玻璃化保护液处理下高粱离体花粉的活力解析

为了确立可显著提高高粱花粉体外存活的水性环境条件,设计了离体高粱花粉所处的干燥(CK)、磷酸盐溶液(PBS)、玻璃化保护液1(PVS1)、玻璃化保护液2(PVS2)、玻璃化保护液3(PVS3)等5种环境;采用TTC法,对4种水性溶液体系中浸渍处理15 min后的高粱花粉和干花粉的存活率进行了比较分析。结果显示,各状态下离体高粱花粉存活率大小依次为PBSPVS3PVS2PVS1CK;与PBS中的花粉存活率相比,PVS3对花粉存活率提高不显著,PVS1和PVS2可显著提高花粉存活率。表明水性环境对离体花粉的活力有显著的损伤效果;3种保护液中的甘油、乙二醇、二甲基亚砜、蔗糖等对高粱离体花粉活力有保护作用,其中,含有这4种成分的PVS1对水性环境高粱离体花粉的活力保护效果最好。研究结果有望为水性环境下高粱花粉生殖细胞基因的诱变提供技术支撑。     

玉米花粉和花丝活力研究

探讨了在不同温度条件下离体玉米花粉生活力和花丝受粉结实活力保持的时间。结果表明,不同环境下不同基因型材料花粉活力存在显著差异。在低温条件下花粉寿命没有延长;常温条件下花粉寿命在24~48 h。花丝活力能持续到开花期结束后7 d,结实率可达80%以上。     

不同N-甲基-N-亚硝基脲处理下高粱离体花粉的活力解析

为了确立高粱离体花粉在N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)的常温处理下维持较高活力的适宜条件,通过TTC染色法研究了MNU浓度、处理时间、磷酸盐浓度与p H值对离体花粉活力的影响。结果表明,处理后花粉的存活率与MNU浓度、处理时间呈负相关,随磷酸盐浓度、p H值的增大呈先升高后降低的变化规律;各诱变因素对处理后花粉存活率影响的大小顺序为MNU浓度处理时间磷酸盐浓度pH。当MNU浓度为0.5 mmol/L、处理时间为40 min、磷酸盐浓度为10 mmol/L、p H值为4.8时,受处理花粉的存活率达到约40.0%的最高值。研究结果对于基因水平上高粱种质的创新具有重要意义。     

杀雄剂SQ-1诱导玉米雄性不育效果研究

[目的]分析杀雄剂SQ-1对玉米的杀雄效果。[方法]对5个不同的玉米品种(浚单22、德农20、吉祥一号、郑单958、蠡玉)在散粉前7 d喷施浓度为5 kg/hm~2的SQ-1处理,利用离体萌发法、碘-碘化钾染色法和TTC染色法3种方法分别鉴定花粉活力,并对比分析其穗型、顶端雄穗育性以及植株整体生长情况。[结果]经SQ-1处理的玉米植株,其穗小且籽粒少,顶端雄穗花粉数量少且活力差,花粉粒活性变弱。[结论]SQ-1对玉米花粉有较显著的杀雄效果,可以作为玉米化学杀雄的有效途径之一。     

高温对玉米花粉活力的影响

采用离体玉米花粉高温处理的方法模拟自然条件下高温对花粉的危害,首先在大田条件下种植郑单958作为材料,在散粉期采粉并对其进行高温处理。共设置3个温度处理(32、35、38℃),5个持续时间处理(5、10、20、30、60min),同时设定常温对照(CK)。研究测定了花粉经高温处理后氯化三苯基四氮唑(Triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色率、小花受精率和总结实率,以反映高温对花粉活力的影响。结果表明:温度、处理时间及互作对花粉活力均有极显著影响,32和35℃情况下花粉活力持续时间较长,38℃和处理1h对花粉活力的伤害均较大。随着温度的升高,小花受精率和总结实率总体上呈降低的趋势;3个温度水平下的小花受精率和总结实率均随着处理时间的延长而降低,当温度达到38℃或处理时间为1h时,小花受精率和结实率都很低,反映出极端高温或持续高温对花粉活力伤害很大。     

高温胁迫后的棉花花粉活力测定方法

以杂交棉南抗3号的父本南农R101为材料,利用人工气候室,设置日温/夜温分别为40℃/34℃(高温胁迫处理)和30℃/24℃(对照),连续3 d处理初花期的棉花植株,分别利用花粉原位萌发法、离体萌发法、联苯胺-甲萘酚染色法、I2-KI染色法等4种方法检测高温胁迫处理后的棉花花粉活力。结果表明,花粉原位萌发法、离体萌发法、联苯胺-甲萘酚染色法、I2-KI染色法等4种方法均能有效测定30℃/24℃处理的花粉活力,测定的花粉活力均在80%以上。与离体萌发法相比,联苯胺-甲萘酚染色法、I2-KI染色法测定经过高温胁迫处理后的花粉活力值偏高。花粉原位萌发法能最真实、自然反映花粉在柱头上的萌发情况,但是不能统计花粉萌发率。花粉离体萌发法简便、有效,最适用于检测经过高温胁迫处理后的花粉活力。     

蜡梅花粉活力检测方法筛选及保存时间观察

用氯化三苯基四氮唑(TTC)法、无机酸法和离体萌发法等3种测试方法检测不同蜡梅Chimonanthus praecox品种的花粉活力。结果表明:TTC法和无机酸法检测效果较差,而经过改良的培养基离体萌发法能有效地检测蜡梅花粉活力。该实验条件下,蜡梅花粉离体萌发最佳培养基为聚乙二醇(分子量6 000)300 g.kg-1 硼酸100 mg.L-1。在20℃暗培养条件下,品种大金星‘Dajinxing’、圆被素心‘Rotunbaticoncolor’和金龙紫穴‘Jinlong Zixue’的萌发率分别为64.4%,35.8%和35.5%,不同蜡梅品种花粉活力差异较大。室温露置条件下,蜡梅花粉活力能保持18~19 d,而经干燥后,在密封冷藏条件(4±2℃)下能保持2个月左右。图3表2参11     

荷花花粉活力的检测方法比较分析

为探究快速有效地检测荷花花粉活力的方法,选出适用于大部分荷花花粉萌发的培养基,筛选花粉活力较高的品种,以11份不同资源荷花的花粉为材料,利用离体培养法、I₂-KI染色法、2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法对荷花花粉活力进行检测。结果表明,I₂-KI染色法和TTC染色法检测得到的花粉染色率均与离体培养得到的萌发率结果不符。易建莲花粉萌发率在5-1培养基（10%PEG 4000、0.02%硼酸、0.1%蔗糖）上最高,为9.86%。野生莲中的泰国莲、越南莲的花粉离体萌发率分别为16.45%、16.67%,品种荷花中单洒锦的离体萌发率则高达18.46%。由研究结果得出:（1）3种花粉活力测定方法中,离体培养法适用于检测荷花的花粉活力,而I₂-KI染色法和TTC染色法并不适合;（2）适合荷花花粉萌发的培养基是含10%PEG 4000、0.02%硼酸、0.1%蔗糖的液体培养基;（3）野生莲中,泰国莲、越南莲的花粉活力较高,而在品种荷花中,单洒锦的花粉活力最高。     

5种通关藤花粉活力测定方法比较

【目的】研究通关藤花粉活力和提高其坐果率,并为其快速繁殖提供理论依据。【方法】采用TTC染色法、醋酸洋红染色法、I_2-KI染色法、过氧化物酶染色法和花粉离体萌发法测定通关藤花粉活力。【结果】TTC染色法、醋酸洋红染色法、过氧化物酶染色法和花粉离体萌发法测得的花粉活力均低于60%,其中花粉离体萌发法测得的花粉活力最低,只有0.02%,显著低于其他4种测定方法 (P0.05)。TTC染色法、醋酸洋红染色法和过氧化物酶染色法测得的花粉活力分别为51.44%、52.10%和39.02%,三者之间差异不显著(P0.05)。I2-KI染色法测得的花粉活力高达90.85%,显著高于其他4种测定方法 (P0.05)。【结论】最适合通关藤花粉活力的测定方法为I2-KI染色法,并且随着花龄增大花粉活力有所下降。     

培养基类型和培养温度对引进番茄品种花粉活力的影响

为了探讨不同培养基类型和培养温度对番茄花粉活力的影响,比较不同品种番茄花粉活力差异,确定番茄花粉萌发的适宜培养基和温度,以8个美国引进番茄品种为材料,设置了5种培养基和5个培养温度,测定花粉的萌发率和花粉管长度。结果表明:番茄花粉离体萌发的最适培养基为120 g/L蔗糖+120 mg/L硼酸+4 mg/L GA3+0.5 mg/L硫胺素+1%琼脂;双因素方差分析结果,不同温度及不同品种间花粉活力差异显著,而且2者之间存在显著的交互作用。番茄花粉离体萌发的最适温度是25℃,品种NT-181在25℃条件下的花粉活力最高;在供试品种中,NT-203具有耐高温的能力,NT-168、NT-186具有耐低温的能力。研究结果明确了不同品种番茄花粉活力对不同温度的耐性,为番茄育种的耐高温、耐低温亲本选择和番茄栽培的耐高温、耐低温品种的筛选提供依据。     

不同贮藏温度下文冠果花粉离体萌发研究

花粉活力和萌发能力对文冠果杂交育种至关重要。为优化文冠果花粉离体萌发培养基,开展了正交试验研究蔗糖(200,150,100g·L-1)、硼酸(0.05,0.10,0.20g·L-1)、硝酸钙(0.00,0.25,0.50g·L-1)和pH值(6.0,6.5,7.0)对文冠果花粉离体萌发的影响;培养基优化后,通过配对样本T检验分析不同温度贮藏(7d)的文冠果花粉经再水合与未水合2种处理其花粉萌发力的差异;通过多重比较分析文冠果不同类型花粉的萌发能力;测定不同温度条件贮藏的文冠果花粉离体萌发率随时间的动态变化。试验结果表明:文冠果新鲜花粉在蔗糖浓度为150g·L-1,硼酸浓度为0.1g·L-1,琼脂浓度为9g·L-1,pH值为6.5的培养基上,萌发率高达91.08%;不同温度贮藏的花粉在室温(25℃)条件经4h再水合处理能极显著地恢复其真实的萌发率,与未水合处理的花粉萌发率的差异达到极显著水平;文冠果不同类型花粉萌发率的排列次序为LYSYLRFS,LY型花粉萌发率最高(91.08%),FS类型花粉的萌发率极低,仅为3.25%;-80℃超低温贮藏对文冠果花粉萌发率的保持最好,贮藏30d时生活力才有明显下降,萌发率为85.75%,1a后仍有近50%的萌发率;-20℃贮藏次之,7d后萌发率就有明显下降,萌发率为86.34%,1a后萌发率为42.91%;4℃贮藏再次,7d后萌发率为80.92%,1a后萌发率为24.35%,下降迅速;常温25℃条件花粉保存7d,萌发率为64.75%,保存15d时萌发率为2.83%,基本上失去了生活力。此研究可为文冠果花粉活力检测提供一种可靠方法并为花粉贮藏提供参考依据。     

淡黄花百合花粉活力及其测定方法比较

用I－KI法、氯化三苯基四氮唑（TTC）法、离体萌发法连续7 d对淡黄花百合（Lilium sulphureum Baker）的花粉活力进行测定,结果表明,I－KI法、离体萌发法、TTC法测定的淡黄花百合花粉活力不完全相同。I－KI法、离体萌发法所得花粉活力无显著差异。I－KI法、离体萌发法所得花粉活力无显著差异,由于I－KI法较离体萌发法简单、成本低、所需时间短,因此是快速测定淡黄花百合花粉活力的最佳方法。开花第2至第4天花粉活力最高且无显著差异,这几天都可以进行杂交授粉,但从发育的角度考虑,以开花第2天授粉最佳。     

玉米花粉寿命及有效控制花粉飘逸的隔离距离研究

花粉是玉米基因飘逸的重要载体。研究了花粉活力的持续时间和有效控制基因飘逸的隔离距离。在花药刚开裂时采集花粉,置于薄膜层上,放在室外自然条件下保存,每隔一定时间对采集的花粉进行目测和授粉．通过对花粉的目测评判和计算结实率评估花粉活力。试验花粉源区域4000m^2,在其周围不同距离的地方种植若干玉米小区,每个小区面积为12．8m^2,以测定隔离距离的有效性。作为花粉源的玉米材料包含可用于测定花粉飘逸的叶色标记或种子标记。由于大气压不同,花粉可在花药开裂后1～2小时内保持活力。假定花粉以当地下午平均最大风速直线传播,并可在2小时内保持花粉活力,且忽略花粉沉降率因素,理论上讲,具有活力的花粉可以传播的最大距离为32km。试验结果是在离花粉源100m发生了一定数量的异花授粉,离花粉源200m处有个别异花授粉发生。离花粉源300m处没有异花授粉发生。试验结果与玉米花粉不耐干燥并具高沉降速率的结论一致。试验结果表明距离隔离是控制玉米因授粉而发生基因飘逸的有效方法。     

转Cry抗虫基因玉米对家蚕的安全性评价

家蚕可能通过取食漂移到桑叶上的玉米花粉从而受到转基因玉米中表达的Cry蛋白的影响。实验采用室内生物测试的方法评价了转cry1Ab和cry2Ab基因玉米GAB-3花粉对家蚕可能产生的影响,并采用在饲料中掺入蛋白的方式检测了转基因玉米中广泛使用的6种Cry杀虫蛋白对家蚕的毒性。当桑叶上GAB-3花粉密度为50粒·cm^-2时,对家蚕幼虫存活率无显著影响,达500粒·cm^-2时,家蚕14 d存活率为0;以10粒·cm^-2的GAB-3花粉饲喂家蚕幼虫7 d对其体重无显著不利影响,但延长饲喂时间或者当GAB-3花粉密度为50粒·cm^-2时,家蚕的体重显著低于对照组;转基因和非转基因玉米花粉处理14 d或更长时间的家蚕体重均低于无花粉处理组。与非转基因对照处理组相比,低于100粒·cm^-2的转基因玉米GAB-3花粉处理组家蚕的化蛹率、茧重、茧壳重和蛹重无显著差异,转基因玉米和非转基因玉米花粉处理均会延长家蚕幼虫的发育历期。GAB-3花粉对家蚕7 d的LC₅₀为261.18粒·cm^-2,随着处理时间延长,LC₅₀下降。测试的6种Bt杀虫蛋白对家蚕的毒性依次为Cry1C>Cry1Fa>Cry1B>Cry2A>Cry1Ab>Cry1Ac。目前,在中国接近商业化的转基因玉米中多采用的Bt杀虫蛋白为Cry1Ab和Cry2A,二者对家蚕的毒性较低,并且在实际生产中,家蚕接触到的转基因玉米花粉密度较低,因此转Cry抗虫基因玉米对家蚕的风险较低。     

大红火龙果花粉离体萌发条件的优化及其活力测定方法筛选

为大红火龙果人工授粉及其丰产栽培、杂交育种及果实品质改良提供参考,采用单因素试验,研究不同培养基组分对花粉萌发的影响,并运用离体萌发法测定花粉萌发率;比较TTC染色法、醋酸洋红染色法、亚历山大红染色法和I_2-KI染色法测定大红火龙果的花粉活力,筛选准确测定大红火龙果花粉活力的最佳方法。结果表明:大红火龙果花粉离体萌发最佳培养基组分为Ca(NO_3)_2·4H_2O 0.3g/L+MgSO_4·7H_2O 1.2g/L+KNO_3 0.1g/L+15%蔗糖+700mg/L硼酸+1%琼脂,pH为6.7,此条件下花粉萌发率高,为(43.9±6.27)%,且利于花粉管伸长。醋酸洋红法测定的大红火龙果花粉活力为(37.67±4.18)%,与离体萌发法测定的萌发率无显著差异,为花粉活力的最佳测定方法。     

茄子花粉的离体萌发和生活力保存研究（英文）

茄子是广泛栽培的蔬菜,花粉的离体萌发和生活力保存技术对杂交育种有重要意义。以2个茄子杂交一代组合的父母本为材料,开展了茄子花粉离体萌发培养基成分筛选,不同保存温度对花粉活力和授粉结实效果影响的研究。结果表明,在5%、10%和15%3个蔗糖浓度中,茄子花粉在5%的培养基上萌发最好,赤霉素对干燥保存花粉的萌发有促进作用,适宜的培养基成分是:0.5%琼脂+5%蔗糖+0.01%H3BO3+0.01%GA3;适宜培养时间为:新鲜花粉2 h,干燥低温保存的花粉4 h。低温(4℃)干燥有利于保持花粉活力,但时间长,适宜的干燥方式是室温(25～30℃)干燥花药4 h。茄子新鲜花粉活力随着分枝的增多有下降趋势,第2和第3次分枝上的花粉活力最强,第5次分枝上的花粉活力显著下降,第2和第3次分枝上的开花前1天的蕾期花粉平均萌发率在65%以上。以萌发率10%作为茄子花粉有效活力的下限,如取萌发率较高的第2、3次分枝上的花粉干燥保存,室温保存1 d,4℃保存5～10 d,-80℃保存368 d,花粉仍有活力,平均授粉坐果率在70%以上;以保存0～20 d的数据统计,不同保存温度之间和不同保存时间之间的平均单果结实率差异不显著,平均单果种子实粒数,-80℃的与新鲜花粉的差异不大,但比4℃的增加87.3%,差异极显著。     

大红火龙果花粉离体萌发条件优化及花粉活力测定方法的筛选

为大红火龙果人工授粉及其丰产栽培、杂交育种及果实品质改良提供参考，采用单因素试验，研究不同培养基组分对花粉萌发的影响，并运用离体萌发法测定花粉萌发率；比较TTC染色法、醋酸洋红染色法、亚历山大红染色法和I2-KI染色法测定大红火龙果的花粉活力，筛选准确测定大红火龙果花粉活力的最佳方法。结果表明：大红火龙果花粉离体萌发最佳培养基组分为Ca(NO3)2﹒4H2O 0.3 g/L + MgSO4﹒7H2O 1.2 g/L + KNO3 0.1 g/L + 15% 蔗糖 + 700 mg/L硼酸 + 1% 琼脂，pH为6.7，此条件下花粉萌发率高，为（43.9 ± 6.27）%，且利于花粉管伸长。醋酸洋红法测定的大红火龙果花粉活力为（37.67 ± 4.18）%，与离体萌发法测定的萌发率无显著差异，为花粉活力的最佳测定方法。     

青蒿花粉活力及柱头可授性研究

以野生青蒿中形态差异较为明显的绿秆(品系Y03)和紫红秆(品系Y07)为材料,分别以碘-碘化钾染色法、TTC染色法、联苯胺-甲萘酚染色法和离体萌发法测定其花粉活力,并从中选取较适宜的检测方法研究其贮藏特性,采用联苯胺-过氧化氢法测定其柱头的可授性.结果表明,碘-碘化钾和TTC染色法不适宜青蒿的花粉活力检测,联苯胺-甲萘酚染色法可以用于快速测定青蒿花粉活力,但测定值偏高,离体萌发法能准确可靠地反应花粉活力;两个品系的新鲜花粉在室温条件下只能贮藏2d,4℃,-19℃条件下可以贮藏3d,干燥处理显著加快了花粉活力的丧失;联苯胺-过氧化氢法测得两个品系青蒿柱头可授期为8~10d,边缘雌花可授性比中央两性花的强,且其可授期比中央两性花长1~2d.     

温度对樱桃番茄花粉活力及萌发率的影响

为探究外界环境温度对番茄花粉活力及萌发率的影响,以樱桃番茄西大樱粉1号父本YA-4-3-1-8花粉为研究对象,利用红墨水染色法、液体培养基离体萌发法检测花粉活力及萌发率.采用相关分析和回归分析法,分析了最高温度、最低温度、温差对番茄花粉活力及萌发率的影响.结果表明,樱桃番茄花粉的萌发率与最高温度、最低温度和温差均存在极显著的相关性,而活力则与最高温度、温差呈现出极显著相关.花盛开前第2天的最高温度、最低温度和温差对番茄花粉萌发率的影响最大,具有显著的负相关关系;花盛开当天的最高温度、盛开前第2天的最低温度和温差对花粉活力的影响最大.同时,活力与最高温度、温差存在显著负相关性,与最低温度具有显著正相关关系.可见,环境温度的变化会对花粉活力及萌发率受产生不同程度的影响,高温条件下,极易使花粉活力及萌发率下降.此外,花朵盛放前和当天的温度变化,与花粉活力及萌发率的相关性也存在一定的差异.其中,开放前的温度对花粉萌发率的影响更加突出.花粉活力及萌发率不仅只受当天温度的影响,开放前的温度变化也会对其造成显著的影响温度过高或过低都会影响花粉的发育,最终导致番茄产量下降.     

转cry1Ab/cry2Aj基因玉米双抗12-5对意大利蜜蜂成虫的影响

转cry1Ab/cry2Aj基因玉米双抗12-5是我国自主研发的抗虫耐除草剂玉米品系,目前已获批准进入生产性试验阶段。蜜蜂是具有重要生态和经济意义的昆虫,是转基因植物环境安全评价中主要的非靶标节肢动物。在转基因抗虫植物种植过程中,蜜蜂可能通过采集花粉暴露于转基因抗虫植物表达的杀虫蛋白。本实验采用室内生测的方法评价了转基因玉米双抗12-5花粉和Cry1Ab杀虫蛋白对意大利蜜蜂(Apis mellifera)的影响。结果显示,喂食转基因玉米花粉处理组的意大利蜜蜂体内能检测到Cry1Ab杀虫蛋白;与对照相比,饲喂转基因玉米花粉和8 μg·mL^-1纯化的Cry1Ab杀虫蛋白对意大利蜜蜂的存活率没有显著影响,吡虫啉处理组意大利蜜蜂存活率显著低于花粉和蔗糖处理组。以上结果表明,转基因玉米双抗12-5或Cry1Ab杀虫蛋白对意大利蜜蜂的风险较小。