W7,运用RT-PCR检测Hsp70、CaM mRNA表达量.[结果] 39℃和41℃热应激组Hsp70 mRNA表达量显著高于常温对照组(P<0.05):39℃应激1h的Hsp70 mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);39"C应激0.5 h和1 h CaM mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);41℃热应激组的CaM mRNA表达量与常温对照组比较差异不显著(P>0.05).在培养液中加100 mmol·L<'-1> W7、分别于37℃和39℃处理1 h后,其成纤维细胞的Hsp70 mRNA表达量极显著低于相应对照组 (P<0.01).[结论]中度热应激条件下,Hsp70和CaM基因表达量呈正相关,且39℃应激1 h可以显著诱导Hsp70和CaM基因表达;CaM通过某种途径参与了Hsp70基因表达.     

鱼鳞胶原复合止血海绵的制备及其效果的验证

为高值化开发利用鱼类加工副产物鱼鳞,以鱼鳞Ⅰ型胶原为原料,结合壳聚糖进行交联反应,通过正交实验优化制备工艺,获得具有蜂窝状多孔三维立体结构的鱼鳞胶原复合止血海绵。采用小鼠股动脉切面止血试验、豚鼠背部破损皮肤和健康皮肤的单次接触试验、小鼠肝脏吸附试验等对鱼鳞胶原复合止血海绵的止血特性、抗敏性能及生物相容性进行系统的比较研究。结果表明,鱼鳞胶原复合止血海绵最佳制备工艺为:胶原与壳聚糖配比7∶3,制备液总浓度1.4%,交联剂添加量0.015%,止血时间仅为(68±9)s;对豚鼠背部皮肤均无致敏性、无刺激性,安全性强;止血海绵经8周后可被小鼠的破损肝脏吸收。综上,鱼鳞胶原复合止血海绵具有良好的止血效果、安全性能和生物相容性。     

脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及OLR1基因转录表达的作用

【目的】研究短链和长链饱和脂肪酸,对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及脂代谢新因子氧化型低密度脂蛋白受体1(OLR1)转录表达的影响。【方法】分离培养小鼠前体脂肪细胞,用适宜浓度乙酸钠、硬脂酸钠和p38MAPK通路抑制剂处理,通过细胞计数检测处理24和48 h时相关基因mRNA的表达量。【结果】乙酸钠处理组小鼠脂肪细胞数量随处理时间延长显著下降(P<0.05),硬脂酸钠处理组对小鼠细胞数量无显著影响(P>0.05);乙酸钠和硬脂酸钠均显著上调PPARγ2、C/EBPα和OLR1 mRNA的表达(P<0.05);p38MAPK抑制剂能显著抑制PPARγ2和OLR1 mRNA的表达(P<0.05),但对C/EBPαmRNA表达无显著影响。【结论】乙酸钠可抑制前体脂肪细胞的增殖,但乙酸钠和硬脂酸钠均能促进前体脂肪细胞的分化;OLR1基因在前体脂肪细胞分化过程中通过p38MAPK通路发挥作用,且脂肪酸对前体脂肪细胞分化及OLR1转录表达的影响与p38MAPK通路密切相关。     

AG490对肥胖模型小鼠脂代谢及相关基因表达的影响

【目的】研究AG490阻断肥胖模型小鼠JAK2/STAT3信号通路对脂代谢及相关基因表达的影响。【方法】以雄性昆明小鼠为供试动物,构建肥胖模型。将肥胖模型小鼠分为2组,处理组用JAK2特异性抑制剂AG490(1 mg/(kg.d))腹腔连续注射2周,对照组腹腔连续注射相同剂量的生理盐水。2周后处死小鼠,检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白固醇(HDL-C)的含量;取脂肪组织提取总RNA,RT-PCR方法检测JAK2/STAT3信号通路基因(JAK2、STAT3)及脂代谢关键基因(FAS、PPARγ、HSL)的表达量。【结果】与对照组相比,AG490可显著降低小鼠血清中的HDL-C水平;与对照组相比,处理组脂肪组织中JAK2 mRNA表达量差异不显著(P>0.05),STAT3 mRNA表达量显著降低(P<0.05),脂代谢相关基因FASmRNA表达量极显著降低(P<0.01),PPARγmRNA表达量显著降低(P<0.05),HSLmRNA表达量差异不显著(P>0.05)。【结论】JAK2/STAT3通路可能通过影响脂肪组织中生脂基因的表达而调节体脂沉积。     

牛myf6基因克隆及在成纤维细胞中的表达

克隆了牛的myf6基因并构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成纤维细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株,利用Western印记、Real-time PCR技术检测myf6对成纤维细胞的影响。结果表明,与对照组相比,稳定转染后的成纤维细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P0.01),肌肉肌酸激酶基因mRNA表达量升高(P0.05),肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量也提高(P0.01)。细胞形态观察显示转染后的成纤维细胞未融合为肌管。由此可知,牛myf6基因可以在成纤维细胞中表达并且有促进成纤维细胞向肌肉细胞分化的功能。