早孕因子多克隆抗体的制备及应用

通过含有家兔早孕因子的重组质粒EPF-pET-32a(+)转化表达宿主菌Escherichia coli Rosetta,IPTG诱导,融合表达硫氧还原蛋白-兔早孕因子Trx-EPF.亲和层析纯化Trx-EPF,并在柱上进行肠激酶酶切,得到EPF蛋白并进行复性.EPF免疫波尔山羊,制备羊抗兔家兔早孕因子抗血清,硫酸铵沉淀纯化多克隆抗体,用于家兔早孕检测.Western-blot结果表明,羊抗兔家兔早孕因子多克隆抗体对家兔早孕的检出率达到100％.     

肉牛早孕因子（EPF）的活性检测及分离纯化

【目的】检测怀孕肉牛早孕因子(Early pregnancy factor,EPF)的活性,并对其进行分离纯化,以期为EPF快速检测方法的建立提供依据。【方法】采集妊娠1~9个月的肉牛血样,并进行妊娠诊断,通过玫瑰花环抑制试验(Rosette inhibition test,RIT)检测其早孕因子的活性。对有活性的血样依次进行DEAE-52离子交换层析、ConASepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析,分离纯化EPF,对纯化产物进行SDS-PAGE检测,并测定其等电点。【结果】怀孕牛和未怀孕牛血清的玫瑰花环抑制滴度差异显著(P<0.05)。玫瑰花环抑制试验显示,纯化出的EPF具有活性,其分子质量为53.6 ku,等电点为6.8。【结论】利用玫瑰花环抑制试验检测早孕因子活性,可以鉴定肉牛的妊娠状态;利用层析的方法可以分离出早孕因子的活性蛋白。     

家兔早孕因子原核表达及重组蛋白的纯化、复性与鉴定

通过已构建的含家兔早孕蛋白因子(EPF)基因的重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosseta( DE3),在IPTG诱导下表达硫氧还原蛋白-家兔早孕因子融合蛋白( Trx - EPF).结果显示蛋白表达量占菌体总蛋白的30％左右.重组家兔早孕因子融合蛋白(Trx-EPF)经过Ni2+柱纯化、柱上复性,浓缩以后溶液中蛋白浓度达到10 mg/mL,复性率达到13.1％.SDS - PAGE及Western Blot分析表明,在分子量30 ku左右处有一特异性蛋白条带.     

绵羊早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

为制备绵羊早孕因子(EPF)单克隆抗体,以纯化的EPF重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA方法筛选单克隆抗体细胞株,将筛选的细胞株注入小鼠腹腔得到腹水型抗体,用G-sepharose柱亲合层析法对小鼠腹水型抗体进行纯化,应用SDS-PAGE和Western blot分析抗体纯化后的纯度及特异性。结果显示,细胞融合后得到了1株抗绵羊EPF单克隆抗体的细胞株B4D5,纯化后的腹水型单克隆抗体纯度较高,具有较强的特异性,应用单克隆抗体检测绵羊妊娠准确率为81.3%。表明,制备的绵羊早孕因子单克隆抗体为特异性抗绵羊EPF抗体。     

EPF单抗联合顺铂对家畜膀胱肿瘤抑瘤效果的影响 ——基于膀胱肿瘤裸鼠移植瘤模型

为观察早孕因子单克隆抗体(EPF-McAb)联合顺铂(DDP)对膀胱癌细胞EJ裸鼠移植瘤的抑制作用,常规将EJ细胞接种于裸鼠右侧背部皮下,待肿瘤长至直径约5 mm时随机分为4组,每组5只,即空白对照组、顺铂组、低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组。定期测量裸鼠肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。给药2周后处死裸鼠,剥取肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率。通过苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察细胞病理学改变;免疫印迹法检测早孕因子(EPF)的表达情况。结果表明,顺铂组、低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组裸鼠移植瘤生长速度均慢于空白对照组。与顺铂组比较,低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组裸鼠末次给药的移植瘤体积分别为(131.05±8.26)和(97.92±7.35)mm~3。低剂量单抗联合组抑瘤率(35.78%)和高剂量单抗联合组抑瘤率(53.04%)均高于顺铂组抑瘤率(22.36%),差异均达显著水平(P0.05)。与空白对照组比较,单抗联合组裸鼠EPF蛋白的表达量下降(P0.05)。表明EPF-McAb联合顺铂可抑制膀胱癌细胞EJ在裸鼠体内增殖,其机制可能通过抑制EPF的表达发挥作用。     

山羊早孕因子的测定及其特性的研究

怀孕小鼠血清花环抑制滴度显著地高于未孕鼠(p<0.01),说明怀孕血清中存在早孕因子.山羊血清经DEAE—纤维素柱层析、0.05molPBS液(pH7.0)洗脱,收集最初5ml洗脱液并用蔗糖进行浓缩,然后采用改良的小鼠脾细胞花环抑制实验对其花环抑制能力进行测定,结果发现怀孕山羊血清的花环抑制滴度显著地高于未孕山革、发情山革和公革(p<0.001),说明在怀孕山羊血清中也存在早孕因子.进一步研究发现在配种后24h时,山羊血清中即可测出早孕因子活性.而且,怀孕山羊血清早孕因子活性在配种后21天内维持在较高水平,结果提示血清早孕因子可做为山羊早孕诊断的指标.     

应用猪Ea花环抑制试验测定山羊和牛EPF活性

应用猪淋巴细胞Ea花环抑制试验,建立了山羊和牛EPF测定的方法,并用该法检测了山羊和牛妊娠早期血清中EPF的活性.试验结果表明,猪淋巴细胞Ea花环抑制试验可应用于二者EPF活性的测定;妊娠早期(1～21 d)山羊血清中存在EPF活性,其RIT值平均为16.9±1.8,第1天和第8天出现活性峰值(RIT值分别为18.8±1.1,21.2±1.8),其余时期EPF活性相对稳定,呈现一定的规律性变化;奶牛在妊娠第15天可检测到高活性的EPF(10.86±l.07),与空怀奶牛(4.07±0.89)相比,差异极显著(P<0.01).     

猪链球菌2型MRP与EPF基因串联表达蛋白及其免疫保护作用

 根据猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2,SS2）溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein,MRP)和胞外蛋白因子（extracellular protein factor，EPF）的基因序列，各设计合成一对引物，以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板，扩增mrp基因1 801~2 513位序列和epf 基因1 783~2 563位序列，分别构建原核表达载体pET32a-mrp 、pET32a-epf，确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后，提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化，通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中，重组质粒转化入大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白。用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印,结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位。用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔,以最小致死量猪链球菌强毒株SS2-1攻击,兔的存活率达50%(2/4),存活率明显高于单个表达产物。证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原。     

高海拔地区奶牛妊娠硫酸铜试验法早期诊断

应用3%分析纯硫酸铜对高海拔地区奶牛进行早期妊娠诊断试验,结果表明:硫酸铜试验法诊断早期妊娠操作简便、检查迅速,一般配种15d后就可进行;饲养管理条件、海拔及品种对此法影响不大,影响因素主要在于早孕因子的表现和持续时间的长短。     

VHDL和FPGA在高速A／D采样控制器设计中的应用

介绍了VHDL和FPGA,基于VHDL语言,用FPGA器件EPF10K20TC144—4芯片控制高速A／D转换芯片TLC5510的采样时序,在QuartusⅡ平台下进行软件编程,并下载到硬件,从而实现了采样控制器实例设计。     

狐狸早期妊娠诊断初步研究

利用玫瑰花抑制实验,检测蓝狐妊娠前后免疫机能变化。以确定蓝狐孕血清中是否也存在早孕因子现象。为进一步研究狐狸的早孕检测方法提供基础资料。通过检测雌狐配种前后花抑滴度（ＲＩＴｓ）值。结果表明：怀孕动物与发情期、非妊娠动物的ＲＩＴｓ是有区别的。在实验中所检测发情期雌狐与未孕雌狐血清ＲＩＴｓ值均小于或等于１２,而妊娠雌狐血清ＲＩＴｓ值一般都在１８以上。据此,可以进行雌狐早期妊娠诊断。     

奶牛早期妊娠诊断技术简述

繁殖技术一直是奶牛养殖业的重中之重,奶牛早孕诊断一直是奶牛养殖业亟待解决的问题,本文简述了奶牛早孕诊断的常用技术手段,以期为今后奶牛的早孕诊断研究提供参考,为养牛业的繁殖效率提高做出指导建议。     

外源BR与IAA对欧美杨耐旱性的影响

为了探究外源油菜素类固醇(brassinosteroid,BR)和IAA对杨树耐旱性的影响,本文选取3种欧美杨无性系NE19、R270、107的1年生盆栽苗木,分别喷洒10 μmol/L BR和100 mg/L IAA,并同时控制土壤含水量为20%,对其进行为期15 d的干旱处理和非干旱处理,对它们的生长和生理变化进行检测。结果表明:与无激素组相比,BR与IAA均可显著提高干旱条件下3种欧美杨无性系的净光合速率(P_n)、光化学量子产量(F_v/F_m)、叶绿素含量、叶片保水能力。BR处理NE19、R270、107的P_n比非干旱组分别提高19%、60%、85%,IAA处理分别高了35%、50%、80%;对F_v/F_m,BR处理的NE19、R270、107比对照组提高了7.7%、7.5%、10.9%,而IAA组提高了7.4%、8%、11.9%。以上结果说明外源施加BR与IAA提高了欧美杨无性系的耐旱性。统计经过激素处理后的欧美杨无性系气孔指数发现,BR处理NE19、R270、107的气孔指数分别下降12.28%、25.60%、20.31%,IAA处理分别下降13.00%、13.15%、14.48%,因此我们推测施加BR和IAA,会抑制植物气孔发育以降低干旱条件下的水分消耗;通过荧光定量PCR,检测与气孔发育6个相关基因EPF1、EPF2、EPFL9、ERECTA、FAMA、SDD1的表达量特征,发现BR和IAA处理导致负调节气孔发育相关基因EPF1、EPF2、ERECTA、SDD1表达量升高,正调节气孔发育基因FAMA与EPFL9表达量下降。综上所述,植物激素BR与IAA参与欧美杨气孔发育过程,在干旱条件下通过抑制气孔发育提高欧美杨抗旱性。      

RoboCup小型组足球机器人视觉系统的设计

在分析传统视觉系统的基础上,设计了一种新的图像采样处理系统。本系统包括CCD摄像头、SAA7111A、EPF10K10LC84-3、AL422B及TMS320VC5402。实践证明,本系统可明显提高足球机器人视觉系统的速度。     

血液早孕检测方法在肉牛繁育场生产中的应用

[目的]在肉牛繁育场中推广与应用血液早孕检测方法,提高繁殖效率.[方法]对胚胎移植受体母牛进行血液早孕检测,分析检测准确率.[结果]对早孕检测空怀牛在60d进行直肠复检,结果发现空怀检测准确率达到100％.对血液检测怀孕牛在60d进行直肠复检,结果发现复检怀孕的平均检出准确率为81.81％.[结论]在肉牛繁育场中应用血液早孕检测方法能够尽早筛选出空怀牛只,缩短产犊间隔,节省受体牛饲养管理成本.     

牛膝总皂甙对早孕小白鼠的繁殖毒性

【目的】研究牛膝总皂甙(TSA)对早孕小白鼠的繁殖毒性与适口性,为进一步开发利用牛膝植物资源、研制开发新型植物源性灭鼠药品奠定基础。【方法】采用1 000,500和250 mg/kg剂量的TSA,对早孕期小鼠连续灌胃处理5 d,然后检查小鼠的妊娠与胚胎发育情况;向饲料中按质量分数0.5%,1%和2%添加TSA,采用饲料混毒法测定TSA对小白鼠的适口性。【结果】在试验期间,早孕小鼠体增重随TSA剂量增加有降低的趋势,甚至出现负增长,但其对试鼠的采食量没有明显影响;TSA中、高剂量组(500和1 000 mg/kg)能够引起小鼠子宫重量降低及肝、肾和脾脏的损伤;随着灌胃剂量的增加,TSA呈现明显的抗早孕作用,最高剂量组抗小鼠早孕活性最好,雌鼠终止妊娠率和死胎率分别为91.75%和89.39%;适口性试验表明,饵料中TSA的质量分数为1%和0.5%时,试鼠的摄食系数分别为0.35和0.47。【结论】TSA对试鼠有较好的抗早孕活性及较好的适口性,可作为一种新的植物源鼠类不育剂加以研究利用。     

干旱对欧美杨气孔发育的影响

为了探究干旱对木本植物气孔发育的影响,本文挑选了5个欧美杨无性系NE-19、R270、107、109和111,进行了14d的自然干旱处理及7d的复水处理。结果发现:NE-19、R270与107的光合速率在复水后第5天恢复至处理前水平,气孔导度在第3天恢复至处理前水平,而109与111在复水处理期间光合与气孔导度恢复缓慢。测量各无性系复水后的生长速率,与对照组相比由快到慢依次为NE-19(64.96%)、R270(55.73%)、107(49.87%)、109(35.08%)、111(23.62%)。综合光合、气孔导度与生长的数据,5个无性系耐旱性由强至弱的排序为NE-19、R270、107、109、111。统计5个无性系在处理期间幼叶气孔指数的变化,发现各无性系在干旱期间气孔发育速度均下降。其中NE-19与R270下降最多,分别为30.75%和29.24%,说明耐旱性好的无性系,更善于调节幼叶中的气孔发育来适应外界的水分变化。通过荧光定量PCR检测与气孔发育相关基因ERECTA、EPF1、EPFL9、FAMA、SDD1在处理期间处理组与对照组的表达量差异,发现在干旱期间对气孔发育正调控的EPFL9与FAMA表达量下降,而负调控气孔发育的ERECTA与EPF1表达量上调,在NE-19与R270中的变化幅度尤为明显,而SDD1在整个处理期间表达量没有十分明显的变化。研究发现欧美杨在干旱中可通过调节气孔发育相关基因ERECTA、EPF1、EPFL9和FAMA的表达来抑制幼叶气孔发育,从而减少叶片水分散失以抵御干旱胁迫。      

表皮生长因子受体在妊娠滋养细胞疾病的表达及其意义

目的：研究表皮生长因子受体(EGFR)在妊娠滋养细胞疾病的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法，检测石蜡包埋的l05例妊娠滋养细胞疾病和20例正常早孕绒毛组织EGFR蛋白表达水平。结果：EGFR蛋白在妊娠滋养细胞疾病和正常早孕绒毛中均有不同程度的表达，在合体滋养层中，妊娠滋养细胞疾病和正常早孕绒毛组织均强烈表达EGFR蛋白，它们之间的表达差异无显著性。在细胞滋养层，正常早孕绒毛EGFR蛋白表达显著高于葡萄胎(P＜0．01)，葡萄胎EGFR蛋白表达显著高于侵蚀性葡萄胎和绒癌(P＜0．01)，EGFR蛋白表达在侵蚀性葡萄胎和绒癌之间差异无显著性(P＞0．05)。EGFR蛋白表达水平与滋养细胞肿瘤临床指标无关。结论：EGFR表达降低反映了在妊娠滋养细胞疾病发生发展过程中EGFR起重要作用。     

奶牛早期妊娠诊断技术简述

随着人民生活水平的提高,我国畜牧养殖业飞速发展,人们对牛奶的需求量大增,奶牛养殖业得到蓬勃发展。在奶牛养殖中,繁殖技术是奶牛养殖业的重中之重,奶牛早孕诊断一直是奶牛养殖业亟待解决的问题,本文简述常规奶牛早孕诊断技术手段,以期为奶牛产业繁殖效率提高提供参考。     

早孕绒毛细胞的核型分析及其对胎儿产前诊断的价值

本文对162例早孕绒毛直接制备染色体的结果作一分析。取孕6～9周人流者术后刮出之绒毛100例,孕 6～9周人流者术前以盲吸法取绒毛及术后刮出之绒毛50例,有产前诊断的早孕妇女以盲吸法取材12例.结