微孢子虫PolyA位点的预测

多聚腺苷酸化是真核细胞内形成成熟mRNA的一个重要步骤,其位点的预测对基因组序列中编码基因的发掘具有重要的参考价值.本研究以缺乏有效基因预测方法的微孢子虫基因组为对象,根据该物种的基因表达偏好设计了一个算法,对其PolyA位点进行预测分析.首先,采用k阶核苷酸频率形式和位置权重矩阵形成初始的特征,然后用PCA降低特征空间的维数,得到的数据用机器学习方法进行分析,产生一个较好的分类结果.其中基于支持向量机的实验得到的敏感度(Sp)和ACC分别达到了87.33%和85.14%,这在微孢子虫的PolyA位点预测上取得了较为理想的效果,并为以后机器学习算法在微孢子虫基因预测领域做了很好的尝试.     

基因表达控制量化首次实现

基因表达是一个多步骤过程,涉及转录、翻译以及mRNA和蛋白的周转,尽管数十年来科学家们投入了大量的精力在这一研究领域,然而直到现在人们对这些事件的综合效应怎样决定基因表达却仍然知之甚少。来自德国Max Delbruck分子医学中心和柏林医学系统生物学研究所的研究人员第一次对基因表达控制进行了定量分析,研究结果表明基因表达控制主要发生在细胞质而非细胞核中。相关研究论文发表在5月19日的《自然》(Nature)杂志上。     

真核生物pre-mRNA剪接的研究进展

Pre-mRNA剪接,即把内含子去除并把外显子序列连接成为成熟的mRNA,是基因表达与调控的重要环节之一。本文在概述真核基因mRNA剪接反应机制的基础上,主要讨论pre-mRNA的剪接机器,剪接体如何催化pre-mRNA剪接反应和pre-mRNA选择性剪接等方面的研究进展。     

蛋白质翻译起始因子的作用与调控

 蛋白质翻译起始因子是一类在真核细胞中蛋白质翻译所必需的、保证正确的mRNA－核糖体复合物形成的蛋白质,已知的起始因子共有12种,在真核细胞翻译起始阶段有重要作用。蛋白质合成的调节主要通过翻译起始因子的磷酸化进行。真核细胞蛋白质翻译最重要的调节位点是翻译起始因子eIF 2和eIF 4。本文主要综述了近年来关于蛋白质翻译起始因子的作用及调控的最新研究进展     

Nesfatin-1及其mRNA在大鼠生长轴中的表达

【目的】探讨Nesfatin-1在大鼠生长轴(下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、肌肉)中的定位及其mRNA的表达情况。【方法】对雌性大鼠进行深度麻醉灌注后,采集下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、腓肠肌肌肉组织,放入4%多聚甲醛溶液中固定,采用免疫组化PV-9000二步法、DAB显色技术检测Nesfatin-1在生长轴上的分布,另取雌性大鼠断头处死,取相同组织用荧光定量PCR方法检测其中Nesfatin-1mRNA的表达情况。【结果】Nesfatin-1主要分布于下丘脑的室旁核、背内侧核、室周核、外侧区、弓状核、视上核、腺垂体、胰腺的胰岛和腺泡及肝脏与肌肉中。平均光密度分析显示,Nesfatin-1在室周核和胰岛的表达量显著地高于其他组织(P0.05),在胰腺腺泡、肝脏及肌肉中的表达量则显著地低于其他组织(P0.05),在下丘脑背内侧核、外侧区和室旁核中的表达量显著高于视上核、弓状核和腺垂体(P0.05)。Nesfatin-1mRNA在胰腺中表达量最高,腺垂体次之,下丘脑和肝脏较低,在胰腺和腺垂体的表达量显著高于下丘脑和肝脏,但下丘脑与肝脏差异不显著(P0.05);在腓肠肌中未检测出Nesfatin-1mRNA的表达。【结论】Nesfatin-1及其mRNA在生长轴中的广泛表达,表明Nesfatin-1可能对大鼠生长发育具有调控作用。     

MAR及其在转基因植物中的研究与应用

核基质结合区(Matrix attachment regions,MARs)是真核细胞染色质中能与核基质结合的DNA序列,因其可以提高外源基因的表达水平和稳定性、降低外源基因在不同株系间的表达差异而越来越受到研究者的关注。文章对MAR的特征及其在转基因植物中的研究和应用进行了阐述。     

mRNA差异显示技术在植物抗逆抗病机理研究中的应用

mRNA差异显示技术是研究基因表达差异的有效方法，近些年在研究、分离与克隆植物特异表达基因方面有重要应用。本文对该技术在植物抗逆、抗病机理研究中的应用进行了综述。     

内含子的识别和选择性剪切

真核生物内含子的一个显著特征是在很多生物中其5'和3'剪切位点的基本序列都具有相对很高的保守性,内含子从mRNA前体转录产物中的去除和伴随的外显子的连接称作mRNA前体的剪切,它是构成真核基因表达和基因调控水平的一个重要方面。这个过程由许多具有有限序列和特殊空间结构的顺式作用元件控制,由被称为剪切体的核糖核蛋白复合体来执行。以内含子的识别和由于识别造成的选择性剪切进行了综述,试图去理解造成选择性剪切的分子机理。     

真核细胞蛋白酶体的生物学功能及其调控机制研究进展

蛋白酶体广泛存在于真核细胞的胞质和胞核中,具有多种催化功能,可选择性降解胞内半衰期短和错误折叠的新生蛋白、应激损伤蛋白、突变的结构功能蛋白及细胞自身需要清除的其他特定蛋白,与基因转录、DNA损伤修复、细胞生长、凋亡和抗原递呈等重要生命活动紧密相关。真核细胞蛋白酶体作用重要,调控方式多样,因此,将就其构成、生物学功能及其调控机制进行综述。     

核基质结合区与转基因植物的基因表达

核基质结合区(matrixattachmentregions,MARs)是真核细胞染色质中能与核基质结合的一段DNA序列.当MARs位于外源基因两侧时,能够使转基因植株高效、稳定表达,说明MARs是消除植物转基因沉默的一条可行途径.本文综述了MARs的研究进展,认为MARs的研究与利用对获得高效、稳定的转基因禾谷类作物具有重要的意义.     

siRNA和miRNA的研究进展

RNAi(RNA interference)即RNA干涉,是由外源或内源性的双链RNA(double starand RNA,dsRNA)导入细胞而引起的与dsRNA同源的mRNA降解,进而抑制相应基因表达,可以抑制诸多真核基因的表达s。iRNA(small interferance RNA,siRNA)即小干扰性RNA,是RNA干扰的引发物,不同的siRNA可以引导不同水平的RNAi。非编码RNA中的微小RNA(micro RNA,miRNA),能够识别特定的目标mRNA,通过与mRNAs3’非翻译区结合,影响蛋白翻译水平。miRNA和siRNA在生成机制、作用途径等方面关系密切,既区别又相互联系,小分子RNA的研究将是今后分子生物学的研究热点之一。     

高迁移率族蛋白B1的生物学特性与应用

高迁移率族蛋白(high mobility group protein,HMG)是一类广泛分布于真核细胞中的非组蛋白核蛋白,主要作用是维持核小体结构稳定及调节基因复制、重组等.高迁移率族蛋白B1(high mobilitygroup protein box 1,HMGB1)是HMG家族成员之一,广泛存在于各型细胞的胞核和胞质中.随着     

棉花细胞质雄性不育与恢复特性的cDNA-AFLP分析

为了揭示棉花细胞质雄性不育(CMS)及其恢复的分子机理,采用cDNA-AFLP技术,分析了棉花胞质雄性不育系、保持系、恢复系和F1开花前6 d花药的基因表达谱及其差异,结果表明:不育系花药的基因表达谱与其"同核异质"的保持系之间存在着巨大的差异,提示细胞质基因对细胞核基因的表达有调控作用,雄性不育基因引起核基因组的异常表达,可能是导致雄性不育的更直接的原因。恢复基因引入到不育系获得F1,其花药的基因表达谱与恢复系基本相同,提示核内恢复基因可以反作用于细胞质不育基因对核基因表达的调控机制,恢复花粉的育性。CMS基因对核基因表达的调控作用以及恢复基因对这种作用的逆转可能是棉花细胞质雄性不育及其恢复的重要原因。另外,还鉴定了36个在恢复系和F1优势表达而在不育系和保持系中不表达或者微量表达的cD-NA扩增片段,为恢复相关基因的克隆奠定了基础。     

高粱同核异质与异核异质雄性不育系、保持系花药及雌蕊过氧化物酶同工酶的比较研究

在高粱同核异质雄性不育系（3197A、T×398A）和异核异质雄性不育系（FA）、保持系的花药及雌蕊不同发育时期,共检测出13种正、负极向过氧化物酶同工酶。两种同核异质雄性不育系的过氧化物酶谱型非常接近,因此,这种酶可能是核基因编码的。在3197A、T×398A中检测出2条专一性酶带（A#-8、A#-9）,这两条酶带可能是同核异质雄性不育系的标志酶带。所有三套雄性不育系花粉粒中的过氧化物酶同工酶均多于保持系,这可能是雄性不育细胞质基因对核基因表达的调控作用所造成。细胞质基因与细胞核基因存在着一定的相互关系,雄性不育特性可能是这两种基因共同作用的结果。     

盐穗木HcPS_H基因真核表达载体的构建及转化

[目的]盐穗木(Halostachys caspica)属藜科盐生植物,是广泛分布于新疆干旱或半干旱荒漠盐碱环境中的一种极端耐盐的多年生稀盐多汁半灌木,对盐分适应性极强.PS_H基因是一个参与光合反应光系统的基因,在植物光合作用中起着重要的作用.构建盐穗木HcPS_H基因真核表达载体对于了解该基因在盐穗木耐盐过程中的作用有着重要意义.[方法]利用PCR技术扩增得到大小为441 bp的盐穗木HcPS_H基因,经限制性内切酶SalI和NotI进行消化,将目的基因与真核表达质粒pREP-5N连接,获得重组真核表达质粒HcPS_H-5N.[结果]通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,重组真核表达质粒HcPS_H-5N构建成功.制备酵母感受态,将重组质粒电击转入酵母中,酵母菌落PCR结果显示电击转化成功.[结论]成功构建盐穗木HcPS_H基因真核表达载体,并且能在真核细胞中正常表达.     

pEGFP-N1-hTERT真核表达载体的构建与表达鉴定

[目的]构建pEGFP-N1-hTERT真核表达载体,观察其在真核细胞中的表达。[方法]利用pC1-neo-hTERT和pEGFP-N1质粒构建重组质粒,通过双酶切鉴定、DNA测序分析验证人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)片段的准确性。将pEGFP-N1-hTERT真核表达载体转染到大鼠胎儿神经干细胞(NSCs)中,通过绿色荧光蛋白间接观察人端粒酶逆转录酶蛋白在细胞中的表达定位,通过RT-PCR、WesternBlot验证所构建的真核表达质粒pEGFP-N1-hTERT的正确性。[结果]所构建的pEGFP-N1-hTERT真核表达载体结构正确并能够在真核细胞中表达。[结论]该研究为建立大鼠永生化NSCs系奠定了基础。     

阿勒泰羊羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织的表达研究

[目的]研究MSTN/Smad信号通路基因在阿勒泰羊2日龄羔羊不同组织中的表达程度的差异.掌握阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因表达规律.[方法]采用荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达量.[结果]背最长肌MSTN mRNA表量显著高于股三头肌、股二头肌、半腱肌和半膜肌(P＜0.05),各组织Smad2 mRNA表达量无显著差异(P＞0.05).Smad3 mRNA在股二头肌、半腱肌、背最长肌和脾中的表达量显著高于肺中的表达量(P＜0.05).Smad4 mRNA在心脏中的表达显著高于肺脏中的表达量(P＜0.05).TGFBR1 mRNA在心脏中的相对表达量为最高.TGFBR2 mRNA在心脏、脾脏、肾脏、肝脏中的表达量显著高于股二头肌肉中的表达量(P＜0.05).[结论]对阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达进行了初步的研究,这对今后阿勒泰羊MSTN基因表达规律及调控的研究具有重要意义.     

组蛋白乙酰化/去乙酰化与基因表达调控研究进展

在真核生物中,组蛋白是构成核小体的重要成分,其乙酰化与去乙酰化修饰在真核生物基因表达调控中起重要作用。组蛋白乙酰化异常(低乙酰化或高乙酰化)常会引起基因表达紊乱,进而引起疾病的发生。对组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltransferase,HAT)及组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)的种类,组蛋白乙酰化与去乙酰化与基因表达调控、疾病发生的关系进行了综述。     

Rrp44和SMG6在mRNA降解中的研究进展

介绍了有关Rrp44和SMG6核酸内切酶活性在mRNA中的最新研究进展，包括Rrp44与SMG6的内切酶活性在mRNA降解中的作用，以及它们的PIN结构域与核酸内切酶活性。     

小鼠IL-5真核表达质粒的构建及表达

[目的]克隆小鼠白细胞介素-5（mIL-5）cDNA构建真核表达质粒,并转染293细胞检测其是否表达。[方法]以小鼠脾脏细胞总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增小鼠IL-5基因cDNA,酶切后插入pRc-CMV/Fc真核表达质粒中,构建重组真核表达质粒mIL-5/Fc-pRc-CMV,转染293细胞,RT-PCR与ELISA法检测目的基因表达。[结果]Fc-pRc-CMV中插入DNA序列与mIL-5 cDNA一致,重组质粒转染293细胞后,ELISA可检测出质粒能在293真核细胞中有效表达小鼠IL-5目的蛋白。[结论]该研究成功克隆了小鼠IL-5基因cDNA,并构建其真核表达质粒。