葡萄松散型愈伤组织的培养及其白藜芦醇含量的测定

【目的】获得葡萄(Vitisvini fera L.)松散型愈伤组织,并了解其白藜芦醇含量的变化。【方法】以葡萄的叶、叶柄和茎分别作为外植体,在不同激素组合(6-卞氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))的培养基(以B5培养基为基本培养基,含30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,进行愈伤组织的诱导和继代培养,并利用高效液相色谱法(HPLC)对不同来源愈伤组织中的白藜芦醇含量进行测定。【结果】以葡萄叶为外植体时,诱导的愈伤组织出愈率很低;以叶柄和茎为外植体时,愈伤组织的出愈率均较高。利用叶柄和茎获得松散愈伤组织时,其诱导培养基组成分别是:B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L和B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L,其继代培养基均为B5培养基+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L。在诱导培养基产生的愈伤组织中,白藜芦醇含量由高到低的顺序为叶柄>叶>茎。以叶、叶柄和茎为外植体诱导愈伤组织时,其白藜芦醇含量最高的培养基分别为B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L、B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L和B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L。【结论】葡萄叶柄和茎易被诱导产生松散的愈伤组织,且经多次继代可以用于建立悬浮培养体系;葡萄愈伤组织中的白藜芦醇含量随外植体及培养基组成的不同而有所差异。     

虎杖叶愈伤组织的诱导和白藜芦醇含量的测定

[目的]诱导虎杖叶的愈伤组织并测定其中白藜芦醇的含量。[方法]以虎杖叶为组织培养材料,在28℃和黑暗培养条件下,在含有浓度0.2 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和浓度1 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）的MS诱导培养基中进行诱导,15 d后把诱导出的愈伤组织转接到相同培养基中培养15 d,转接3次后,把愈伤组织切下放置在相同培养基上继续培养3次后,采用HPLC法测定虎杖叶愈伤组织中白藜芦醇的含量。[结果]诱导出的愈伤组织生长状况良好,并且测得虎杖叶愈伤组织中白藜芦醇的含量为0.24 mg/g。[结论]由叶诱导出的愈伤组织中含有白藜芦醇成分,用HPLC法测定其含量,方法简便、迅捷,结果可靠。     

硝酸银对葡萄愈伤组织生长及其白藜芦醇含量的影响

以‘黑比诺’葡萄叶柄诱导并继代10个月的愈伤组织为试验材料,通过在培养基中(B5+1.0 mg/L KT)分别添加0、1、5、10、20、30 mg/L不同浓度的AgNO3,研究了AgNO3对愈伤组织生长和白藜芦醇累积的效应,结果表明,除5 mg/L AgNO3外,其他几种浓度处理均对愈伤组织的生长产生抑制作用;添加10 mg/L的AgNO3对愈伤组织中白藜芦醇的累积效果最佳,含量达17.884μg/g,高出对照3.6倍;但AgNO3浓度过高(30 mg/L)时,白藜芦醇含量明显下降;当浓度为5 mg/L时,白藜芦醇的产量最大,为18.878μg/瓶,是对照的4.7倍.     

巨峰葡萄外植体愈伤组织的诱导和植株再生

选取了栽培品种巨峰作为试材,进行了外植体愈伤组织诱导和植株再生的研究．通过葡萄品系巨峰无菌外植体的获得,叶片的愈伤组织诱导、再分化,以器官发生途径实现植株再生．结果表明：外植体消毒灭菌过程中,用1g／L汞处理7min,外植体污染率和茎尖褐变的比率适中,而且茎尖被诱导分化的成活率最高,可达30．0％．最适的分化培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．01mg／L;叶片愈伤组织诱导的培养基选择MS附加5．0mg／L6-BA和0．5mg／LNAA较为适宜;MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．05mg／L最适宜巨峰葡萄愈伤组织再生不定芽;将所得的不定芽继代增值诱导生根,1／2MS＋IBA0．2mg／L为理想的生根培养基,根长适中,根数较多．初步建立了巨峰葡萄栽培品系的再生体系．     

不同因素对淮山茎尖愈伤组织诱导的影响

以3个淮山品种为材料,比较不同培养基及培养条件对淮山茎尖愈伤组织诱导的影响。结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂4.0 g/L是诱导淮山茎尖愈伤组织较好的培养基,诱导率达88.9%;光照与黑暗两种不同的培养条件对愈伤组织的诱导无显著差异。     

杜鹃红山茶愈伤组织诱导条件的优化

为明确不同处理对杜鹃红山茶愈伤组织诱导的影响,以8年生杜鹃红山茶为材料,研究不同外植体材料、灭菌方式、培养基种类、激素种类及配比、活性炭浓度等对杜鹃红山茶愈伤组织诱导的影响.结果表明:(1)在相同的灭菌方式下,叶片外植体愈伤诱导率均明显高于叶柄外植体和花瓣外植体.采用0.1％HgCl2灭菌5 min,叶片外植体愈伤诱导率最高,达48.89％.(2)MS培养基是最适合叶片和花瓣外植体愈伤组织诱导的基本培养基,叶片和花瓣在该培养基中的愈伤诱导率均最高,分别达42.12％、37.62％.(3)培养基中添加不同浓度的6-BA与GA3对叶片外植体愈伤诱导率具有显著影响,低浓度的6-BA和高浓度的GA3有利于提高愈伤诱导率,愈伤诱导率最高的激素组合为1 mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA+0.6 mg/L GA3,诱导率达61.67.(4)外植体褐化率随添加活性炭浓度的增加呈逐渐降低的趋势,添加活性炭浓度为1.2 g/L时,叶片和花瓣外植体褐化率最低且愈伤诱导率处于最高水平.     

树兰的组织培养研究

以树兰茎段为外植体,研究不同植物生长调节物质对其愈伤组织诱导、不定芽增殖及生根培养的影响。结果表明,茎段可同时诱导出愈伤组织、不定芽。愈伤组织诱导以NAA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.4 mg/L效果最好,愈伤组织诱导率达24.44%;以NAA 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.2 mg/L对不定芽的诱导效果最好;生根培养以1/2MS+NAA 1.0 mg/L+活性炭1.0 g/L+蔗糖25 g/L培养基最佳,生根率达93.06%。     

贵长猕猴桃茎段高效再生体系的建立

以贵长猕猴桃茎段为外植体,研究不同激素组合培养基对愈伤组织诱导、不定芽分化增殖、无菌苗生根等的影响。结果表明,贵长猕猴桃茎段在MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂粉8 g/L培养基上愈伤组织诱导率相对最高,达100.0%,且愈伤组织生长状况相对较好,质地最优,呈黄白色湿润致密状,在MS+6-BA 5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂粉8 g/L培养基上不定芽出芽率相对最高,达83.33%,在MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+GA_3 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂粉8 g/L培养基上不定芽增殖率相对最高,达100%,继代培养6代时的平均繁殖系数达6.48;不定芽在含IBA 0.6 mg/L的1/2MS培养基上培养生根率相对最高,达到95.83%,且形成庞大的根系,50株试管苗经炼苗移栽成活率可达96.0%。     

葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量的影响因素

以葡萄的叶片、叶柄及茎段诱导的愈伤组织为试验材料,考察紫外线照射、硝酸银处理和杂菌污染对其愈伤组织中白藜芦醇含量的影响。结果表明:经硝酸银处理的愈伤组织中白藜芦醇含量随处理浓度的提高呈现先增加后减少的变化趋势,在浓度为10 mg/L时,白藜芦醇含量达到最大;经紫外线照射的愈伤组织中白藜芦醇含量随照射时间的延长先增加后减少,茎段与叶片经紫外线照射3 min后白藜芦醇的含量最高,而叶柄经紫外处理5 min后白藜芦醇的含量最高。染菌的愈伤组织中白藜芦醇含量也明显高于对照。因此,在所试验的范围内提高葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量,硝酸银的适宜浓度为10 mg/L,紫外线照射时间为3~5 min,另外杂菌感染也有助于葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量的提高。     

黄瓜花药培养愈伤组织诱导及再生的研究

以10个黄瓜多代自交系为试材,研究了黄瓜花药小孢子不同发育时期、基因型、预处理时间、植物生长调节剂对愈伤组织的发生和分化的影响.试验结果表明,小孢子在单核中后期时愈伤组织诱导率最高;不同基因型愈伤组织诱导率不同;4℃低温预处理72h最适宜诱导花药愈伤组织;诱导培养基(基本培养基为B5+蔗糖50 g/L+琼脂7g/L,下同)中添加0.25 mg/L6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L AgNO3时愈伤组织平均诱导率最高;较优的生芽和生根培养基分别为0.5 mg/LNAA+1.5 mg/LKT+1.0 mg/L AgNO3和0.1mg/L6-BA+0.5 mg/LNAA+1.0ng/LAgNO3(有机元素加倍);基因型和培养基是愈伤组织发生和分化的主要影响因素.     

广西主栽葡萄品种果实白藜芦醇及其糖苷HPLC定量分析

[目的]广西湿热气候条件下生长成熟的葡萄中白藜芦醇及白藜芦醇苷的含量,为今后进一步研究南方地区鲜食与酿酒葡萄奠定基础.[方法]以广西湿热地区主栽葡萄品种巨峰、夏黑、Fry、Carlos和Nobel为材料,使用高效液相色谱法( HPLC)定量分析其果实白藜芦醇和白藜芦醇苷含量.[结果]在5个品种中,巨峰葡萄果实中的白藜芦醇苷含量最高,达到15.621 mg/L,其次是夏黑,为12.062 mg/L;白藜芦醇含量最高是Nobel,为0.276 mg/L,其次是巨峰,为0.206 mg/L;巨峰葡萄具有较高的白藜芦醇及其糖苷含量,其总含量达到15.827 mg/L,其次是夏黑葡萄,其总含量达到12.048 mg/L.[结论]巨峰葡萄在广西湿热环境中能产生较多的白藜芦醇.     

EMS诱变巨峰葡萄愈伤组织筛选抗寒突变体的研究

用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理巨峰葡萄愈伤组织,结合添加L-羟脯氨酸(L-Hyp)培养筛选,定向选择抗寒突变体。试验结果表明:诱变巨峰抗寒突变体的最佳组合为EMS浓度3%～5%,处理时间2h。经检测诱变后的再生苗愈伤组织的游离脯氨酸含量均有增加,丙二醛含量均有下降,酶活性均有增强。试验表明用EMS诱变处理巨峰葡萄愈伤组织可获得抗寒突变体。     

Comparison of phenolic profiles and antioxidant activities in skins and pulps of eleven grape cultivars(Vitis vinifera L.)

Eleven grape cultivars were analysed to explore the variety differences of fresh grape phenolic profiles. The results showed that free phenolics were predominant in grape skins and pulps, and showed the higher antioxidant activities than bound. In 11 cultivars, Muscat Kyoho extracts had the highest total phenolic content in skins(10.525 mg GAE g~(–1) FW) and pulps(1.134 mg GAE g~(–1) FW), and exhibited the highest DPPH radical scavening capacity(EC_(50)=11.7 μg mL~(–1)) and oxygen radical absorbance capacity(ORAC) value(190.57 μmol TE g~(–1) FW) of free phenolic in skin. In addition, the most abundant phenolics in grape skins were found to be flavonoids such as kaempferol in Kyoho skin(541.2 μg g~(–1) FW), rutin, catechin and epicatechin in Muscat Kyoho skin(262.3, 86.3 and 70.0 μg g~(–1) FW, respectively). Furthermore, the principal component analysis showed a strong difference of phenolic profiles with the cultivars, existing forms and distributions. Pearson correlation coefficient analysis showed a significant linear correlation between total phenolic content and antioxidant activity(P0.05). Therefore, both skins and pulps were rich sources of bioactive phenolic compounds, and Muscat Kyoho was the ideal source among all samples.     

玉米自交系愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

玉米的组织培养比较困难,其再生体系还不完善,建立骨干自交系稳定、高效的遗传转化体系是玉米转基因技术的必要前提。以玉米常用自交系齐319、478、502、黄C和7922不同大小（1.0、1.5和2.0 mm）的幼胚为外植体,探讨不同基因型、胚大小和植物生长调节剂浓度对幼胚再生的影响,从而建立玉米高频再生体系。结果表明：以1.5 mm大小的齐319幼胚为外植体,愈伤诱导率最高,达到了86.2%;1.5 mg/L的24-D有利于胚性愈伤的形成和胚性的保持;两步法分化培养可以提高愈伤组织分化、再生成苗。确定了玉米自交系齐319较适合的培养程序为：将1.5 mm大小的幼胚盾片向上接于诱导培养基（N6＋24-D 1.5 mg/L＋L-脯氨酸0.7 g/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂粉8 g/L＋硝酸银5μmol/L）,在25℃下暗培养20 d;挑选胚性愈伤组织在温度25℃、暗培养条件下进行继代培养,继代培养基与诱导培养基相同,每14 d继代1次;将愈伤组织继代42 d后转移至分化培养基1（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖60 g/L＋gelrite 3 g/L）,继续暗培养10 d左右,待愈伤组织形成象牙白色的块状物且有绿点出现时,将其转移到分化培养基2（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖30 g/L＋gelrite3 g/L）进行光培养,2～3 d即可分化出苗;待幼苗长到4～5 cm高时,移至生根培养基（1/2 MS＋IBA0.8 mg/L＋蔗糖30 g/L）,14～21 d幼苗长出大量的根系,形成完整的植株。     

中药白芍愈伤组织的培养及其中芍药苷的测定

[目的]建立中药白芍愈伤组织培养的方法,并测定其中芍药苷的含量。[方法]以白芍叶、茎为外植体,接种于不同的愈伤诱导培养基和继代培养基上培养愈伤组织,并提取愈伤组织中的芍药苷,用TLC和HPLC法测定愈伤组织中芍药苷的含量。[结果]适合白芍茎的诱导愈伤培养基是1/2MS+0.2 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,叶的最适诱导培养基是1/2MS+1.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA,白芍愈伤继代培养适合培养基为1/2MS+0.1 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。经HPLC测定每克干白芍愈伤组织中的芍药苷含量为0.068 9 mg。[结论]中药白芍的叶和茎可诱导形成愈伤组织,且形成的愈伤组织中含有芍药苷。     

葡萄风信子基因转化受体系统的建立

以葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)品种"紫葡萄"(Cantat)的鳞茎和叶片为外植体,通过植物组织培养再生系统的建立和抗生素敏感性试验,建立了稳定的葡萄风信子基因转化受体系统。结果表明,葡萄风信子的鳞茎和叶片均可被诱导形成大量的愈伤组织;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA,其诱导频率可达100%;鳞茎诱导愈伤组织的最适培养基为MS+3.0 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA,其诱导频率达91.2%;愈伤组织分化不定芽的最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,生根最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1%AC;筛选卡那霉素的临界质量浓度为60 mg/L,羧苄青霉素的适宜质量浓度为300 mg/L。     

白子菜快速繁殖研究

[目的]探究白子菜组织培养最佳培养基配方实现其快速繁殖。[方法]研究不同培养基配方对白子菜组织培养过程中愈伤组织的产生、芽和根分化效果的影响。[结果]④MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA 1.2 mg/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂粉6 g/L为白子菜形成愈伤组织的最佳培养基;⑤花宝一号＋BA 0.1 mg/L＋NAA 0.4 mg/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂粉6 g/L为诱导愈伤组织形成芽的最佳培养基;瑏瑢MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA 1.2 mg/L＋蔗糖20 g/L＋活性炭1 g/L＋琼脂粉6 g/L为最佳生根培养基。[结论]活性炭对白子菜组织培养有影响,具有抑制愈伤组织形成和促进生根的作用。     

金银花愈伤组织诱导及绿原酸含量测定

优化金银花愈伤组织诱导主要条件,建立愈伤组织培养体系并测定其绿原酸含量。结果表明,金银花芽为最佳的诱导外植体,经过70%酒精30 s、5%的次氯酸钠10 min消毒处理,接种于激素配比为NAA 1.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.75 mg/L+6-BA 0.15 mg/L的MS培养基中,暗培养9 d后再进行光、暗交替培养,可诱导出淡黄色,疏松、生长旺盛的愈伤组织;愈伤组织生长曲线呈S型,24 d生长量为(21.62±0.54)g/瓶;通过高效液相检测,愈伤组织每100 g样品含有绿原酸57 mg。经验证金银花愈伤组织诱导条件稳定,含一定的绿原酸为进一步建立细胞悬浮培养体系高效生物积累金银花细胞及绿原酸功能成分奠定基础。     

不同培养基和激素浓度处理对草地 早熟禾愈伤组织诱导的影响

以3种不同的草地早熟禾种子为外植体,研究了不同培养基、不同浓度的2,4-D、BA及水解酪蛋白对愈伤组织诱导的影响。试验表明:(1)MN6培育基有利于愈伤组织的诱导;(2)种胚愈伤组织的诱导和继代宜采用MN6 2,4-D3mg/L BA0.2mg/L的培养基;(3)水解酪蛋白对草地早熟禾种子愈伤组织诱导的影响不大;(4)3种草地早熟禾种子中,新哥莱德(Nuglade)出愈率较高。     

紫叶加拿大紫荆组织培养研究

研究了外植体采集时间,不同质量浓度的6-BA、NAA、蔗糖以及不同部位茎段对紫叶加拿大紫荆增殖生长的影响,并初步研究了基本培养基I、BA、NAA对生根的影响。结果表明,紫叶加拿大紫荆外植体最佳的采集时期为5月;其增殖培养基为WPM+6-BA 1.5～2.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L,增殖系数最高达3.3;带愈伤组织的下部茎段的增殖效果好于不带愈伤组织上部茎段,上部茎段在高质量浓度的6-BA中增殖效果好;基本培养基、IBA质量浓度、NAA质量浓度对生根率有影响,最佳的配比是MS+IBA 5 mg/L+NAA 0.5 mg/L。