烟夜蛾血淋巴凝集素活性的研究

利用血凝法检测烟夜蛾Helicoverpa assulta血淋巴对红细胞的凝集活性和不同发育期凝集素水平,同时选取13种糖进行凝集素糖抑制反应,以明确该凝集素与烟夜蛾发育的关系和糖结合特性.研究结果表明,在烟夜蛾的不同发育期均检测有凝集素,但各龄幼虫及不同日龄蛹的凝集活性存在明显差异,雌蛹凝集素水平高于同日龄的雄蛹,表明凝集素与发育期、虫龄及蜕皮过程有关,且与性别相关.烟夜蛾蛹血淋巴凝集素活性与近缘种棉铃虫H.armigera的相类似,均被D-半乳糖、L-鼠李糖、麦芽糖、乳糖明显抑制;D-葡萄糖、D-果糖、L-岩藻糖和蔗糖等也有抑制作用,但抑制程度不同;L-阿拉伯糖与棉铃虫凝集素的专一性结合更强;N-乙酰葡萄糖胺和L-山梨糖只对棉铃虫凝集素有抑制作用,而对烟夜蛾凝集素无抑制作用,说明这2个近缘种的凝集素不完全相同.     

三疣梭子蟹血清凝集素的生物学特性

对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血清凝集素的凝集特性进行了研究.结果表明:三疣梭子蟹血清凝集素对鲫鱼、中华鳖、草鱼、鸡和人类A、B、0型血细胞没有凝集作用,但是对小鼠、兔的血细胞表现出较强的凝集活性,其中对小鼠血细胞的血凝活性达到210,对兔血细胞的血凝活性达到28;盐度对其凝集活性有较大影响,NaCl浓度在0.6 mol/L以上时基本失活;凝集素活性最适pH值为6.0～7.4;血清凝集素对Ca2+、Mg2+离子有明显的依赖性,EDTA可以明显抑制其凝集活性;糖抑制结果表明,血清凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰甘露糖胺特异性抑制;对血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25％饱和度硫酸铵沉淀区;聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,主要蛋白条带在72～95 ku.     

三疣梭子蟹血清凝集素的生物学特性

对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果表明:三疣梭子蟹血清凝集素对鲫鱼、中华鳖、草鱼、鸡和人类A、B、O型血细胞没有凝集作用,但是对小鼠、兔的血细胞表现出较强的凝集活性,其中对小鼠血细胞的血凝活性达到210,对兔血细胞的血凝活性达到28;盐度对其凝集活性有较大影响,Na Cl浓度在0.6 mol/L以上时基本失活;凝集素活性最适p H值为6.0~7.4;血清凝集素对Ca2+、Mg2+离子有明显的依赖性,EDTA可以明显抑制其凝集活性;糖抑制结果表明,血清凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰甘露糖胺特异性抑制;对血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25%饱和度硫酸铵沉淀区;聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,主要蛋白条带在72~95 ku。     

三疣梭子蟹血清凝集素的生物学特性（英文）

对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果表明:三疣梭子蟹血清凝集素对鲫鱼、中华鳖、草鱼、鸡和人类A、B、O型血细胞没有凝集作用,但是对小鼠、兔的血细胞表现出较强的凝集活性,其中对小鼠血细胞的血凝活性达到210,对兔血细胞的血凝活性达到28;盐度对其凝集活性有较大影响,Na Cl浓度在0.6 mol/L以上时基本失活;凝集素活性最适p H值为6.0~7.4;血清凝集素对Ca2+、Mg2+离子有明显的依赖性,EDTA可以明显抑制其凝集活性;糖抑制结果表明,血清凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰甘露糖胺特异性抑制;对血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25%饱和度硫酸铵沉淀区;聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,主要蛋白条带在72~95 ku。     

非洲山毛豆种子凝集素性质的研究

以非洲山毛豆种子为材料,通过热稳定性试验、酸碱稳定性试验、糖专一性试验及金属离子试验对其凝集素的性质进行研究。结果表明:当温度大于70℃,凝集素活性全部丧失;凝集素在pH5.8~9.1范围内具有凝集活性;凝集素的抑制糖主要是乳糖、蔗糖,而D-半乳糖、海藻糖和麦芽糖对其完全没有抑制效果;山毛豆种子凝集素凝集兔红细胞的活性依赖于Ca2+和Mg2+,Mn2+对山毛豆种子凝集素凝集兔红细胞的活性无影响。     

一种可降解黄原胶的鞘氨醇单胞菌的凝集活性

采用血凝测试及血凝活性糖抑制测试方法,测定了一种可降解黄原胶的鞘氨醇单胞菌XT-11Sphingom onassp.对红细胞的凝集活性及糖抑制专一性,同时进行了温度、pH及Ca2 对红细胞凝集活性影响的试验。结果表明:XT-11菌悬液能凝集家兔、家鸡两种红细胞,其凝集效价分别为26和24;菌悬液对兔红细胞的凝集作用可以被肝素所抑制;鞘氨醇单胞菌的凝集活性不依赖于Ca2 ,且在pH为6.0~10.0时较稳定,在温度为60℃时完全丧失凝集活性。这说明该菌含有能凝集红细胞的活性物质。     

棉铃虫幼虫血淋巴免疫因子溶血素的理化特性研究

为深入研究棉铃虫幼虫血淋巴免疫因子溶血素的分子结构和生理功能,明确其分离、纯化的理化条件,采用分光光度法分别研究了温度、浓度、作用时间、pH、EDTA和金属离子对该溶血素的溶血活性影响及其糖结合特性。结果表明,棉铃虫幼虫血淋巴溶血素属热不稳定型。溶血素反应浓度与溶血活性并不成正比,8倍稀释液的溶血活性反高于4倍稀释液。反应2 h后,血淋巴溶血素对鸡血红细胞溶解速度急剧加快,6 h溶血效能达最大。血淋巴溶血活性的最适pH 7.0～8.0。62.5～500 mmol·L~(-1)EDTA对血淋巴溶血活性具有促进作用,而Ca~(2+)却具有极显著的抑制作用。糖抑制试验结果表明,供试的8种糖(糖苷)和唾液酸均未对血淋巴溶血活性产生抑制作用。     

草鱼等8种淡水鱼血清凝集素作用的比较

选取8种常见养殖鱼：团头鲂、二龄草鱼与4～5月龄草鱼、加州鲈、银鲫、胡子鲇、鲢、鳙和黄鳝，采其血清，检测其对人和不同动物红细胞的凝集作用，并比较不同糖、酶、理化因素和脂溶剂等对鱼血清凝集兔红细胞的影响。试验显示，草鱼等8种常见养殖鱼血清对人和不同动物的红细胞均有一定的凝集作用，表明均存在血清凝集素。黄鳝、二龄草鱼血清凝集效价较高，二龄草鱼血清凝集效价远高于4～5月龄草鱼。兔红细胞经胰蛋白酶修饰后，不同鱼血清对其凝集效价显升高；甘露糖、半乳糖和乳糖对鱼血清凝集素凝集活性有较强的抑制作用；EDTA、巯基乙醇与胰蛋白酶等均能导致草鱼等血清凝集素凝集活性的下降。     

泰山赤鳞鱼肌肉中凝集素的研究(英文)

[目的]研究泰山赤鳞鱼肌肉中的凝集素,旨在为赤鳞鱼对环境的适应机制和免疫反应提供科学依据,从而有利于对泰山赤鳞鱼的保护与繁殖。[方法]以泰山赤鳞鱼为试验材料,运用双醛固定的血细胞凝集试验证实在泰山赤鳞鱼肌肉提取液中的存在凝集素并对其部分理化性质进行研究。[结果]赤鳞鱼肌肉提取液凝集素对6种动物血细胞都有凝集作用,其中对兔血红细胞的凝血活性效价最高;该凝集素属于巯基依赖型凝集素,其最适pH为4～8,最适温度是60℃;糖抑制试验显示只有蔗糖对其凝集有抑制作用,说明蔗糖在该凝集素的识别和凝集过程起重要作用。[结论]推测在不同种类的水生生物中存在的凝集素对热敏感性及发生凝集活性的适宜pH范围是相似的。     

虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用

【目的】研究证实虫酰肼是否对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)酚氧化酶活性具有抑制作用。【方法】采用生物化学方法,分别测定虫酰肼对甜菜夜蛾5龄幼虫离体酚氧化酶的作用特点和用虫酰肼浸泡饲料饲喂5龄幼虫后,虫酰肼对幼虫头部、血淋巴及表皮组织酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】随着虫酰肼浓度增大,酚氧化酶活力呈逐渐下降趋势,虫酰肼对酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)为5.43μmol·L-1。虫酰肼对酚氧化酶的抑制作用表现为混合型抑制,游离酶抑制常数(K i)和酶-底物络合物抑制常数(K is)分别为11.223μmol·L-1和34.036μmol·L-1。通过研究金属铜离子和酶液对虫酰肼吸收峰的影响,推测虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用不是与该酶活性中心的铜离子结合,而可能是与酚氧化酶蛋白结合发生作用有关。用28.41μmol·L-1和85.23μmol·L-1亚致死剂量浓度的虫酰肼分别处理甜菜夜蛾5龄幼虫24、48和72h后,测定其头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的活性。结果表明,随着用虫酰肼处理时间延长,两个剂量的虫酰肼对幼虫头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的抑制作用基本呈逐渐增大趋势;处理后相同时间,高剂量的虫酰肼对酚氧化酶活性的抑制率基本上高于低剂量的抑制率;虫酰肼对头部酚氧化酶的抑制率最高,血淋巴次之,表皮最低。【结论】虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶具有明显的抑制作用,幼虫新表皮形成过程受到阻碍可能与虫酰肼抑制酚氧化酶的活性有关。     

刀豆凝集素的血凝活性及其性质研究

[目的]为进一步研究刀豆凝集素提供依据。[方法]从豆科植物刀豆属(Canavalia)中Canavalia ensiformis(L.)DC的干燥成熟种子中提取刀豆凝集素(Concanavalin A,简称ConA),进行血凝活性测定,并对其部分性质作了初步研究。[结果]结果表明:采用胰蛋白酶修饰人血(A型)红细胞来检测ConA凝集活性时,发现其活性提高了8倍。ConA对人A、B、O、AB型及供血动物(兔,鸡,鸭,鸽,鲤、鲫鱼)的血红细胞都具有一定程度的凝集活性,无供体细胞专一性或血型专一性;D-葡萄糖和D-甘露糖是ConA的专一性结合糖。ConA是一种对热较稳定的凝集素,40℃以下时ConA很稳定,80℃以上保温20 min后,血凝活性完全丧失。在pH值范围5.8~8.3,ConA的凝集活性较高,在pH>11.9时,凝集活性完全丧失。变性剂脲浓度达到0.4 mol/L以上时,ConA的凝集活性可完全丧失。[结论]该研究对今后系统阐明其生物学作用,扩大应用范围具有重要意义。     

淡足侧沟茧蜂萼液对甜菜夜蛾幼虫血淋巴黑化反应和酚氧化酶活性的影响

为探讨寄生蜂寄生对寄主体液免疫的影响,研究了淡足侧沟茧蜂萼液调控甜菜夜蛾幼虫血淋巴黑化反应和酚氧化酶活性的效应。结果表明:甜菜夜蛾4龄幼虫血淋巴黑化率在注射萼液0.5 h后逐渐下降,在注射12 h后逐渐上升,随着注射后时间推移,萼液抑制其黑化作用减弱;在注射后24 h的观察时间内,注射萼液组黑化率始终低于注射磷酸缓冲液组,且在注射后的16 h内均达到显著水平;萼液对寄主4龄幼虫血淋巴酚氧化酶活性的抑制作用随注射后时间推移而减弱,注射萼液组酚氧化酶活性始终低于注射磷酸缓冲液组,且在注射后12 h内均达到显著水平。     

不同马铃薯品种凝集素含量和活性比较

植物凝集素是一类具有高度特异性的糖结合活性的蛋白,能凝集细胞.不同植物凝集素含量和活性均不相同,即使同一种植物由于品种不同,其含量和活性也各不相同,就此两方面,试验首先通过葡聚糖凝胶层析法和分光光度法得出黄瓤马铃薯凝集素含量多于白瓤马铃薯,继而通过血凝平板试验得出同等条件下黄瓤马铃薯凝集素活性也大于白瓤的.表明,黄瓤马铃薯凝集素含量和活性均大于白瓤马铃薯.     

海刺猬体腔液凝集素的纯化、性质及其色氨酸的化学修饰

通过DEAE-纤维素52离子交换层析、Sephadex G-200凝胶层析,从海刺猬体腔液中分离纯化海刺猬Glyptocidaris crenularis凝集素(简称为GCL),并对其部分性质和色氨酸的化学修饰进行了研究.结果表明:在还原与非还原SDS - PAGE上,GCL都显示单一蛋白质条带,其相对分子量为94462; GCL对人O型、兔、鸡、狗红细胞均具有血凝活性,对兔和狗红细胞的血凝活性最强,但对人A、B、AB型及鲫红细胞无血凝活性;GCL血凝活性在温度为4～33℃时最高,经36℃热处理10 min后,GCL对兔红细胞的血凝活性保留25％,经48℃加热10 min后,其血凝活性完全丧失;GCL血凝活性在pH为7.5 ～8.5时最高;ca2+对GCL血凝活性无抑制作用,EDTA和Mg2+对其血凝活性有抑制作用;GCL血凝活性不被所测试的α-乳糖、D-果糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和γ-球蛋白所抑制,但被蔗糖和麦芽糖所抑制,最小抑制浓度分别为40 mmol/L和20 mmol/L;用N-溴代丁二酰亚胺(NBS)对GCL分子中的色氨酸(Trp)残基进行化学修饰,有5.1个Trp残基被修饰,修饰后其血凝活性丧失75％,表明Trp残基是GCL血凝活性的重要组成部分.     

转基因抗虫棉凝集素的检测

为探讨外源杀虫基因导入对棉花重要防御物质凝集素的影响,同时建立棉花凝集素的灵敏检测方法,采用血凝法检测转基因(Bt、CpTI和外源凝集素基因)棉花中凝集素的变化,并经胰蛋白酶处理鸡血红细胞、不同温度处理和比色法测定棉花的凝集素活性。结果表明,棉花叶片中凝集素水平随棉花生长而发生变化,不同外源基因的导入使棉花凝集活性升高或降低。采用经胰蛋白酶修饰后的鸡血红细胞检测,棉花凝集活性明显提高,最高是未经处理检测的64倍。棉花凝集素具有一定的抗热性,在45℃以下很稳定,但随温度的升高和处理时间的延长活性下降。血凝反应和比色法均能直观、定量地反映棉株中凝集素活性,但后者精度更高。以上研究结果表明,外源杀虫基因的导入引起棉花凝集素水平发生改变,比色法可以作为检测棉株中自身和外源凝集素基因表达后凝集活性的重要手段。     

长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质

【目的】凝集素是竹荪的一类生理活性物质,为进一步明确其药用功效,开展了长裙竹荪凝集素理化性质研究。【方法】长裙竹荪菌丝体通过生理盐水抽提、 20%～75%饱和度的硫酸铵沉淀、 DEAE-Sepharose和SephadexG-100柱层析纯化得到长裙竹荪菌丝体凝集素(DIL);并通过血细胞凝集活性、糖抑制试验、酸碱稳定性、热稳定性分析以及金属离子等因素来测定长裙竹荪菌丝体凝集素的理化性质。【结果】经PAGE显示单一条带,测得其亚基相对分子质量为43.6 kDa。该凝集素对供试的鸽、兔、鸭和鸡血红细胞具有凝集作用,对兔红细胞的凝集作用可被D-半乳糖和N-乙酰胺基-葡萄糖所抑制。长裙竹荪凝集素对热不稳定,经50℃处理10 min,活性明显降低;该凝集素在pH 4.0～8.0都保持着较高的凝集活性,其凝血活性依赖于Ca~(2+)和Mg~(2+)二价金属离子,Mn~(2+)和Zn~(2+)则无影响。【结论】长裙竹荪菌丝体凝集素对动物血红细胞具有较好的凝集活性,而且凝集活性需要在一定浓度的Ca~(2+)和Mg~(2+)才会起作用。     

理化因素对大蒜凝集素生物活性的影响

大蒜(Alliumsativum L.)鳞茎经浸取、硫酸铵分级沉淀、离子交换柱和凝胶过滤得到凝集素(Alliumsativum L.Lectin,ASL)样品。ASL能凝集兔血红血球和鸡血红血球,使鱼血红血球发生溶血,其中对兔血红血球的凝集活性最强。大蒜凝集素在70℃以上的温度加热10 min才失活,表明大蒜凝集素有较强的热稳定性。凝集活性最适pH为4.5~6.4,其凝集活性部分依赖于金属离子,且大蒜凝集素的凝集活性能被变性剂所抑制。     

地稔凝集素的提取及凝血活性的研究

为研究和利用地稔的促凝血活性物质,以地稔为试材,提取地稔凝集素,研究pH、温度和糖等理化因素对凝血活性的影响。结果表明:经硫酸铵沉淀及透析提取的地稔凝集素具有红细胞凝集活性;碱性条件下,抑制作用明显,而酸性条件有较强促进作用;温度对凝集素凝血活性影响很小;半乳糖有明显促进作用。     

鳙鳃凝集素的稳定性及细胞凝集作用

[目的]为了探明鳙鳃凝集素在各种条件下的稳定性及其细胞凝集活性。[方法]测定经各种条件处理过的鳙鳃凝集素样品的血凝活性,评价其稳定性;通过镜检测定鳙鳃凝集素对微藻细胞及各种微生物细胞的凝集作用。[结果]琥珀酰化修饰、胰蛋白酶水解、SDS及β-巯基乙醇处理均使鳙鳃凝集素活性大大降低;在设定的处理浓度下,二甲基亚砜、NaC l及三氟乙酸对其活性没有影响;鳙鳃凝集素能专一地凝集雨生红球藻及哈维氏弧菌和鳗弧菌。[结论]鳙鳃凝集素稳定性受各种因素影响,能够选择性地凝集雨生红球藻及2株鱼类病原弧菌。     

大豆凝集素纯化及凝集活性测定的研究

通过建立快速大豆凝集素(SBA)粗提液制备方法,利用N-乙酰-D-半乳糖胺-epoxy-Sepharose 6B亲和层析制备体系制备大豆凝集素样品,采用聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)及红细胞凝集试验分别对本试验制备的大豆凝集素进行纯度及凝集活性的检测。结果表明,试验制备的大豆凝集素的产率为135 mg/100 g;所制得的大豆凝集素样品的纯度较高,与大豆凝集素标准品基本一致;其凝集活性为256。研究成果可为大豆凝集素的量化生产提供技术参考。