应用PCR技术检测猪伤寒沙门氏菌

运用聚合酶链式反应(PCR)技术检测猪伤寒沙门氏菌,对从病猪的血液中分离培养的伤寒沙门氏菌进行检测,均能检出阳性,试验说明PCR技术对检测猪伤寒沙门氏菌具有特异性高、灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测猪伤寒沙门氏菌的需要。     

半套式RT-PCR法检测腹泻延边黄牛血液伤寒沙门氏菌试验

为建立一种快速、特异性和实用性强、灵敏度高的沙门氏菌检测方法,参考GeneBank中登录号为U25631的沙门氏菌基因序列.设计并合成引物,组成半套式RT-PCR,扩增片段为581bp.应用该半套式RT-PCR对标准菌株伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌和结核杆菌及临床伤寒分离出的沙门氏菌H1、H2株进行检测.并对延边地区牧场的产生-临床腹泻的延边黄牛血液中分离培养的不同菌株进行检测.结果表明,仪伤寒沙门氏菌标准株和临床一株样品在581bp处扩增出了特异的片段;该方法检测灵敏度为1 fg 核酸,且重复性好.说明此半套式RT-PCR法可以准确、灵敏、快速地检测出腹泻延边黄牛血液中的伤寒沙门氏菌.     

禽沙门氏菌病的流行特点及防控措施

正禽沙门氏菌病是由肠杆菌科沙门氏菌属中的一种或多种沙门氏菌引起的禽类疾病的总称。沙门氏菌有2000多个血清型,它们广泛存在于人和多种动物的肠道内。在自然界中,家禽是最主要的贮存宿主。该菌根据细菌抗原结构的不同可分为三类:鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒。鸡白痢和禽伤寒沙门氏菌有宿主特异性,主要引起鸡和火鸡发病,而禽副伤寒沙门氏菌则能广泛感染多种动物和人。     

4种血清型沙门氏菌多重PCR检测方法建立及应用

为检测鉴别鸡白痢、肠炎、鼠伤寒、伤寒4种养禽业中常见的沙门氏菌血清型,利用每种血清型的特异基因位点,建立多重PCR(polymerase chain reaction)检测方法,并通过试验对多重PCR法的特异性、灵敏度进行验证.结果显示,所建立的检测方法特异性强,与非沙门氏菌无交叉反应,灵敏度高.鸡白痢沙门氏菌的最低检测限度13.1 pg/mL,肠炎沙门氏菌最低检测限度达12.5 pg/mL,鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的最低检测限度13.7 pg/mL,伤寒沙门氏菌最低检测限度12.3 pg/mL.结果表明,此方法准确可靠、特异性强、灵敏度高,有望成为以后检测沙门氏菌的有效工具.     

抗沙门氏菌鞭毛抗原H_a、H_b、H_d单克隆抗体的研制

目前,沙门氏菌检验采用传统的分离培养方法,所需时间长,消耗试剂多,不适合在现场对大量样品作检验。而用作鉴定沙门氏菌的常规O、H血清国内又不能保证供应。前不久,我们研究了抗沙门氏菌A-F群主要O抗原的单克隆抗体(单抗)及其在沙门氏菌鉴定和沙门氏菌病诊断中的应用,取得了满意结果。但H抗原单抗国内外尚未见报道。我们应用淋巴细胞杂交瘤技术,以甲型副伤寒、乙型副伤寒,伤寒和加明那拉沙门氏菌为色疫原     

家畜常见的沙门氏菌简介

沙门氏菌属致病能力强,感染动物后常导致严重的疾病。阐述了沙门氏菌的生理特点及致病性类型,并介绍了常见的家畜沙门氏菌,包括鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、马流产沙门氏菌、牛病沙门氏菌等。     

蛋鸡群沙门氏菌的监测

[目的]了解蛋鸡场沙门氏菌的感染情况。[方法]采用沙门氏菌抗原和抗体检测方法对2012~2015年采集的广东省蛋鸡场样品进行检测。采用ELISA方法对1784血清样品进行了肠炎沙门氏菌和1 387份血清样品进行了鼠伤寒沙门氏菌抗体检测;采用凝集试验方法对1 391份血清样品进行了鸡白痢沙门氏菌抗体检测;采用细菌培养、PCR方法对采自广东省的活鸡/死鸡、环境拭子等1 458份样品进行了沙门氏菌检测。[结果]肠炎、鼠伤寒、鸡白痢3种血清型沙门氏菌抗体的阳性率分别为16.70%、10.09%和1.01%;沙门氏菌抗原检测的阳性率为1.65%。[结论]蛋鸡群中存在肠炎、鼠伤寒、鸡白痢等3种沙门氏菌不同程度的感染,但是蛋鸡群的总体感染率不高。     

以亚甲基蓝为杂交指示剂的电化学适配体鼠伤寒沙门氏菌传感技术

【目的】构建一种更具实用性的可定量检测鼠伤寒沙门氏菌的新型电化学适配体传感器,克服传统沙门氏菌检测方法在时效性、灵敏度和操作简便性等方面的不足。【方法】将反应制得的氧化石墨烯（GO）滴涂在玻碳电极（GCE）表面,于PBS缓冲液中采用电化学还原法将其还原为还原氧化石墨烯（rGO）,随后放置电极于氯金酸溶液中进行电沉积,于表面修饰一层纳米金（AuNPs）。依靠金硫键的作用将鼠伤寒沙门氏菌适配体互补链（S）固定在电极上,滴加封闭剂巯基己醇（MCH）占据电极表面空余位点,保证电极无非特异性吸附后,再将鼠伤寒沙门氏菌适配体（Apt）滴涂于电极表面,使S与Apt杂交形成DNA双链结构。将电极于37℃下同鼠伤寒沙门氏菌与核酸外切酶I（Exo I）的混合液孵育,依靠鼠伤寒沙门氏菌与Apt高度特异性结合,将Apt从电极表面带离,再基于Exo I对单链DNA的剪切作用,使鼠伤寒沙门氏菌得以循环重复作用于适配体,再将电极浸入亚甲基蓝（MB）溶液一段时间后,通过监测电极表面的电信号,并对其在菌液中的孵育时间及Exo I的浓度进行优化,构建检测鼠伤寒沙门氏菌的新型电化学适配体传感器。使用构建的传感器对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单增李斯特菌以及副溶血弧菌进行检测,以确定该传感器的特异性;对2×10²-2×10⁷ cfu/mL的鼠伤寒沙门氏菌进行检测,以确定该传感器的敏感性;对猪肉样品进行鼠伤寒沙门氏菌的定量检测,以确定该传感器的实用性。【结果】所构建的鼠伤寒沙门氏菌电化学适配体传感器在菌液中的最适孵育时间为40 min,Exo I的最适浓度为0.8 U·µL^-1。特异性试验结果表明,该传感器仅在鼠伤寒沙门氏菌存在时有电信号响应,而对非目标菌无响应。敏感性试验结果表明,该传感器具有很高的敏感性,对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性可达67 cfu/mL。使用构建的鼠伤寒沙门氏菌电化学适配体传感器对猪肉中的鼠伤寒沙门氏菌进行定量检测,加标回收率在97.3%-106.7%。【结论】所构建的新型鼠伤寒沙门氏菌电化学适配体传感器具备灵敏度高、特异性强、易于操作、检测迅速及成本低廉等优点,有望应用于食品工业中鼠伤寒沙门氏菌的现场快速定量检测。     

定量PCR快速检测动物食品中沙门菌污染

沙门氏菌是动物性食品中的重要食源性致病菌,建立其快速检测方法对动物性食品的质量控制具有重要作用.根据沙门氏菌16srDNA、dT fermentation等基因或DNA功能区序列设计PCR引物,通过比较3种不同的基因组DNA提取方法,提取待检样品总DNA,进行多基因定量PCR检测.结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在动物食品中的检测灵敏度可达10 cfu/g,整个检测时间在10h以内.说明该方法对检测动物中沙门氏菌具有特异性高且灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测动物中沙门氏菌的需要.     

具毒性质粒沙门氏菌的快速检测

针对沙门氏菌毒性质粒spvR基因设计PCR引物,检测具有毒性质粒的沙门氏菌.6株常见具有毒性质粒的沙门氏菌均获得特异性扩增,11株常见的无毒性质粒的沙门氏菌均未获得特异性扩增,5株非沙门氏菌检测结果均为阴性.结果表明,所设计引物具有高度特异性,适用于具毒性质粒沙门氏菌的快速检测.     

吖啶橙免疫荧光菌团培养浓集法快速检出鸡白痢和禽伤寒沙门氏菌的研究

本文报告经作者实验研究提出的吖啶橙免疫荧光菌团培养浓集法(AOIFBC法)用于人工感染雏肠内容物中S.P和S.g检出的结果:从109例感染雏中分离S.p.,并与常规分离培养对照。本法阳性率31.2％,漏检率3.7％;常规法阳性率17.4％,漏检率17.4％,二者阳性率差异显著(P<0.05),漏检率差异非常显著(P<0.01)离心沉淀物荧光菌团检查与沉淀物分离培养验证结果比较,二者符合率85.3％。从92例感染雏中分离S.g.,与常规分离培养对照。本法阳性率26.1％,漏检率2.2％;常规法阳性率19.6％,漏检率8.7％,二者阳性率和漏检率差异不显著(P>0.05)。离心沉淀物荧光菌团检查与沉淀物分离验证结果比较,二者符合率90.2％。     

吖啶橙简易免疫荧光术用于快速检出鸡白痢和禽伤寒沙门氏菌的方法研究

本文提出一种快速检出S.p.和S.g.的简易方法——吖啶橙免疫荧光菌团培养浓集法(AOIFBC法)。此法将吖啶橙高倍稀释后与少量沙门氏菌0:9单因子血清混合,配制成吖啶橙荧光抗体(AOFA),然后取少量加入经4小时增菌的液体标本中,再孵育1—4小时,可使与抗体结合的S.p.或S.g.凝集繁殖成亮绿色荧光菌团,低速离心沉淀后,在低倍荧光镜下容易检出。荧光菌团可取出培养进一步验证。试验表明,此法敏感度比无吖啶橙的显微沉淀凝集试验和玻片凝集试验分别高100倍和2500—5000倍。作AOIFBC法检查,特异性强:与鼠伤寒沙门氏菌等七种常见细菌无交叉荧光菌团形成;敏感度高:每毫升含S.p.活菌84×10~2个和S.g.活菌76×10~1个以上,可呈“++”→“++++”荧光菌团。本法对雏鸡粪液模拟标本检测,获得肯定的阳性结果。     

浓缩苹果汁中3种污染菌多重PCR检测方法的建立

根据大肠杆菌的β葡糖醛酸酶基因(uid)、沙门氏菌侵袭性抗原保守基因(invA)和金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc),分别设计3对特异性引物,通过对单管多重PCR扩增的特异性、敏感性以及扩增条件进行优化.结果表明:3对引物分别能扩增出147bp、570bp和280bp的特异性条带,反应条件优化后,3种目的菌在104 CFU/mL时均可同时扩增出较清晰条带(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在103 CFU/ml浓度下仍然可见到条带),仅沙门氏菌的检测比单基因PCR低一个稀释度,人工模拟果汁污染试验结果稳定.该方法操作简单、快速、特异性强,灵敏度高,能够实现对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌3种菌的快速诊断检测和生产过程监控.     

Salmonella pathogenesis and processing of secreted effectors by caspase-3

The enteric pathogen Salmonella enterica serovar Typhimurium causes food poisoning resulting in gastroenteritis. The S. Typhimurium effector Salmonella invasion protein A (SipA) promotes gastroenteritis by functional motifs that trigger either mechanisms of inflammation or bacterial entry. During infection of intestinal epithelial cells, SipA was found to be responsible for the early activation of caspase-3, an enzyme that is required for SipA cleavage at a specific recognition motif that divided the protein into its two functional domains and activated SipA in a manner necessary for pathogenicity. Other caspase-3 cleavage sites identified in S. Typhimurium appeared to be restricted to secreted effector proteins, which indicates that this may be a general strategy used by this pathogen for processing of its secreted effectors.     

肠炎沙门氏菌特异性诊断方法的建立

用传统的分离鉴定方法从临床采集的12例不同蛋鸡样本中分离到1株肠炎沙门氏菌。为避免传统鉴定技术中可能出现的假阳性等问题,依据SEF 14菌毛是肠炎沙门氏菌的特异性粘附素这一特性,设计编码该粘附素基因中相对保守片段的1对引物,对上述可疑菌株进行PCR扩增,以含有编码SEF 14菌毛操纵子全基因的质粒DNA、标准株SD-2染色体DNA作为阳性对照,鸡白痢国内分离株SP染色体DNA作为阴性对照。PCR扩增结果显示分离株出现1条与预期大小498 bp一致的特异性扩增条带,阳性对照也出现相同大小的条带,而阴性对照则未出现。结合传统的细菌学分离鉴定和特定的分子生物学鉴定,将此可疑分离株确定为肠炎沙门氏菌。该方法可快速、准确、敏感地检测肠炎沙门氏菌。     

沙门氏菌invH基因的序列分析与分子检测

根据沙门氏菌的invH基因序列设计1对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门氏菌标准菌株和5种非沙门氏菌株进行PCR扩增,结果3种标准沙门氏菌株均扩增出479 bp的特异条带,非沙门氏菌皆无特异带扩增。对3种标准株的扩增片段进行克隆及序列分析,证实沙门氏菌的invH基因序列比较保守;对19种地方分离沙门氏菌进行PCR特异性检测,结果有16株扩出特异性条带,表明本研究建立的沙门氏菌检测方法具有较高的特异性。     

检测鸡蛋中沙门氏菌的LAMP方法的建立及初步应用

根据GenBank上公布的沙门氏菌invA基因序列中的保守区域,设计一套环介导等温扩增(LAMP)引物,将其用于沙门氏菌的检测,结果成功地扩增出特异性的梯形条带。LAMP方法检测沙门氏菌纯培养的灵敏度为1.04×102 cfu.mL-1,对11株不同细菌进行LAMP检测,仅沙门氏菌获得阳性结果。应用该方法对扬州市场上销售的鸡蛋进行沙门氏菌检测,检测结果与传统培养方法相符合。因此,LAMP方法检测沙门氏菌具有灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便等特点,有望发展成为快速检测鸡蛋中沙门氏菌的有效手段。     

海芦笋黄酮化合物抑菌效果研究

研究海芦笋黄酮化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌的体外抑制效果。结果表明,海芦笋黄酮化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌的抑制效果良好,而抑菌效果为：大肠杆菌〈沙门氏菌〈枯草芽孢杆菌〈副溶血弧菌〈金黄色葡萄球菌。