超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温（-196℃）对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）和谷胱甘肽还原酶（GR）等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著升高（P〈0．05）,较未添加保护液组显著降低（P〈0．05）,GR的活性则显著低于鲜精组（P〈0．05）,但显著高于未添加保护液组（P〈0．05）;添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著降低（P〈0．05）,较未添加保护液组显著升高（P〈0．05）,GR活性则显著高于鲜精组（P〈0．05）,但显著低于未添加保护液组（P〈0．05）。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

除精浆提高冷冻精液品质的实验研究

采用离心洗涤法去除精浆后,对精液进行冷冻处理。发现:1、除精浆精子冻后的活率、Ⅰ类顶体率和精子畸形率与未除精浆组存在显著差异(P<0．05);2、除精浆使稀释后精液精浆中GOT和LDH活性明显升高(P<0．05)。从平衡后到解冻后各组GOT和LDH活性都呈上升趋势。但除精浆试验组比未除精浆试验组上升缓慢;3、除精浆试验组精子的穿卵率、卵内平均精子数都显著高于未除精浆试验组(P<0．05);4除精浆离心洗涤液用生理盐水和脱脂乳-卵柠液．两者之间无显著差异(P>0．05)。     

Acrosomal proteinase and proteinase inhibitor of human spermatozoa

The acrosomal proteinase of human spermatozoa was characterized and differs from other human proteinases. The enzyme has optimal activity at pH 8.0, is inactive below pH 5.0 or above pH 10.5, requires calcium for maximum activity, hydrolyzes fibrinogen, gelatin, and benzoylarginine ethyl ester, and is inhibited by various synthetic and natural proteinase inhibitors. The molecular weight was estimated to be 30,000. Human spermatozoa also possess a proteinase inhibitor that is similar to one of the proteinase inhibitors from human seminal plasma.     

牛精清及牛用稀释液在猪精液冷冻中的应用

为了验证牛精清及牛用精液冷冻稀释液在猪精液冷冻中的有效性,将牛精清(0、2.50%、5.00%、10.00%)加入猪精液冷冻稀释液(葡萄糖1.10%、柠檬酸1.48%、Tris 2.42%、NAC 0.02%、卵黄20.00%、甘油6.00%、青霉素0.06%、链霉素0.10%)中,或用改良猪精液冷冻稀释液(另加入0.10 mmol/L他克林)、牛精液冷冻稀释液及改良牛精液冷冻稀释液,对猪精液进行冷冻处理。结果表明,在本试验条件下,牛精清对猪精子冷冻保存没有正面作用;改良牛用稀释液用于猪的精液冷冻,效果与改良猪用稀释液相当,优于未改良牛用稀释液。     

硒源和硒水平对种公羊血清和精清抗氧化能力的影响

为研究硒源和硒水平对血清和精清抗氧化酶活性的影响,选择年龄、体重相近、健康的黎城大青羊成年种公羊42只,随机分为7组。分别喂以基础日粮、基础日粮+0.5、1.0、2.0mg·kg-1 DM的酵母硒;基础日粮+0.5、1.0、2.0mg·kg-1 DM的亚硒酸钠,饲喂期60d,试验第60d采集血液和精液样品,测定其抗氧化能力。结果显示,日粮添加硒极显著提高种公羊血清GPxs活性、血清和精清T-AOC含量,显著提高血清、精清SOD和精清GPxs活性;极显著降低血清、显著降低精清中OH-的含量,改善机体的抗氧化能力。硒水平与血清和精清中GPxs、SOD活性、T-AOC和OH-的含量有剂量——效应关系。与1.0mg·kg-1组和0.5mg·kg-1组相比,2.0mg·kg-1组血清、精清中OH-的含量升高,血清GPxs活性下降,精清SOD活性和T-AOC含量下降;日粮硒浓度相同时,其血清GPxs活性高于精清4~10倍,而精清SOD活性高于血清约20倍。成年种公羊日粮中硒的适宜添加量为0.5~1.0mg·kg-1酵母硒或0.5mg·kg-1亚硒酸钠。血清和精清中抗氧化系统存在差异。     

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX,伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示,随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后,pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平,且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中,0～180min内,pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳,180min之后的精子寿命超过80s,激活比例在90％以上,显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后,正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长,为（284．05&#177;78．37）S,其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命,其时间为（203．89&#177;43．68）s,正常雄鱼精液原浆精子寿命最短,为（122．19&#177;37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精,发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％,而通过pH10．5的ASP培养后,其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此,在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。     

血浆及精清睾酮的酶免疫分析法研究

用混合酸酐法合成睾酮-3-(羧甲基)肟-过氧化物酶和睾酮-17-(羧甲基)肟-过氧化物酶两种结合物,并用睾酮抗血清和睾酮单克隆抗体建立鉴定了睾酮的两种固相微滴板酶免疫分析法(T-EIAa,T-EIAb),其中T-EIAa符合方法学鉴定指标.用T-EIAa测定种公牛血浆及精清睾酮含量,血浆样品经二氯甲烷抽提,而精清样品用直接法测定.T-EIAa测定血浆样品的结果与放射免疫测定密切相关(r=0.83,n=12),种公牛的血浆及精清睾酮含量在个体间存在显著差异,精液品质良好组的精清睾酮含量显著地高于较差组,而血浆睾酮含量差异不显著.     

鸡蛋黄和鹌鹑蛋黄在崇明白山羊精液冷冻保存中效果比较

对崇明白山羊精液采取3种不同离心处理去除精清,比较添加鹌鹑蛋黄和鸡蛋黄对精液冷冻保存效果的影响.结果表明:崇明白山羊精液冷冻保存中以1 000 r/min离心5 min去除精清后,添加鸡蛋黄组解冻后精子活力为50.48%,鹌鹑蛋黄组解冻后精子活力为42.98%.添加鸡蛋黄组的效果显著优于鹌鹑蛋处理组.     

绵羊精子冻融前后差异蛋白质组学研究

 【目的】检测和分析绵羊精子冻融前后的差异蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离精子蛋白,凝胶用考马斯亮蓝染色,用PDQuest8.0软件检测分析差异蛋白质斑点并经液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】鲜冻精凝胶图谱分析后得到 14个差异蛋白斑点,在国际生物信息学中心数据库搜索到相对应的5种蛋白质：推定的热休克蛋白70.1、转录因子AP-2α蛋白、烯醇酶、烯醇酶1和血清白蛋白前体。在解冻精子中,推定的热休克蛋白70.1、烯醇酶和烯醇酶1含量减少,转录因子AP-2α蛋白含量增加,血清白蛋白前体来源于精浆。【结论】绵羊精子经冷冻、解冻后,蛋白质存在差异,对差异蛋白质的研究有利于探索绵羊精子在冷冻过程中的生理状态,为进一步研究绵羊精子蛋白质组学及揭示精子冻伤机理提供依据。     

人和哺乳动物精液的蛋白质组学研究进展

蛋白质组学技术是21世纪研究生命科学最有价值的技术之一,将其应用到精子和精浆蛋白质的研究后,已取得了许多成果。对蛋白质组、蛋白质组学、双向电泳、质谱、生物信息学等进行了简要介绍,并重点阐述了蛋白质组学技术在精子蛋白和精浆蛋白上的研究进展。     

乳用种公牛日粮中添加锌和碘对精液品质的影响

用9头黑白花种公牛,研究了锌和碘对公牛精液品质、精清酶活性、血清 T_4浓度及血、精清锌浓度的影响。结果表明:日粮中添加锌可显著改善公牛的精液品质,降低精清 GOT 和 LDH 活性;添加碘可明显提高血清 T_4浓度;同时添加锌和碘可使血、精清锌浓度显著提高。     

Amino acid content of rabbit acrosomal proteinase and its similarity to human trypsin

Rabbit acrosomal proteinase from epididymal spermatozoa of 44 male rabbits was purified by subcellular fractionation, sucrose density gradient centrifugation, and electrofocusing; the specific activity of the purified product was 20,047 units per milligram, a value similar to that observed for pancreatic trypsins from various sources. The molecular weight determined from the amino acid analyses and ultracentrifugation was about 22,000. This rabbit acrosomal proteinase showed great similarity to pancreatic trypsin, especially to human pancreatic trypsin, both in the number of individual amino acids and in the total number of residues. This similarity was confirmed by an antigenic cross reaction between rabbit antiserum to bovine pancreatic trypsin with human, rabbit, rhesus monkey, and bull acrosotnal proteinase.     

鸡精子冷冻前后的形态学变化

本文比较观察了用甘油和二甲基亚矾(DMSO)处理的鸡精子冷冻前后形态结构的变化,以阐明甘油的冷冻保护效果。结果表明,a.用甘油或DMSO作为冷冻保护剂,冷冻前后的畸形精子主要表现为颈部弯曲,甘油处理的精子这种颈部弯曲的畸形率明显增加(P<0.05),b.甘油处理的精子,解冻后表现为明显的头部原生质膜破裂,常伴有中段膨大和线粒体鞘裸露的现象。由此推测,甘油对鸡精子结构的不良作用可能与冷冻解冻过程中稀释液的渗透压变化有关。     

Microtubules in spermatozoa of childia (turbellaria, acoela) revealed by negative staining

Many intact axial units, with attached basal plates, are found in spermatozoa of Childia groenlandica negatively stained with phosphotungstic acid. Electron micrographs show a total of nine doublet microtubules, confirming observations on sectioned material, where nine peripheral doublets, but no single central ones, occurred. Living spermatozoa move by waves progressing along a double undulating membrane.     

添加剂在猪精液冷冻保存中的应用

猪精液的冷冻保存显著影响猪精子的运动学参数,损伤精子质膜、顶体和DNA完整性,降低解冻后精子活率和受精能力.近年来,在以甘油和蛋黄作为冷冻保护剂的基础上,为了有效降低冷冻-解冻对精子的损伤,提高解冻精液的受精能力,研究人员将OEP、抗氧化剂(甲基黄嘌呤、丁羟基甲苯、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、褪黑素和维生素E等)、2-羟丙基β环糊精以及透明质酸等物质作为添加剂应用于猪精液的冷冻保存,结果表明这些物质在保护精子质膜和顶体完整性,提高解冻后精子活力、活率和受精能力等方面均有显著作用.     

Mobility and the restriction of mobility of plasma membrane lectin-binding components

Labeling by ferritin-conjugated agglutinins from Ricinus communis was used to demonstrate the relative mobilities of the agglutinin receptors located in specific regions on plasma membranes of rabbit spermatozoa. The relative mobility of lectin receptors was higher on postacrosomal regions of sperm than on acrosomal and tail regions. Lectin-induced clustering could not be demonstrated in the acrosomal and tail regions, an indication of the existence of localized restraints on the mobilities of lectin receptors. A system of transmembrane restraints may maintain the segregation of plasma membrane components into membrane domains on certain highly differentiated cells.     

双峰驼促卵泡素放射免疫测定方法的建立

本试验以羊—羊FSH放射免疫分析方法为依据,建立了测定双峰驼外周血浆中FSH的异源性放射免疫分析方法,通过一系列实验表明,在目前尚难建立驼FSH同源性放射免疫分析方法的情况下,该方法是研究双峰驼生殖内分泌学的可靠手段之一。本研究还用此方法测定了肌肉注射精清诱导排卵前后母驼外周血浆中FSH的变化。     

胞质内精子注射法介导外源DNA生产转基因动物

通过胞质内精子注射法介导转基因已经成为生产转基因动物的一种有效手段。然而传统的ICSI介导法用冻融精子或Triton X-100处理的精子作为携带外源DNA的载体,经胚胎移植后生产转基因后代的效率很低,主要原因为这些处理方式在提高转染效率的同时对精子染色体造成了较大程度的损伤。最近研究者们提出了一种使用高浓度碱液对精子进行简单的预处理,高效地生产转基因后代的方法。这些精子完全失去了质膜与顶体,但仍保留有核的完整性,并且可以高效的将外源基因插入宿主基因组,比传统的精子处理方法获得了更理想的转基因动物的生产效率。     

光对激素调控水稻幼苗主根生长的影响

本研究利用日本晴水稻作为研究材料,分析了黑暗和光照条件下不同植物生长调节剂对植物主根生长的影响。结果表明,IAA、JA、ACC、KT和2,4-EBL均抑制水稻幼苗主根的生长,抑制效果与浓度呈正相关;黑暗和光照条件下生长的水稻幼苗对植物生长调节剂的敏感性不同,IAA、JA、KT和2,4-EBL对黑暗条件下生长的水稻幼苗主根的抑制效果更为明显,而ACC对光下生长的水稻幼苗主根的抑制效果更明显,据此推测,光影响水稻幼苗对植物激素的敏感性。     

纳米锌水平对公羊精液品质、抗氧化酶活性及附睾Cu-ZnSOD表达的影响

【目的】微量元素锌是动物正常繁殖所必需的元素,研究旨在了解日粮纳米锌对公羊精液品质、抗氧化酶和附睾Cu-ZnSOD蛋白表达的影响,分析公羊精液品质参数与精浆抗氧化酶活性的相关性。【方法】将16只9月龄健康状况良好体重相近的晋中绵羊公羊,随机分成4组,分别喂给基础日粮（对照组）,基础日粮+50 mg·kg^-1、100 mg·kg^-1和150 mg·kg^-1 DM纳米锌。试验期90 d。在试验78 d和79 d连续两天采集精液,每次采集精液取出100 µL评价精液品质参数,剩余精液离心分离精浆,测定精浆Cu-ZnSOD、GPxs活性及总抗氧化能力;试验结束时,用手术去势法采集附睾头、附睾体和附睾尾组织,采用免疫组化技术对附睾头、附睾体和附睾尾中Cu-ZnSOD进行定位,并用Image Pro Plus 7.0软件分析的平均光密度值进行Cu-ZnSOD蛋白定量。【结果】日粮纳米锌对公羊射精量影响差异不显著（P＞0.05）。与对照组相比,添加50 mg·kg^-1或100 mg·kg^-1纳米锌组公羊的精子密度、精子活力和精子质膜完整性显著增加（P＜0.05）,精子畸形率显著降低（P＜0.05）;添加150 mg·kg^-1组精子质膜的完整度显著增加（P＜0.05）,其精子活力和精子密度与对照组的差异不显著（P＞0.05）。日粮添加50 mg·kg^-1或100 mg·kg^-1纳米锌组公羊精浆Cu-ZnSOD活性、GPxs活性和总抗氧化能力显著高于对照组（P＜0.05）,精浆MDA含量显著低于对照组（P＜0.05）;添加150 mg·kg^-1组公羊精浆总抗氧化能力显著高于对照组（P＜0.05）,其精浆Cu-ZnSOD活性、GPxs活性和MDA含量与对照组差异不显著（P＞0.05）。免疫组化定位结果显示Cu-ZnSOD在附睾头和附睾体假复层上皮、结缔组织和附睾尾的单层柱状上皮中均检测到阳性信号,试验处理组公羊附睾中Cu-ZnSOD表达量由高到低顺序是：附睾体＞附睾头＞附睾尾;然而对照组的顺序为：附睾头＞附睾体＞附睾尾。50 mg·kg^-1或100 mg·kg^-1纳米锌组公羊附睾头和附睾体阳性信号的平均光密度显著高于对照组和150 mg·kg^-1纳米锌（P＜0.05）。精浆Cu-ZnSOD活性与精子密度、精子活力和精子质膜完整性呈正相关,与精子畸形率呈负相关。【结论】日粮添加50 mg·kg^-1或100 mg·kg^-1纳米锌可改善精液品质,提高精浆抗氧化能力,增加附睾中Cu-ZnSOD蛋白表达量。精浆Cu-ZnSOD活性可以作为检测精液品质优劣的指标在羊生产中应用。微量元素锌对精液品质影响调控的分子机理还需进一步深入研究。