玉米乙烯应答元件结合蛋白基因启动子克隆与功能验证

为了给玉米转基因研究提供更多的非生物逆境诱导启动子,寻找只在逆境胁迫条件下适当驱动外源抗逆基因的表达,在生物信息学分析的基础上,克隆与水稻DREB1B转录因子基因同源的玉米乙烯应答元件结合蛋白基因sb CBF6的启动子psb CBF6,在非生物逆境应答元件分析和实时定量PCR验证其非生物逆境胁迫响应特性后,用以构建驱动报告基因GUS的表达载体,并使用基因枪法转化玉米愈伤组织,通过愈伤组织的GUS荧光值与荧光素酶发光值的比值,评价psb CBF6启动子在非生物逆境胁迫及激素诱导条件下的驱动活性。结果表明,sb CBF6基因在各种非生物逆境胁迫下差异表达。psb CBF6启动子长1 479 bp,存在多种与非生物逆境胁迫应答相关的调控元件,可在非生物胁迫条件下驱动外源抗逆基因在转基因植物中诱导表达。试验结果为研究抗逆转基因玉米提了供参考。     

仔猪慢性猪瘟与水肿病混合感染的治疗

2003年5月，我市和平镇2养猪户所饲养的42头2月龄左右的长本二元杂交仔猪，其中进行1次猪瘟免疫的24头，相继发病，死亡26头，死亡率占饲养数的62％，其他16头治愈。经综合诊断为慢性猪瘟与水肿病混合感染，情况如下：     

副结核分枝杆菌map0862基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为探索MAP0862蛋白在分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,研究构建了MAP0862的原核表达map0862-pET32a(+)质粒,并对其进行了诱导表达。以副结核分枝杆菌P10基因组DNA为模板,经PCR方法扩增副结核分枝杆菌map0862基因片段,将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中。将重组子转化到大肠杆菌BL21(DE3),在E.coli中诱导表达带组氨酸标签的map0862-pET32a(+)的融合蛋白。结果显示,经IPTG诱导表达出约55 kD的融合蛋白,用副结核阳性血清进行Western blot检测,证明MAP0862重组蛋白具有良好的免疫原性。     

猪场繁殖母猪饲养的几个重要环节

我国近年来由国外引进了大量的种猪,这些种猪大多都是经过高强度选育品种,具有较高的市场经济价值。但现在的母猪与其祖先比较对营养变得更加敏感,所以母猪营养供给要求更严格。1重视妊娠母猪饲养管理     

母猪各阶段的精细饲养

1 后备母猪(3月龄～初次配种) 科学合理的饲养方案应使后备母猪在220～240日龄体重达到130～140千克,膘厚达18～20毫米,有过2次正常的发情,从而在第3个发情期配种.要实现此目标,应采用如下的饲养方案:45～75千克体重阶段饲喂生长育成猪饲粮,自由采食;75～100千克体重阶段饲喂小母猪育成期饲粮,适当限制饲喂.     

鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗的研制

为研制鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗,以鸭疫里默氏菌血清1型 RAf63株和2型 RAf34株为菌种,培养,灭活,浓缩,混合后制成二价灭活疫苗。2倍量接种6 d 樱桃谷鸭测定疫苗的安全性;接种6 d 樱桃谷鸭,免疫后5、10、14、21、35、49、63、70 d,进行攻菌试验,测定疫苗的免疫原性。结果表明,该疫苗安全,免疫后14 d 产生保护,保护率为90％,免疫持续期可达60 d。研制成功可用于预防由血清1型和2型鸭疫里默氏菌引起的鸭传染性浆膜炎。     

玉米HVA22基因启动子的克隆与功能验证

利用转基因技术转化利用外源抗性基因,可提高玉米对非生物逆境的抵抗能力,改良其在不良环境下的稳产性。但是,在过去的研究中,大多采用组成型启动子启动外源抗逆基因过量表达,虽然可以改良转基因株系的抗逆性,但其生长发育受到不同程度抑制,适应性代价较大。用非生物逆境诱导启动子,可培育出只在逆境胁迫下表达的转基因抗逆品种,避免正常条件下抗逆基因过量表达的不良影响。本研究以水稻HVA22蛋白质的氨基酸序列为探针,搜索玉米基因组同源mRNA序列HVA22,用PlantCARE软件分析并同源克隆其上游启动子序列,实时荧光定量PCR验证HVA22基因在非生物逆境胁迫下的差异表达,构建HVA22基因启动子HVA22s启动GUS基因的表达载体,基因枪法转化玉米愈伤组织,GUS染色检测启动活性。结果表明,玉米HVA22s启动子长度1478 bp,含有多种与非生物逆境应答相关的调控元件。HVA22基因在高温胁迫,以及脱落酸和乙烯诱导下上调表达。用HVA22s启动GUS基因转化的玉米愈伤组织,在脱落酸诱导、甘露醇模拟高渗处理、低温和高盐胁迫条件下,GUS染色均可显现靛蓝色斑点,说明HVA22s启动子确有非生物逆境启动功能,进一步验证其启动活性后可运用于玉米抗逆转基因研究。     

自制克炎灵治疗奶牛乳腺炎

1995年至今,我们用自制克炎灵治疗奶牛乳腺炎30余例,收到良好效果。1方剂组成与制法 黄芩、黄柏、青黛,桅子各50克,胆粉、冰片各10克,粉碎,混匀,过筛(120目),为粉剂;加凡士林250克,混匀成膏剂。2应用方法     

布鲁氏菌S2 WboA基因缺失株的构建及免疫效果

 【目的】WboA基因编码光滑型布鲁氏菌脂多糖（LPS）O－侧链合成必须的糖基转移酶，该基因的缺失或破坏会影响布鲁氏菌光滑型表型的形成。本研究拟构建WboA基因缺失的重组粗糙型布鲁氏菌，以使布鲁氏菌弱毒疫苗与野毒株布鲁氏菌感染相区分。【方法】以猪源光滑型布鲁氏菌S2株为研究对象，通过同源重组将氯霉素抗性基因（Cmr）完全替代S2株的WboA基因，获得重组粗糙型布鲁氏菌rS2-WboA株。【结果】rS2-WboA株在适宜的培养基（TSA）上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×107 CFU rS2-WboA免疫Balb/c小鼠和豚鼠，1个月后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×1011 CFU rS2-WboA菌攻毒Balb/c小鼠后，不会引起死亡，并且能抵抗200 CFU强毒M28的攻击。小鼠试验显示了rS2-WboA与原始株S2相似的保护性和更高的安全性，其保护性也略高于另一重组株rS2-WbkC。【结论】WboA可作为构建重组粗糙型布鲁氏菌疫苗株缺失的靶基因。     

牛结核病诊断用特异性抗原的研究进展

本文综述了牛结核病诊断中几种特异性结核蛋白的研究进展。牛结核病的诊断方法主要是基于细胞免疫的皮肤变态反应和基于抗原抗体反应的血清学方法。目前牛结核病的主要诊断试剂为牛型提纯结核菌素(PPD),由于PPD与卡介苗及环境分枝杆菌存在交叉反应,导致特异性较低。根据这一情况,各种特异性抗原不断被发现并用于诊断。