PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡基因表达的影响

[目的]研究阻断PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响。[方法]用抑制剂LY294002(LY)作用于细胞1 h,然后将布鲁氏菌16 M侵染细胞,应用实时定量PCR检测16 M对巨噬细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性和Bax mRNA表达的影响。[结果]阻断PI3K/Akt信号通路可显著提高16 M介导的caspase-3活性和Bax mRNA水平。[结论]PI3K/Akt信号通路可调控布鲁氏菌介导的细胞凋亡。     

PI3K/Akt及MAPK/Erk1/2信号通路在病毒感染中的作用

Phosphatidylinositol 3-kinases/Akt（PI3K/Akt）信号通路是执行多种生物学功能的信号调控系统,即在PI3K的调节下Akt通过调节多种蛋白分子的活性来执行PI3K调控的多种生理学反应,如细胞存活和细胞增殖,血管生成,代谢调控和细胞迁移等。近年来越来越多的研究发现PI3K/Akt信号通路还参与了多种病原微生物的感染和致病过程,深入研究PI3K/Akt信号通路在病原微生物感染中的作用,对于揭示病原微生物致病机理具有重要意义。     

PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究

 【目的】探讨ALV-J在宿主细胞中复制与PI3K/Akt信号转导通路的关系。【方法】将血管瘤病变型ALV-J毒株HN06和骨髓瘤病变型ALV-J毒株NX0101分别感染DF-1细胞,通过Western blot、Real-time PCR、IFA和ELISA等方法,观察细胞Akt蛋白磷酸化水平、病毒RNA表达水平和病毒蛋白表达水平等指标。【结果】HN06株和NX0101株在体外细胞中复制水平有差异。HN06株的早期感染可引起Akt转导通路的活化,病毒引起的Akt磷酸化具有病毒滴度依赖性,而且能被PI3K特异性抑制剂LY294002所抑制,表明HN06株诱导的Akt活化是PI3K途径依赖的。LY294002可在病毒感染早期呈剂量依赖性地显著降低受染细胞中HN06 RNA水平、囊膜蛋白水平和细胞培养物上清中的病毒粒子含量。【结论】PI3K/Akt信号转导通路活化对HN06株在细胞感染早期具有重要的作用,该结果与已报道的有关细胞PI3K/Akt信号转导通路参与NX0101株的早期感染的结论一致。本研究为进一步阐明ALV-J入侵宿主细胞和复制的精确机制等研究奠定了基础。     

EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究

【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P_4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P_4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P0.01),凋亡指数显著降低(P0.05)。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低(P0.01),LY294002组S期细胞比例显著降低(P0.05);Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高(P0.01),而LY294002组EECs细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。     

~(60)Coγ射线对大鼠性激素水平以及PI3K/Akt信号通路蛋白表达的影响

【目的】探讨~(60)Coγ射线对大鼠血清性激素水平及PI3K/Akt/Foxo3a信号通路蛋白表达的影响,明确辐射对卵巢组织损伤的分子机制.【方法】通过一次6.0 Gy~(60)Coγ射线对大鼠进行照射后,分别在第3、7、14、21天,通过TUNEL法观察卵巢组织细胞凋亡情况、血清LH、FSH和雌激素(E2)水平及免疫组化法观察卵巢组织Akt、磷酸化Akt、Foxo3a、磷酸化Foxo3a蛋白水平的表达.【结果】辐射损伤造成卵巢颗粒细胞明显凋亡(P0.01);而且随着辐射时间的延长细胞凋亡数量逐渐增加,在辐射第21天达到高峰(P0.01);大鼠血清FSH、LH和E2水平随着辐射对卵巢功能的损伤而逐渐降低(P0.01);卵巢组织蛋白测定总Akt, p-Akt、Foxo3a蛋白的表达呈现逐渐增加趋势(P0.01),尤以总Akt和Foxo3a蛋白的表达在辐射第21天最显著(P0.01);而p-Foxo3a蛋白表达逐渐下降(P0.01),尤以辐射第21天最显著(P0.01).【结论】辐射导致大鼠POF的原因,一方面激活PI3K/Akt/Foxo3a信号通路,导致颗粒细胞以及卵母细胞凋亡,另一方面垂体腺细胞凋亡影响促性腺激素分泌.     

流产布鲁氏菌ATP/GTP结合蛋白基因缺失株保护力及安全性研究

为筛选具有诊断标记的布鲁氏菌病疫苗菌株,本研究利用同源重组和负筛选技术,构建了流产布鲁氏菌株2 308的ATP/GTP结合蛋白基因缺失株BDA14,并通过菌落染色和凝集特性,培养传代,小鼠接种试验及怀孕羊攻毒试验对其生物学特性、安全性和免疫效果进行了研究.结果表明:1)缺失菌株BDA14为粗糙型菌株,体外培养传代表型不发生改变;2)缺失菌株BDA14在小鼠体内的毒力与亲本菌株2308相比显著降低,且不产生针对OPS(O-antigen)的抗体;3)缺失菌株BDA14可提供与疫苗株RB51相当的攻毒保护力;4)缺失菌株BDA14对怀孕靶动物的安全性显著提高,接种怀孕羊不引起流产.说明ATP/GTP结合蛋白基因缺失株BDA14作为安全、有效且能鉴别诊断的疫苗菌株有明显优势.     

肝细胞胰岛素抵抗模型中PRKCZ的表达及其与胰岛素抵抗的相关性

目的检测肝细胞胰岛素抵抗模型中肝癌HepG2细胞中PRKCZ的表达,并分析其与胰岛素抵抗的关系。方法通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PRKCZ在胰岛素抵抗和正常情况下的表达,生物信息学方法分析PRKCZ与胰岛素信号通路蛋白的相互作用。结果与正常对照组相比,肝细胞胰岛素抵抗模型组中PRKCZ表达量明显下降。蛋白相互作用网络表明PRKCZ与PIK3CA和Akt有直接的相互作用。结论 PRKCZ蛋白可能通过与PDPK1、PIK3CA、Akt1、GSK3B的相互作用,影响胰岛素信号通路PI3K/Akt的正常转导,引起胰岛素抵抗。     

三叶因子3对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨TFF3基因在非小细胞肺癌中的作用及其对凋亡的影响。方法免疫组织化学法检测组织芯片31例肺腺癌、21例肺鳞癌、10例正常肺组织TFF3表达阳性率;慢病毒包装TFF3基因ORF序列及TFF3-shRNA基因质粒、转染、嘌呤霉素筛选获得稳定过表达及沉默TFF3基因的A549细胞株;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法验证TFF3基因和蛋白表达水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和信号通路分子Akt表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肺腺癌和鳞癌组织TFF3蛋白阳性表达率显著高于正常肺组织(P0.05),Ⅲ级肺癌组织中TFF3阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ级(P0.05),有淋巴结转移的肺腺癌和鳞癌组织中TFF3阳性表达率高于无淋巴结转移组织(P0.01)。过表达TFF3的A549细胞(A549-TFF3)中TFF3基因及蛋白水平显著高于对照组,沉默TFF3基因的A549细胞(A549-shTFF3)中TFF3 mRNA及蛋白水平较对照组明显降低(P值均0.01)。Western blot检测Bcl-2/Bax、p-Akt、p-Akt/Akt在A549-TFF3组显著高于对照组(P0.01);在A549-shTFF3组Bcl-2/Bax、p-Akt表达水平显著低于对照组(P0.01),p-Akt/Akt表达水平低于对照组(P0.05),Akt表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞结果显示A549-TFF3细胞凋亡率较低(P0.01),A549-shTFF3细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01)。结论非小细胞肺癌组织TFF3高表达,与病理分级及淋巴结转移有相关性。过表达TFF3在非小细胞肺癌细胞中可能通过激活Akt信号通路抑制肺癌细胞凋亡,促进肿瘤细胞恶性增生。     

布鲁氏菌S2 WboA基因缺失株的构建及免疫效果

【目的】WboA基因编码光滑型布鲁氏菌脂多糖（LPS）O－侧链合成必须的糖基转移酶,该基因的缺失或破坏会影响布鲁氏菌光滑型表型的形成。本研究拟构建WboA基因缺失的重组粗糙型布鲁氏菌,以使布鲁氏菌弱毒疫苗与野毒株布鲁氏菌感染相区分。【方法】以猪源光滑型布鲁氏菌S2株为研究对象,通过同源重组将氯霉素抗性基因（Cmr）完全替代S2株的WboA基因,获得重组粗糙型布鲁氏菌rS2-WboA株。【结果】rS2-WboA株在适宜的培养基（TSA）上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×107 CFU rS2-WboA免疫Balb/c小鼠和豚鼠,1个月后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×1011 CFU rS2-WboA菌攻毒Balb/c小鼠后,不会引起死亡,并且能抵抗200 CFU强毒M28的攻击。小鼠试验显示了rS2-WboA与原始株S2相似的保护性和更高的安全性,其保护性也略高于另一重组株rS2-WbkC。【结论】WboA可作为构建重组粗糙型布鲁氏菌疫苗株缺失的靶基因。     

多囊卵巢综合征与PI3K/Akt信号通路的关系

多囊卵巢综合症(PCOS)是女性常见的生殖功能障碍性疾病,主要表现为卵巢的雄激素过多及排卵障碍,是引起女性不排卵性不孕的主要原因。PCOS患者主要表现为胰岛素抵抗和高胰岛素血症,而PI3K/Akt信号通路是胰岛素发挥生理作用的主要信号通路,并且Akt的下游底物GSK-3是糖原合成的主要调控因子,本文就PI3K/Akt与胰岛素抵抗的关系做一综述,并对PCOS的治疗进行了展望。     

卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关性

细胞自噬是哺乳动物细胞物质代谢的一个重要机制,与细胞凋亡共同参与卵巢卵泡的发育和闭锁,并发挥重要的作用。近年研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号通路参与卵巢疾病的发生。PI3K和AKT的过度激活可使原始卵泡过早发育以及卵泡过快凋亡,卵巢颗粒细胞作为卵泡发育重要的支持细胞,其功能的减退或凋亡很可能引发一系列女性内分泌方面的疾病。FOXO3a转录因子是PI3K/AKT信号通路下游的重要靶蛋白之一,参与抗增殖和凋亡。本文就关于卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关进展加以综述。     

FGF2通过MAPK信号通路影响奶牛乳腺分支形态变化

为确定FGF2调节奶牛乳腺分支主要信号通路,首先将青春期奶牛乳腺类器官镶嵌在鼠尾Ⅰ型胶原中并添加FGF2作三维培养;通过FGFR1受体抑制剂(FGF2+PD173074组)、PI3K/AKT信号通路抑制剂(FGF2+LY-294002组)或MAPK/ERK信号通路抑制剂(FGF2+U0126组)阻断信号通路,确定不同处理下84 h时奶牛乳腺分支率;利用Western blot检测处理时间0、15、60、240和600 min时各组p-AKT、AKT、p-ERK和ERK相对蛋白表达量。研究发现,FGF2主要通过MAPK信号通路影响奶牛乳腺分支。文章揭示FGF2在影响奶牛乳腺分支形态发生中起主要作用的下游信号通路,对奶牛乳腺分支形态发生分子机制研究具有推动作用。     

利用JSRV构建啮齿动物LPA模型研究进展

针对绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)构建啮齿动物鳞屑样生长型肺腺癌(Lepidic predominant adenocarcinomas,LPA)模型的问题,采用文献检索的方式,以"JSRV"、"adenocarcinomas"、"mouse model"为检索词,对利用JSRV构建啮齿动物LPA模型的相关文献进行归纳整理。结果表明:该模型主要构建方法为干扰质粒介导体内细胞转化或培育转基因动物;该模型中被激活的信号通路为肿瘤经典信号通路PI3K/Akt及MAPK信号通路;该模型具备相对完善的生物信息学数据支撑,是深入探讨LPA分子水平致病机制的良好模型。在LPA的致病机制以及LPA不同发病阶段靶向药物筛选方面有待进一步研究。     

Beclin-1复合物在镉诱导PC12细胞自噬中的作用

PC12细胞培养过程中添加镉和/或PI3K抑制剂LY294002,免疫印迹法检测Beclin-1复合物和LC3-II的表达变化,研究其在自噬中的作用。结果表明:20μmol·L-1镉处理不同时间后,Beclin-1、class III PI3K和Bcl-2的表达总体呈现先升高后降低的趋势;联合LY294002后显著抑制了Beclin-1,class III PI3K、Bcl-2和LC3-II的表达水平(P0.05或P0.01)。说明镉暴露PC12细胞后,促使Bcl-2/Beclin-1复合物解离,Beclin-1进一步和class III PI3K结合,参与调节自噬。     

南蛇藤提取物靶向maspin抑制胃癌转移机制

利用过表达maspin的人胃癌MGC803细胞,加入不同浓度的南蛇藤提取物(20、40、80、160μg·mL~(-1))作用24 h后,Western blotting法分析南蛇藤提取物增强抑癌基因maspin的抑制胃癌转移的作用及分子机制。结果表明:与对照组相比,Akt、p-Akt、ERK、P38蛋白的表达水平显著降低,且呈现一定的剂量依赖性。说明南蛇藤提取物能够增强抑癌基因maspin的抑制胃癌转移的作用,其分子机制可能与PI3K/Akt和MAPK信号转导通路相关。     

印楝素对小菜蛾胚胎细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨印楝素对小菜蛾Plutella xyllostella胚胎细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。【方法】将体外培养的小菜蛾胚胎细胞分为印楝素处理组和未处理组,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖的抑制率,激光共聚焦镜检PI染色后的细胞死亡和DAPI染色后的凋亡小体,通过Western-blotting检测各组细胞Caspase-3的表达情况以及通路蛋白Akt的磷酸化水平。【结果】印楝素对小菜蛾胚胎细胞有明显的增殖抑制作用,且呈现浓度依赖性,24 h的IC_(50)为4.4μg·mL~(-1)。印楝素处理后的细胞经PI染色后能明显观察到死亡细胞,DAPI染色后可见凋亡小体;Caspase-3蛋白发生剪切,并且抑制Akt的磷酸化水平。【结论】印楝素对小菜蛾胚胎细胞的增殖有明显的抑制作用,并通过抑制Akt信号通路的活化,诱导细胞产生依赖于Caspase-3的Ⅰ型凋亡。     

丁酸钠对IPI-2I细胞中Claudin-3表达的影响

以IPI-2I为细胞模型,利用1.5mmol·L-1丁酸钠对IPI-2I细胞进行处理,通过CCK8检测、通路阻断技术、蛋白质免疫印迹和实时荧光定量试验,探讨丁酸钠对IPI-2I细胞Claudin-3表达的影响及调控信号通路情况。结果表明:1.5mmol·L-1丁酸钠可通过激活细胞的GPR109A受体和Akt信号通路以增加细胞中Claudin-3的表达量。     

MyoD介导肌肉特异性基因染色质重塑激活与成肌分化控制

骨骼肌纤维的数目由出生前肌源细胞的成肌分化进程所决定,直接影响家畜的生长潜能和肉质.MyoD依赖的肌肉特异性基因的染色质重塑激活是控制成肌分化的重要方式,其作用模式已有一些报道.PI3K/Akt和p38信号也参与了这一过程的调控.对这一研究进展进行了综述.     

磷脂酰肌醇3-磷酸对UV-B诱导蚕豆保卫细胞中过氧化氢产生和气孔关闭的影响

【目的】研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）催化产物磷脂酰肌醇3-磷酸（PI3P）对紫外线B（UV-B）诱导保卫细胞中过氧化氢（H2O2）产生和气孔关闭的影响,为进一步阐明植物细胞转导UV-B辐射信号的机制提供依据。【方法】以蚕豆（Vicia faba L.）表皮条为材料,采用PI3K的抑制剂沃曼青霉素（WM）和LY294002（LY）来抑制PI3P的形成,采用二苯基碘（DPI）和水杨基氧肟酸（SHAM）分别抑制H2O2形成的NADPH氧化酶途径和细胞壁过氧化物酶途径,通过气孔开度分析和激光扫描共聚焦显微镜技术,确定PI3P在0.8 W•m-2 UV-B辐射诱导蚕豆保卫细胞H2O2产生和气孔关闭中的作用。【结果】WM和LY能显著抑制UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭;外源H2O2处理能显著逆转WM和LY对UV-B诱导气孔关闭的抑制效应,但WM和LY不能抑制外源H2O2诱导的气孔关闭;UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭能被活性氧清除剂和SHAM显著抑制,但不能被DPI抑制。【结论】PI3P通过诱导蚕豆保卫细胞中产生于过氧化物酶途径的H2O2形成来介导UV-B辐射诱导的气孔关闭。     

EGF上调TRPM7诱导肿瘤细胞迁移的分子机制研究

目的：探讨表皮生长因子（EGF）上调顺时受体电位 M7（TRPM7）以及 TRPM7参与 EGF诱导肿瘤细胞迁移的分子机制。方法 Western blot技术用于检测 Akt和vimentin的蛋白表达,钙成像技术用于细胞内钙离子浓度的检测,全细胞膜片钳技术用于记录TRPM7电流,激光共聚焦技术检测细胞骨架蛋白 F-actin的形态。结果 Western blot的结果显示EGF显著增加A549细胞Akt的磷酸化水平;PI3K阻断剂wortmanin可显著抑制 EGF上调TRPM7电流的作用;EGF孵育 A549细胞可上调 vimentin的蛋白表达水平,并改变细胞骨架蛋白 F-actin的荧光强度以及形态;稳定转染 TRPM7-shRNA可抑制高钙引起的细胞内钙升高及 EGF对细胞形态及F-actin表达的作用。结论 EGF可能通过PI3K-Akt信号通路上调TRPM7膜蛋白表达和通道功能,抑制钙离子内流,从而影响 EMT的产生和 F-actin的聚合,最终诱导细胞迁移。