耐辐射球菌离子注入抗性的初步研究

[目的]为深入分析耐辐射球菌的抗性机制奠定基础。[方法]以大肠杆菌为对照,研究经γ射线辐射和N+注入后耐辐射球菌的剂量-存活率曲线和剂量-生物量曲线,并分析总蛋白的变化情况。[结果]注入N+后,耐辐射球菌的存活率和生物量均呈降-升-降的马鞍型曲线。耐辐射球菌在各个辐射剂量下的存活率高于大肠杆菌,其生物量总体上也多于大肠杆菌,说明耐辐射球菌具有较高抗性。在低剂量N+注入后,总蛋白的含量变化不明显,在高剂量时蛋白含量增加明显。[结论]耐辐射球菌在高剂量下具有一定的修复能力。     

耐辐射球菌锰离子转运蛋白基因DR1709的完全删除分析

[目的]研究耐辐射球菌锰离子转运蛋白基因DR1709完全删除所造成的影响。[方法]试验构建DR1709完全删除突变体PM1709,并对其进行紫外线处理。[结果]在紫外线照射剂量为0和100 J/m2时,耐辐射球菌野生型、M1709和PM1709的存活率基本没有差别;从200 J/m2开始,突变体的存活率显著低于野生型;在含有200 nmol/L Mn的DMM中,M1709和PM1709几乎不能生长。在DMM平板上31℃下培养13 d后,仍然见不到M1709有任何生长的迹象。[结论]DR1709被删除以后,耐辐射球菌对紫外线的抗性显著降低,DR1709在耐辐射球菌抗辐射的过程中发挥了重要作用,DR1709部分删除突变体和完全删除突变体对紫外线的抗性几乎没有差别,说明M1709虽然只是部分删除了DR1709的基因序列,但DR1709的功能在M1709中已完全丧失;M1709对低剂量的锰离子十分敏感,但M1709在TGY中能够生长,说明在营养液中含有丰富的锰离子时,有其他基因代替DR1709行使吸收锰离子的功能,但当外界锰离子含量低时,DR1709则是唯一行使该功能的基因。     

耐辐射异球菌pprM基因克隆及功能预测

[目的]通过耐辐射异球菌(Deinococcus radiodurans)pprM基因可能功能的研究,为进一步开发利用耐辐射微生物宝贵基因资源奠定基础.[方法]通过PCR方法克隆pprM基因,利用穿梭表达载体pRADZ3将其转入大肠杆菌内,通过冲击试验分析其功能.[结果]pprM基因转入大肠杆菌,发现该基因能提高大肠杆菌的抗盐、耐旱能力.[结论]pprM基因是一个非常重要的抗逆基因,在农业育种方面有极好的应用前景.     

去除U(Ⅵ)的微生物组合构建及培养条件的优化

[目的]为了筛选U(Ⅵ)的抗性微生物及建立高效去除U(Ⅵ)的微生物组合.[方法]通过单菌株与混合菌株对U(Ⅵ)的抗性比较,采用正交试验对微生物组合的培养条件进行优化.[结果]除考式玫瑰菌外,)XJ1、耐辐射奇球菌、柠檬酸杆菌3种微生物均能耐受50mg/L U(Ⅵ),其中耐辐射奇球菌和柠檬酸杆菌对30 mg/L U(Ⅵ)的去除率分别达到80.4％和84.8％;与单菌株对U(Ⅵ)的抗性相比,柠檬酸杆菌梁耐辐射奇球菌组合对U(Ⅵ)的抗性有明显的促进作用.最佳条件为pH 6.0、温度30℃、U(Ⅵ)初始浓度10 mg/L,该组合对U(Ⅵ)的去除率可达到98.3％.[结论]筛选的微生物组合及其培养条件的优化可为微生物修复核素提供理论依据.     

红色新月蕨与乌毛蕨多糖的抗菌活性

[目的]从红色新月蕨和乌毛蕨中提取多糖物质,并检测多糖含量及其对5种菌类的抑菌活性。[方法]采用水提醇沉法对红色新月蕨和乌毛蕨多糖进行提取,并采用苯酚-硫酸比色法和圆形纸片法测定多糖含量以及测量不同浓度不同菌种的抑菌圈直径。[结果]红色新月蕨的多糖比乌毛蕨的多糖在含量上多0.3%,红色新月蕨和乌毛蕨的多糖对藤黄八叠球菌的抑菌圈直径分别可达33.0和21.3 mm,红色新月蕨多糖对酵母菌的抑菌圈直径为15.0 mm,乌毛蕨多糖对青霉菌的抑菌圈直径为22.0 mm,红色新月蕨和乌毛蕨多糖的最小抑菌浓度均集中在5~15 mg/m L。[结论]红色新月蕨和乌毛蕨多糖可作为功能性多糖加以开发。     

饲料玉米中优质乳酸菌的分离和鉴定

[目的]从饲料玉米中筛选适合做青贮饲料添加剂的高效乳酸菌。[方法]用MRS＋CaCO3固体培养基筛选乳酸菌,经形态学和生理生化试验进行初步鉴定,测定其产酸效率;挑选出12株产酸率强的乳酸菌进行耐盐和耐酸能力的测定,并对其进行16 S rDNA鉴定。[结果]从饲料玉米中共分离得到44株乳酸菌,12株产酸能力强的菌株经生理生化试验鉴定分别属于明串珠菌属、乳杆菌属和肠球菌属,且12株菌株都具有良好的耐盐、耐酸能力。经16 S rDNA鉴定：A4、B9、B11、B12和B14为植物乳杆菌;A1、A2、A7、A11和B8为肠膜明串珠菌葡聚糖亚种;A8和A9为兼性肠球菌。[结论]从饲料玉米中筛选出具有较强产酸能力的乳酸菌,作为青贮饲料添加剂。     

肉苁蓉多糖提取工艺及抑菌作用研究

[目的]提取肉苁蓉多糖并测定其抑菌作用。[方法]采用热水浸提法提取肉苁蓉多糖,在单因素试验的基础上,通过3因素3水平正交试验优化肉苁蓉多糖提取工艺。[结果]各因素对多糖得率的影响依次为浸提温度〉水料比〉浸提时间。最佳提取工艺为以1：15的料水比在85℃下浸提2h,利用该工艺提取肉苁蓉多糖的平均得率为6．7857mg／g。肉苁蓉多糖溶液对四叠球菌的抑制作用最强,其抑菌圈直径为11．20mm,其次为枯草芽孢杆菌,其抑菌圈直径为10．24mm。肉苁蓉多糖溶液对啤酒酵母的抑制作用较强,其抑菌圈直径为8．16mm,对黑曲霉和米曲霉的抑菌作用不明显。肉苁蓉多糖溶液对大肠杆菌、四叠球菌、枯草杆菌、啤酒酵母和橘青霉的最小抑菌浓度分别为0．437、0．109、0．218、0．437和0．874mg／ml。[结论J该研究为肉苁蓉在更多领域中的合理开发和利用奠定了基础。     

不同动物来源肠球菌的分离·鉴定及耐药性研究

[目的]为动物肠球菌感染机制的研究提供理论依据。[方法]采用常规细菌分离方法从不同动物的肛拭样品中分离肠球菌,利用基于肠球菌保守tuf基因的PCR方法对其进行鉴定,同时采用KB纸片法对分离到的肠球菌进行药敏试验。[结果]共分离到177株细菌,经鉴定确定为肠球菌。药敏试验结果表明,鸡源肠球菌对青霉素的耐药率为80%,牛源肠球菌为46.4%;猪源肠球菌对环丙沙星的耐药率为27.3%,羊源肠球菌为2.8%;鸡源肠球菌对高浓度链霉素的耐药率为62.9%,而羊源未出现耐药菌株。[结论]来源于不同动物的正常菌群肠球菌对某些抗生素表现出不同程度的耐药性。     

红茶菌发酵液抑菌活性研究

[目的]研究红茶菌发酵液是否具有抑菌活性的蛋白质。[方法]研究不同培养时间对发酵液菌体浓度、pH、总蛋白浓度和抑菌圈大小的影响;调节第6天的红茶菌发酵液至不同的pH,利用蛋白酶、热处理作用红茶菌发酵液,并用青霉素、糖茶水、胰蛋白酶和蛋白酶K作参比,分别抑制供试菌,测量抑菌圈大小。[结果]发酵液总蛋白浓度与抑菌效果呈正相关;抑菌圈大小随着pH升高而逐渐降低,pH为7时最小,而后随着pH升高又逐渐增大;蛋白酶处理过的第6天发酵液抑菌效果明显降低。[结论]红茶菌发酵液中具有抑菌蛋白。     

小麦淀粉糖发酵过程谷氨酸菌理化性质研究(英文)

[目的]为了考察小麦淀粉糖发酵过程中谷氨酸菌种的理化特性。[方法]以不同发酵时间内代谢谷氨酸的纯度以及菌体的光密度和细胞活性能为检测指标、并对定性和定量指标进行分析回归比较。[结果]华勃氏微量呼吸仪与双功能分析仪在试验范围内,检测误差为d=3.3166%,其线性关系为s1=(1-d)s2,在小麦淀粉糖发酵过程中,细胞活性能平均值6.24μA,最高值为6.61μA。[结论]细胞活性能比菌体光密度更真实反应菌体在小麦淀粉糖发酵过程的理化性质,细胞膜磷脂与细胞活性能有相关性。     

齿瓣石斛提取物体外抗菌作用初步研究

[目的]研究齿瓣石斛的无水甲醇和水提取物的抗菌活性。[方法]采用试管稀释法测定齿瓣石斛无水甲醇和水提取物对11种临床常见的病原菌的MIC及MBC,初步判定其抑菌效果。[结果]无水甲醇和水提取物在体外对7种细菌有不同程度的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌的抑制作用最强,对痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌无明显作用;无水甲醇提取物的抗菌作用强于水提取物。[结论]齿瓣石斛无水甲醇和水提取物对所测试菌种具有良好的体外抗菌作用。     

链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性研究

[目的]为枯草杆菌诱导后的家蝇幼虫提取物在饲料中的应用提供依据。[方法]采用抑菌圈测量法测定链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性,分析其对温度、酸碱和离子强度稳定性的影响。[结果]链球菌诱导的家蝇幼虫提取物对细菌的抑菌圈直径为6.55~11.01 mm。诱导组中家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其对革兰氏阳性菌的抑制作用较强。而未诱导组提取物对细菌的抑菌圈直径为6.01~8.01 mm,诱导组的抗菌活性高于未诱导组。抗菌肽样品具有较好的温度稳定性。当pH值为4~10时,抗菌肽样品的抗菌活性均较高,以pH值为8时最高。抗菌肽样品的抗菌活性随离子强度的升高而下降。[结论]抗菌肽的抑菌活性受环境离子强度的影响,与其作用机理有关。     

苦参对鸡大肠杆菌的抑菌作用及其机理研究

【目的】阐明苦参的抑菌作用及机理，为生产实践提供理论依据。【方法】采用牛津杯法及液体倍比稀释法对鸡大肠杆菌等常见致病细菌进行了敏感性试验；通过电镜观察，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白表达的研究，生长曲线的绘制以及流式细胞仪对菌体细胞周期的分析，对苦参碱粗提物的抑菌作用及机理进行研究。【结果】苦参对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有明显抑制作用，抑菌谱广；药物是通过抑制鸡大肠杆菌功能蛋白的表达，从而影响菌体的细胞周期，使I期菌数增加，R期菌数下降，最终菌体不能达到正常对数生长期而直接进入衰亡期；菌体形态结构发生明显变化，表现为菌体缢缩变形，中间凹陷呈规则元宝状，细胞质固缩，质壁分离，最终细胞壁破损，内容物泄漏而使菌体死亡。【结论】苦参碱对鸡大肠杆菌抑菌机理是抑制调控细菌生长、分裂相关蛋白的合成，阻滞其分裂和生长，并且与细胞内的蛋白质结合，细胞质固缩、解体而死亡。     

苦丁茶不同提取物的体外抑菌作用研究（摘要）

[目的]研究苦丁茶不同粗提物的抑菌效果。[方法]制备了3种苦丁苯粗提物。粗提物1：称取苦丁茶50 g,加500 ml去离子水浸泡10 h,加热至沸腾,文火2h,过滤。药渣再加3～5倍去离子水煎煮,方法同上,重复3次。合并3次提取液,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml,即每1 ml相当于含生药1.0 g,粗提物2：称取50 g干粉（用中药粉碎机粉碎后过80目）,加500 ml去离子水,水浴80℃恒温振荡3 h,离心,取上清液,浓缩,加3倍体积无水乙醇,离心取沉淀,用去离子水配成50 ml溶液。粗提物3：称取50 g干粉,加500 ml 90%乙醇,采用回流提取法,同流时间3 h,回流次数3次,合并3次提取液,过滤,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml。粗提物1、粗提物2、粗提物3分装于棕色试剂瓶,封口,于-20℃冰箱中保存,使用前121℃高压灭菌20 min采用试管二倍稀释法和纸片扩散法,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌进行体外抑菌试验,并测定其最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）和抑菌环直径。[结果]粗提物1抑菌效果较强,高于粗提物2和粗提物3,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的MIC分别为3.91 mg/ml和31.25 mg/ml。粗提物1对金黄色葡萄球菌的抑菌作用效果最好,抑菌能力最强,抑菌作用为高敏,抑菌环直径达（17.46±0.40）mm,对大肠埃希菌的抑菌作用为中敏,但比粗提物2、粗提物3好;粗提物2对这2种菌的抑菌能力都较差,均为低敏,特别是对大肠埃希菌,抑菌环直径只有（6.30±0.16）mm。粗提物3对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌作用相差不大,都为中敏。粗提物1不但抑菌效果好,且其提取方法、步骤简单,仪器设备价格低,同时不产生废气,可为临床应用上提供支持并带来方便。粗提物3需使用有机溶剂,大量使用容易产生三废,给环境带来一定的危害。考虑到抑菌能力及成本、环保和简便等因素,采用提取粗提物1的方法在生产上比较实用。[结论]苦丁茶的不同粗提物均有不同程度的抑菌作用,为苦丁茶开发成新型、安全的抑菌剂提供了参考。     

泡菜中乳酸菌的分离及其发酵液抑菌活性研究

[目的]从泡菜中分离筛选优势乳酸菌并对其产抑菌物质进行研究,为生产纯菌乳酸菌发酵剂、改进传统乳酸发酵食品生产提供参考。[方法]利用乳酸菌分离培养基从泡菜中分离产酸菌,并通过产酸试验、形态学及生化特性判断是否为乳酸菌属;取发酵上清液进行抑菌活性研究。[结果]从泡菜中分离获得11株产酸菌,产酸试验表明J-4、J-5、J-9、J-11为优势产酸菌;通过形态学及生化特性,初步鉴定4株产酸菌均为乳酸杆菌属;发酵上清液抑菌试验表明,4株菌均具有较强的抑菌活性,其中,J-4还具有广谱抑菌活性。[结论]研究对于纯种发酵及乳酸菌抑菌素的开发应用具有一定的启发和借鉴价值。     

龙柏组织培养研究

[目的]为龙柏的快速繁殖提供参考。[方法]用圆柏（对照材料）、龙柏的当年生幼嫩茎段为外植体,以MS为基本培养基附加不同浓度的激素对其进行诱导分化和增殖研究,筛选诱导芽分化、增殖的最佳激素组合。[结果]接种前,将圆柏和龙柏的外植体用浓度75%乙醇浸泡30 m in,无菌水冲洗几次,用浓度0.2%HgC l2消毒5 m in,无菌水洗5次,然后置于培养皿上沥干,消毒效果最好。在1/2MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0.5 mg/L的培养基上,圆柏试管苗分化率最高,生长良好;在1/2MS＋6-BA 1.5 mg/L＋NAA 0.5 mg/L的培养基上,龙柏试管苗分化率最高,生长良好。在MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.01 mg/L的培养基上,龙柏增殖效果最好。[结论]建立了龙柏组织培养体系。     

菌种的细菌抑菌剂研究

[目的]为了研究采用抑菌剂以抑制菌种中的细菌污染。[方法]在PDA斜面培养基上,用抗生素和化学抑菌剂对食用菌与细菌的混合菌液进行抑菌试验。[结果]在药剂筛选中,双氧水各浓度无细菌萌发;青霉素钠、乙醇可抑制细菌萌发。在浓度筛选中,双氧水4%(实际2%)、5%(实际2.5%)浓度可完全抑制细菌,5%(实际2.5%)浓度则同时抑制真菌。在适宜菌种试验中,不同的真菌菌种对双氧水的耐受力不同,平菇耐受力较强,蛹虫草的耐受力也较强,而猴头的耐受力较弱。[结论]多数抗生素和化学抑菌剂对细菌的抑制能力很弱,而对真菌抑制能力很强,只有双氧水在浓度适宜时能有效抑制细菌而不影响真菌生长;双氧水的有效浓度与菌液浓度有关,菌液浓度越大,双氧水的有效浓度也越大;不同种类食用菌对双氧水的耐受力有差异,平菇耐受力较高,蛹虫草次之,猴头的耐受力较低;使用双氧水抑制细菌污染的食用菌菌种,扩接后菌丝生长情况与对照基本无差异。     

不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽提取物对26种病原菌的抑菌活性

[目的]探索经不同菌源诱导黄粉虫产生的免疫物质——抗菌肽对病原菌是否存在活性差异。[方法]通过饲细菌、针刺饲真菌法诱导饥饿处理过的黄粉虫幼虫产生免疫反应,研磨、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对26种病原菌抑菌活性,利用三等分法划分4种类型评价抑菌活性及抑菌谱。[结果]经不同菌源诱导黄粉虫所产生的抗菌肽抑菌活性及抑菌谱上均存在明显差异。[结论]生防菌源在诱导昆虫体液免疫物质——抗菌肽表达上具有明显优势。