意蜂三型蜂间哺育王浆蛋白组分差异的研究

为研究蜜蜂三型蜂幼虫期间食物的差异,现对意大利蜜蜂三型蜂间哺育王浆蛋白组分的差异性进行研究。对工蜂幼虫哺育浆、雄蜂幼虫哺育浆、蜂王幼虫哺育浆分别用水和磷酸缓冲液进行提取,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明:工蜂和雄蜂各日龄幼虫哺育浆间存在不同程度的差异;各个日龄蜂王幼虫哺育浆的蛋白质谱带基本相同;哺育浆分别经水和磷酸缓冲液提取,结果存在差异。     

意大利蜜蜂蜂王与工蜂幼虫甲基供体S-腺苷甲硫氨酸合成与代谢的差异

【目的】研究意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)蜂王与工蜂幼虫甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)合成与代谢的差异,为探索DNA甲基化与蜜蜂级型分化的关系提供理论依据。【方法】试验选用890只1日龄雌性蜂幼虫,分别来自5群姐妹蜂王群。其中445只进行人工育王(89只/群);剩余445只培育成工蜂(89只/群)。取3、4、5日龄蜂王和工蜂幼虫,测定其体内SAM合成与代谢关键酶基因表达和酶活性的差异。【结果】蜂王幼虫SAM含量随日龄的增加变化不显著(P0.05);工蜂幼虫SAM含量随日龄增加呈上升趋势(P0.05)。蜂王幼虫SAMS基因表达量随日龄增加呈梯度下降的趋势(P0.01),而工蜂幼虫SAMS表达随日龄变化不显著(P0.05);3日龄与4日龄时,蜂王幼虫SAMS表达量显著高于工蜂(P0.05),5日龄时,工蜂幼虫SAMS表达量显著高于蜂王(P0.05)。Dnmt1a与Dnmt3表达在两级型间差异不显著(P0.05),其中蜂王幼虫Dnmt1a表达随日龄增加无显著变化(P0.05),但其酶活性呈下降趋势(P0.05);工蜂幼虫Dnmt1a表达随日龄增加呈下降趋势(P0.05),其酶活性呈上升趋势(P0.01),其中3日龄与4日龄时,蜂王幼虫Dnmt1酶活性显著高于工蜂幼虫(P0.05),而5日龄时,工蜂幼虫Dnmt1酶活性显著高于蜂王幼虫(P0.05)。蜂王Dnmt3表达量随日龄增加呈下降趋势(P0.05),工蜂幼虫Dnmt3表达随日龄增加变化不显著(P0.05);蜂王幼虫Dnmt3酶活性随日龄变化不显著(P0.05),工蜂幼虫Dnmt3酶活性随日龄变化显著(P0.05),但蜂王幼虫Dnmt3酶活性在3、4、5日龄均显著高于工蜂幼虫(P0.01)。【结论】3—5日龄意大利蜜蜂蜂王幼虫与工蜂幼虫体内活性甲基供体SAM的合成与代谢存在差异。在4日龄之前,蜂王幼虫SAM的合成比工蜂活跃,4日龄之后,工蜂幼虫的SAM合成与蜂王幼虫相近;在4日龄之前,SAM参与DNA维持甲基化的代谢过程,蜂王幼虫比工蜂活跃,4日龄之后,工蜂幼虫比蜂王幼虫活跃;在3—5日龄,SAM参与DNA从头甲基化的代谢活性,蜂王幼虫始终不低于工蜂幼虫。     

王浆主蛋白MRJP7基因在意大利蜜蜂(Apis melliferaligustica Spinola)体内的表达

王浆蛋白是蜂王浆生物功能的物质基础,是由王浆蛋白基因家族(mrjps)编码合成的。但部分家族成员如MRJP7在王浆中的含量极少甚至检测不到。基因功能与其在生物体内的时空表达特性相关,为探究蜂王浆中含量较少的王浆主蛋白基因mrjp7在蜜蜂体内的表达和生物学功能,本研究利用荧光定量PCR技术对mrjp7在不同发育时期的工蜂和、成年工蜂、雄蜂和蜂王的不同发育时期和不同组织部位的表达进行定量分析检测。结果显示mrjp7在成年雄蜂体内的表达水平最低,成年蜂王次之,且在这两种蜜蜂类型它们的各不同发育时期和不同组织部位之间的表达量差异较小,其表达基本没有时空特异性。该基因在工蜂幼虫和蛹期的表达量同样较低且没有组织特异性,但在羽化后9日龄前后的哺育蜂王浆腺和头部脑组织内特异性高表达,其表达与工蜂的发育时期和组织密切相关。mrjp7在这与哺育蜂分泌蜂王浆王浆腺中的特异性高表达与哺育蜂所担负的哺育幼虫和蜂王的功能是相适应的,该结果在转录水平上证实了mrjp7该基因的的营养功能,为进一步的研究和应用打下了理论基础。。其在生殖和非生殖蜜蜂体内的差异表达可能与蜜蜂的生殖调控有关。     

蜜蜂（Apis mellifera L.）幼虫级型分化差异蛋白质组分析

【目的】对蜜蜂（Apis mellifera L.）蜂王与工蜂级型分化期的蛋白质组进行比较,以探明蜂王和工蜂在级型分化时期蛋白质表达调控方面的异同。【方法】采用双向电泳建立蜂王和工蜂级型分化期蛋白质组表达 谱,获得图谱中蛋白质表达的数量、表达量、等电点和分子量等信息,然后进行比较蛋白质组研究。【结果】在幼虫3日龄,蜂王表达288个蛋白质,工蜂表达259个蛋白质,2种级型蜂共有蛋白质为156个,其中25个蛋白质在蜂王中的表达量显著大于（P＜0.05）工蜂,34个蛋白质工蜂表达量显著大于（P＜0.05）蜂王,而蜂王和工蜂的特异蛋白质分别为132个和103个;到幼虫5日龄时,蜂王表达274个蛋白质,工蜂为236个,这2种级型蜂共有蛋白质点为95个,其中蜂王15个蛋白质的表达量显著大于（P＜0.05）工蜂,工蜂26个蛋白质的表达量显著大于（P＜0.05）蜂王,而蜂王特异蛋白质点为179个,工蜂特异蛋白质点为141个;到蛹11日龄时,蜂王蛋白质组有311个蛋白质点,而工蜂则有278个蛋白质点,2种蜂共有蛋白质点为194个,其中蜂王45个蛋白质的表达量显著大于（P＜0.05）工蜂,工蜂35个蛋白质的表达量显著大于（P＜0.05）蜂王,而蜂王的特异蛋白质点为117个,工蜂特异蛋白质点为84个。【结论】在蜜蜂3日龄、5日龄、11日龄时,蜂王和工蜂的蛋白质表达谱存在显著差异,蜂王表达的蛋白质总数和特有蛋白质数都较工蜂多,说明蜂王幼虫的基因表达和代谢比工蜂幼虫更加旺盛。2种级型蜂发育中所表达的共有蛋白质可能是它们发育所必须的管家蛋白质,但级型间部分共有蛋白质的表达模式存在较大差异,在3个日龄中蜂王和工蜂中所表达的特异蛋白质表明在级型分化中,不同级型需要不同的蛋白质来调节各自的发育。这些特异蛋白质是否是级型发育相关的功能蛋白质,还有待进一步的研究。     

意大利蜜蜂同日龄不同职能工蜂上颚腺的转录组学分析

为揭示意大利蜜蜂哺育蜂上颚腺中蜂王浆合成和分泌相关的分子机制,通过组建人工蜂群收集3日龄工蜂(3d)、10日龄哺育蜂(10dN)、10日龄采集蜂(10dF)、21日龄哺育蜂(21dN)和21日龄采集蜂(21dF),利用高效液相色谱技术检测5种不同职能工蜂上颚腺中10-羟基-2-癸烯酸(10-hydroxy-2(E)-decenoic acid,10-HDA)的含量,并在转录组学水平全面分析上颚腺中调控蜂王浆合成和分泌密切相关的基因。结果表明:工蜂上颚腺中10-HDA含量随日龄的增加呈逐渐增加趋势,其中21dF和21dN上颚腺中10-HDA的含量均显著高于3d(P0.05),但同日龄采集蜂上颚腺中10-HDA的含量高于相同日龄哺育蜂;RNA-seq分析发现,46个差异基因在10dN上颚腺中的表达量显著高于3d、10dF和21dF,同时在21dN上颚腺中的表达量也显著高于21dF;GO和KEGG富集分析显示这些差异基因主要富集在脂肪酸代谢、能量代谢等方面,暗示哺育蜂的上颚腺可能通过增加脂肪酸代谢和能量代谢等促进蜂王浆中相关脂肪酸的合成。综上,在排除日龄影响下,本研究测定了不同职能工蜂上颚腺中10-HDA的变化趋势,同时筛选了46个与哺育蜂上颚腺中蜂王浆合成和分泌密切相关的基因,为深入阐明其分子机制提供基础,也为研究膜翅目昆虫上颚腺的功能提供新视角。     

转录组学分析意大利蜜蜂脑部哺育行为相关基因

【目的】意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）哺育行为在维护蜂群稳定和生产蜂王浆方面发挥重要作用。本研究通过人工组建蜂群获得相同日龄的哺育蜂和采集蜂,筛选出排除日龄因素干扰后哺育蜂脑部与哺育行为密切相关的差异表达基因,揭示哺育蜂脑部调控哺育行为的分子网络。【方法】通过人工组建蜂群的方法获得3日龄工蜂、10日龄哺育蜂和采集蜂、21日龄哺育蜂和采集蜂,解剖各组工蜂头部获得脑组织样本,应用RNA-seq技术对5组脑部样本（3日龄工蜂、10日龄哺育蜂、10日龄采集蜂、21日龄哺育蜂、21日龄采集蜂）中基因表达量进行转录组测序的全面分析,筛选出哺育蜂脑部哺育行为密切相关的差异表达基因,并对这些差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。同时利用实时荧光定量PCR（qPCR）对随机选取的4个差异表达基因的表达模式进行验证。【结果】RNA-seq分析筛选得到32个与哺育蜂哺育行为密切相关的差异表达基因,这些基因在10日龄哺育蜂脑中表达量均显著高于3日龄工蜂、10日龄采集蜂、21日龄采集蜂,且在21日龄哺育蜂脑中的表达量也显著高于21日龄采集蜂。GO富集分析发现上调差异表达基因主要参与氧化还原酶活性、气味结合、跨膜运输等功能。KEGG富集结果显示,上调的差异表达基因主要参与蛋白质代谢（核糖体）、能量代谢（氧化磷酸化、碳代谢、三羧酸循环、淀粉和蔗糖代谢、氮代谢、其他聚糖降解通路）、信号转导（Toll和Imd信号通路、光传导、鞘脂代谢）、消化作用（溶酶体）,其中显著性富集在鞘脂代谢和其他聚糖降解通路。qPCR结果显示3个上调差异表达基因（LOC409709、LOC551813、LOC409708）和1个下调差异表达基因（LOC551165）表达模式的检测结果与测序数据一致。【结论】通过对3日龄工蜂、10日龄哺育蜂、10日龄采集蜂、21日龄哺育蜂、21日龄采集蜂5组样本脑部进行全面分析,获得相同日龄哺育蜂和采集蜂脑部基因的转录组图谱,分析得到了脑部哺育行为相关的32个上调差异表达基因。哺育蜂脑部的差异表达基因主要通过信号转导和能量代谢等途径调控哺育蜂的哺育行为。     

王浆高产蜜蜂咽下腺磷酸化蛋白质组分析

【目的】通过对王浆高产蜜蜂（Apis mellifera L.）（浙江浆蜂）哺育蜂（6-12 d）咽下腺的磷酸化蛋白质组分析,以期探明蛋白质磷酸化修饰对王浆分泌的生物学意义。【方法】将哺育蜂咽下腺蛋白质液内酶切后,用固相金属离子亲和层析色谱法（IMAC）、强阳离子交换（SCX）及LC-MS/MS和生物信息学分析,对工蜂咽下腺磷酸化蛋白质组进行研究。【结果】在哺育蜂的咽下腺中,共鉴定117个蛋白质,其中6个蛋白质的6条磷酸肽段的8个位点发生磷酸化修饰。这些磷酸化蛋白质是王浆主蛋白1和7的前体、与蛋白翻译合成相关的60S酸性核糖体蛋白P0、P1、P2和60S核糖体蛋白L15。【结论】哺育蜂咽下腺核糖体蛋白发生的磷酸化修饰主要为促进王浆蛋白的高效合成,而磷酸化的王浆蛋白1和7可保证浆蜂在王浆高产的前提下仍保证其王浆具合理的钙磷比,提高营养价值,以满足蜂王产卵和幼虫发育的营养需求。研究结果在蛋白质磷酸化水平上为揭示浆蜂王浆的高产机理奠定了新的理论基础。     

意大利蜜蜂工蜂幼虫饲料中适宜色氨酸水平

【目的】研究意大利蜜蜂（Apis mellifera）工蜂幼虫饲料中适宜色氨酸水平,为探明意大利蜜蜂工蜂幼虫发育阶段的色氨酸营养需要提供理论依据。【方法】选用1日龄工蜂幼虫1 008只,随机分为7组,每组3个重复,每个重复48只幼虫,分别饲喂色氨酸水平为7.84、8.84、9.84、10.84、11.84、12.84和13.84 mg?g^-1 的7种日粮。取5日龄工蜂幼虫虫体测定色氨酸羟化酶（tryptophan hydroxylase,TPH）基因与5羟色胺受体（5-hydroxytryptamine receptors, 5-HTR）1、2α、2β、7基因表达量;取6日龄工蜂幼虫虫体测定总蛋白、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）;取6日龄工蜂幼虫血淋巴测定其中游离色氨酸水平;7日龄时,统计工蜂化蛹率;取9日龄工蜂蛹测定色氨酸体沉积量,统计21日龄工蜂出房数目,计算羽化率。【结果】色氨酸水平为10.84 mg?g^-1时,6日龄工蜂化蛹率最高,6日龄工蜂幼虫虫体蛋白含量最高,9日龄工蜂蜂蛹色氨酸体沉积最多,21日龄工蜂羽化率最高。色氨酸水平为10.84-11.84 mg?g^-1时,5日龄工蜂幼虫TPH基因表达量最高,5日龄工蜂幼虫5-HT受体1、2α、2β基因表达水平最高,6日龄工蜂幼虫血淋巴游离色氨酸含量最高。5日龄工蜂幼虫5-HT受体7基因表达量在色氨酸水平为7.84-11.84 mg?g^-1时,处于较低水平,12.84-13.84 mg?g^-1时显著高于其他水平（P＜0.05）。6日龄工蜂幼虫MDA含量在色氨酸水平为7.84-11.84 mg?g^-1时较低,12.84-13.84 mg?g^-1时含量显著高于其他水平（P＜0.05）。6日龄工蜂幼虫T-AOC在色氨酸水平为7.84-9.84 mg?g^-1时处于较低水平,10.84-11.84 mg?g^-1时处于较高水平,12.84-13.84 mg?g^-1时显著高于其他水平。【结论】意大利蜜蜂工蜂幼虫饲料适宜色氨酸水平为10.84-11.84 mg?g^-1。     

蜂蛹的开发前景

蜂蛹又名蜂胎、蜂子，是蜜蜂幼虫在封盖房未羽化的变态虫体。蜂蛹（包括雄蜂蛹、工蜂蛹及少许蜂王幼虫）在发育中均以王浆、蜂蜜、花粉为食，其营养丰富，是一种高蛋白、低脂肪、含多种维生素和微量元素的理想保健食品。[第一段]     

意蜂头部重量与其王浆腺重量的相关性

以意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica spinola)为材料。研究了5,7,9和11日龄共300只工蜂样本的头部重量及其王浆腺重量的相关性,发现意蜂的工蜂头部重量与其王浆腺重量之间存在着密切相关.5,7,9和11日龄工蜂头部重量与其王浆腺重量的表型相关系数(r_P)分别为0.609 0,0.829 5,0.587 9和0.450 9;遗传相关系数(r_A)分别为0.974 3,0.993 3,0.956 0和0.989 6.显著性检验结果 P<0.01,达到极显著水平,所以,用工蜂头部重量代替王浆腺重量进行选择是可行的.     

快速简便地制备猪生长激素

 将猪垂体在酸性（pH5.5）条件下制备垂体匀浆液，经硫酸铵分级分离后，用Sephadex G-100凝胶柱层析纯化，得到电泳纯的分子量为21.7KD的猪生长激素，产率为1.22g/kg新鲜垂体。胫骨法测定具有促生长活性，其氨基酸组成、氮末端氨基酸及电荷不均一等性质均与文献报道基本一致。此法较之前人的方法有简便易行、周期短的优越性，活性组分集中，得率也较高，是制备有活性的猪生长激素较为理想的方法。     

外源激素对甘薯不同品种茎尖培养与植株再生的影响

利用激动素 (KT)、α 萘乙酸 (NAA)、6 苄基氨基嘌呤 (6 BA)、吲哚乙酸 (IAA)和赤霉素 (GA3)等外源激素 ,对甘薯不同品种茎尖分生组织进行处理 ,研究其愈伤组织培养效果和植株再生情况。结果表明 :甘薯品种间对培养基有较强的选择性 ,在不同外源激素作用下品种成苗率存在明显差异 ;外源激素以 6 BA对甘薯茎尖分生组织培养效果较好 ,其甘薯茎尖成苗率可达 74%～ 88%。     

促黄体素（LH）和促黄体释放激素类似物（LRH-A）防止内蒙古山羊流产的研究

研究结果表明：在山羊配种后一次肌注促黄体素（LH）200单位或促黄体释放激素类似物（LRH-A）300微克,防止内蒙古山羊流产具有明显的效果和经济效益,可以使内蒙古山羊的繁殖率提高20%以上。並用放射免疫测定法对正常妊娠山羊和流产山羊外周血液中的孕酮和雌激素的含量进行了测定。LRH-A防止内蒙古山羊的流产作用是：通过刺激山羊自身垂体释放促黄体激素的功能,从而促进卵巢黄体合成和分泌孕酮,以维持母畜的正常妊娠。     

辣椒子叶培养及其植株再生的研究

在辣椒子叶组织培养中,外植体的幼嫩和部位影响形态发生,通常较嫩的子叶和子叶中部容易诱导愈伤组织和植株再生;辣椒品种的不同,其培养效果差异很大;不同激素配比的培养基,影响愈伤组织形态发生和分化,当有一定量的细胞分裂素时,促进芽的分化,而在细胞分裂素和生长素配合使用时,即使生长素含量很低,也易诱导根的发生.     

母牛注射PMSG及其抗血清后血清孕酮含量和PMSG的残留量

20头母黄牛在发情周期第12天注射孕马血清促性腺激素(PMSG)3000IU,2天后注射15-甲基-前列腺素 F_(2α)3mg,于发情当天注射兔抗 PMSG 血清2.4ml。应用酶免疫方法检测 PMSG 处理前和处理后笫48,84和240小时母牛血清孕酮含量和 PMSG 的残留量。结果表明:PMSG 在黄牛体内的半衰期长;根据PMSG 处理后第10天的血清孕酮水平可以预测母黄牛的超数排卵效果。     

饲粮添加淫羊藿、补骨脂对鸡血浆生殖激素浓度的影响

１２日龄粤黄鸡２９０只，分为５组按日粮量依次分别添加０、２％淫羊藿、１３３％淫羊藿＋０６７％补骨脂、０６７％淫羊藿＋１３３％补骨脂和２％补骨脂，试验期为７０ｄ。结果表明：（１）８３日龄时，添加淫羊藿、补骨脂提取物可使雄鸡睾酮（Ｔ）浓度及雌鸡雌二醇（Ｅ２）浓度升高，其中２％淫羊藿可使雌鸡Ｅ２浓度显著升高（Ｐ＜００５）。（２）８３日龄时，添加２％补骨脂可使雄鸡血浆促卵泡素（ＦＳＨ）浓度显著高于对照组（Ｐ＜００５），添加０６７％、１３３％、２％的补骨脂可使雌鸡血浆ＦＳＨ浓度显著升高（Ｐ＜００５）。上述结果表明：这两种中药提取物能促进鸡生殖激素的分泌。     

诱导法与营养液配方对马铃薯试管结薯的影响

研究了含有不同蔗糖,6-BA,B9,NAA,GA3与ABA的培养基配方以及不同的诱导方法对马铃薯试管结薯的影响。结果表明:10%蔗糖 2mg·L-16-BA 10mg·L-1B9 1mg·L-1NAA的组合处理有利于试管薯的发生与膨大;而高浓度的GA和IAA则抑制块茎的形成。分步诱导结薯法优于直接诱导结薯方式。     

甜菜胞质雄性不育系与其保持系激素含量的差异

以甜菜3个细胞质雄性不育系及其相应保持系为材料,对营养生长阶段叶片中的激素含量进行了研究。结果表明：在甜菜营养生长阶段的3个时期中,玉米素Z含量表现为不育系高于其相应保持系,而生长素IAA含量则为保持系高于其不育系,Z／IAA和GA3／IAA表现为不育系高于其相应保持系。     

母鸡在排卵周期和抱窝血浆“黄体生成素类似物”和孕酮的浓度变化

本文用放射免疫分析法(RTA)测定了泰和母鸡在排卵周期和抱窝的不同生殖阶段,血浆“黄体生成素类似物”(“LH”)和孕酮(P)的浓度。结果表明:母鸡在排卵周期血浆“LH”和P的平均值分别为3.67±0.60ng/ml(x±SE)和459.50±30.87pg/ml,排卵前6～3h,血浆“LH”和P均出现浓度高峰,其峰值比相应的平均值高出1.1和1.3倍,差异非常显著(P<0.01)。抱窝鸡血浆“LH”和P在24h内的平均值分别为2.27±0.22ng/ml和319.46±12.15pg/ml,显著地低于母鸡在排卵周期的平均值(P<0.05),且在24h内的不同时间,未见有浓度高峰出现。     

茶树插穗生根过程中内源激素动态变化

分析了茶树插穗生根过程中内源激素含量及相互比值动态变化。结果表明：3种主要激素在不同生根率品种间的变化趋势基本一致。插穗刚脱离母体时,IAA和ABA含量大幅度下降,而ZR略有下降;在愈伤组织形成及根原基孕育期IAA,ZR含量迅速增加,而ABA降低并保持较低浓度;生根后IAA,ZR下降而ABA迅速增加恢复至正常生长水平。在生根过程中起主要调节作用的是IAA和ABA。离体时不同生根率品种间插穗IAA／ABA值与其插穗生根率成正相关。可以作为插穗生根能力的主要指标。