中华绒螯蟹部分基因组文库构建和微卫星位点的筛选

利用磁珠富集和放射性杂交相结合构建了中华绒螯蟹基因组微卫星文库.并利用生物素标记的(GA)12探针进行微卫星片段的富集.将得到的片段与pGEM-T载体连接后转入DHSα大肠杆菌中,然后利用γ-32P同位素标记的(GA)12:探针进行第二次筛选.结果共获得微卫星基因组文库1 500个菌,杂交前菌落PCR检测阳性克隆率为62.5%;杂交后得到的阳性克隆为447个,占29.8%.经测序,有248个克隆含有重复次数大于5次的微卫星序列.在得到的微卫星序列中,重复单元除GA/CT外,还观察到三碱基、四碱基重复单元.根据侧翼序列没计引物164对,选择合成50对,通过优化PCR反应条件,结果有21对引物可扩增出清晰可重复的目的条带,15对具有多态性.本研究对中华绒螯蟹基因组资源的开发利用提供了相关资料.     

“光合1号”中华绒螯蟹微卫星富集文库的构建与多态性标记的筛选

采用磁珠富集法(Fast isolation by AFLP sequences containing repeats,FIASCO)构建"光合1号"新品种中华绒螯蟹Eriocheir sinensis基因组微卫星文库。用PCR法对225个单菌落进行鉴定,共获得168个阳性克隆,测序发现有94个含有微卫星座位,其准确率为55.95%,其中单元重复次数为5～10的序列占34.04%,重复次数为10～20的序列占20.21%,重复次数大于20的序列占45.75%,重复次数最高达到92次;完美型微卫星座位69个(占73.40%),非完美型微卫星座位17个(占18.09%),混合型微卫星座位8个(占8.51%);根据微卫星侧翼序列设计并合成53对引物,检测结果显示,有31对(占58.50%)引物能够扩增出特异性条带;选择其中14对多态性良好的引物用于中华绒螯蟹辽河野生群体的遗传多样性分析,共检测到148个等位基因,单个位点等位基因数为7～13个,平均为10.6个,观测杂合度为0.214 3～0.666 7,期望杂合度为0.825 4～0.910 1,多态性信息含量为0.766 3～0.865 4。     

长江上游特有鱼类红唇薄鳅微卫星DNA分离及序列特征分析

为筛选出特异性高的红唇薄鳅微卫星位点,采用生物素探针(AC)13杂交和FIASCO磁珠富集法从红唇薄鳅基因组DNA中分离出一批微卫星序列,并对其序列特征进行分析。结果显示,157个单克隆中,阳性克隆为131个,阳性克隆率为83.44%。排除重复序列后,共得到69条重复类型和重复次数不同微卫星序列,阳性富集率为52.67%。在这些微卫星序列中,共检测到110个微卫星位点,其中90个二碱基重复微卫星位点,14个四碱基重复微卫星位点,6个五碱基重复微卫星位点。二碱基重复中,以AC/TG重复最为丰富(73个位点),四碱基重复中,AAAG重复数目最多(6个位点),只发现了1种五碱基重复TCTTC(6个位点)。微卫星重复次数在6~10次之间最多(65.45%),20次以上的较少(0.91%)。二碱基重复微卫星的变异系数最大(36.52%),四碱基重复类型的变异系数最小(26.75%)。红唇薄鳅微卫星以完美型为主(63.64%),复合型次之(23.63%),非完美型最少(12.73%)。筛选出的这些微卫星位点将对红唇薄鳅及近缘种微卫星分子标记开发和应用提供依据。     

短毛切梢小蠹微卫星富集文库的构建与分析

采用生物素-磁珠富集法,构建短毛切梢小蠹微卫星富集文库。在该文库中随机挑选100个克隆作测序分析,结果表明：具微卫星位点的克隆占91％;具有10次以上碱基重复次数的微卫星序列占36％,其中最高碱基重复次数为63次;在这些微卫星序列中,完美型占47．3％,非完美型占24．2％,混合型占16．5％。表明获得的微卫星文库是高质量的文库,完美型的比例高于不完美型和混合型,与真核生物微卫星序列特征相符。     

大菱鲆微卫星标记的分离及其多态性位点检测

以生物素标记的（CA）12为探针进行杂交,借助磁珠筛选出含微卫星的Mbo I酶切片段,构建了大菱鲆Scophthalmus maximus微卫星富集文库,用同位素γ-^23P标记的探针（CA）12进行二次筛选,获得1600个阳性克隆,占59．3％。测序347个序列,得到335个（96．54％）含有微卫星序列的克隆,其中含有微卫星座位378个。完美型的微卫星序列有236个（62．4％）,非完美型的有121个（32．0％）,复合型的有21个（5．6％）,从所得序列中分离和鉴定了32对微卫星标记。利用31尾大菱鲆养殖个体评价微卫星位点,分析表明,10个位点具有多态性。不同位点等位基因数目为3～11不等,期望杂合度（He）和多态信息含量（PIC）变动范围分别为0．5061—0．8995和0．4133～0．8742。本研究中开发的微卫星多态性较高,将为大菱鲆养殖品系的优化、遗传多样性的检测及遗传图谱的构建等打下基础。     

不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹 DNA提取效果的比较研究

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量.结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃＞肌肉＞刚毛＞血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求.综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用.     

中华绒螯蟹表皮蛋白基因EsCAP的克隆与表达分析

以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)为试验对象,克隆中华绒螯蟹表皮蛋白CAP基因序列,分析其表达规律,为探索中华绒螯蟹蜕皮发生机理提供参考.运用生物信息学从中华绒螯蟹转录组数据中比对筛查表皮蛋白CAP基因序列信息,克隆扩增获得表皮蛋白CAP基因cDNA序列,运用RT-qPCR分析表皮蛋白CAP基因在不同组织、不同发育阶段和不同蜕皮时期的表达特征.结果表明,中华绒螯蟹表皮蛋白CAP基因cDNA序列全长380 bp,编码101个氨基酸,包括1个信号肽和1个R&R结合域.表皮蛋白基因CAP主要在蜕皮后期的表皮组织中表达,在蜕皮间期不表达;在不同发育阶段的仔蟹1期表达量最高,根据其发育表达模式推测表皮蛋白基因CAP参与表皮的形成和钙化,为后续深入研究表皮蛋白基因的生理功能奠定基础.     

刺参CT/AG微卫星标记的筛选

利用5’锚定引物PCT筛选刺参的CT/AG微卫星分子标记,测序的43个克隆子中,42条序列含有微卫星DNA序列,阳性克隆比率达到97.7%。去除重复序列后,共检测到56个微卫星位点,分布于26条序列中,其中25条序列检测到2个或2个以上微卫星位点。对所有筛选到的微卫星位点进行分类统计后表明,核心序列为（CT/AG）的有51个（91.1%）,5个位点为其他类型的重复。结果表明：刺参CT/AG微卫星标记在刺参基因组中含量较丰富,5’锚定引物法在筛选特定标记的同时,还筛选了其他类型的微卫星标记,具有较强的筛选效率。     

许氏平鲉微卫星标记的开发及评价

采用磁珠富集法筛选具多态性的许氏平鲉微卫星标记,并用一个野生群体对其多态性进行了评价。三引物PCR法筛选出58个阳性克隆进行了测序,共得到47个含微卫星核心的DNA序列,筛选出15对具有多态性的微卫星引物。所有位点上共得到66个等位基因片段,每个位点的观测等位基因数(A)为2~14个,平均等位基因数为4.4,观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)范围分别为0.062 5~0.968 8、0.061 5~0.929 1。每个位点的多态信息含量(PIC)显示,有6个位点表现出高度或中度多态。经Bonferroni校正后,HJ2-32、HJ4-27、HJ4-45和HJ4-47四个位点的等位基因频率显著偏离了Hardy-Weinberg平衡。连锁不平衡检测表明,各位点间无连锁不平衡现象。     

四个地方种群绒螯蟹形态差异的比较研究

选取合浦水系和绥芬河水系的日本绒螯蟹与长江水系和辽河水系的中华绒螯蟹4个绒螯蟹种群,以辽河水系绒螯蟹(♂)与绥芬河水系绒螯蟹(♀)杂交后代为辅助研究对象,对它们的17个外部形态特征分别进行聚类和判别分析。聚类分析结果显示,绥芬蟹、合浦蟹、辽河蟹和杂交蟹聚为一组,长江蟹为单独的一组。判别分析亦可将长江蟹与合浦蟹、辽河蟹、绥芬蟹和杂交蟹分开,雌蟹整体判别率为74.2%;雄蟹整体判别率为75.4%。中国大陆绒螯蟹在长期的进化过程中,受环境影响较大,对原产地环境的依赖性极强,从而形成了不同的地方种群,这些地方种群在生长性能方面具有极强的地域性。日本绒螯蟹和中华绒螯蟹能自然杂交、可育,两者间不存在生殖隔离。     

撒坝猪血液蛋白多态性研究

 采用蛋白电泳技术研究撒坝猪血液蛋白多态性。共分析了撒坝猪33个遗传位点,其中AKP,CAT,ES,G₆PD,PA,PHI,TF等7个位点检测到多态性。多态位点百分比P=0.2121,平均杂合度H=0.1027.结果表明撒坝猪的血液蛋白多态程度较高,反映在蛋白质水平上的遗传多样性较为丰富。     

Targeting of nonexpressed genes in embryonic stem cells via homologous recombination

Gene targeting via homologous recombination-mediated disruption in murine embryonic stem (ES) cells has been described for a number of different genes expressed in these cells; it has not been reported for any nonexpressed genes. Pluripotent stem cell lines were isolated with homologously recombined insertions at three different loci: c-fos, which is expressed at a low level in ES cells, and two genes, adipsin and adipocyte P2 (aP2), which are transcribed specifically in adipose cells and are not expressed at detectable levels in ES cells. The frequencies at which homologous recombination events occurred did not correlate with levels of expression of the targeted genes, but did occur at rates comparable to those previously reported for genes that are actively expressed in ES cells. Injection of successfully targeted cells into mouse blastocysts resulted in the formation of chimeric mice. These studies demonstrate the feasibility of altering genes in ES cells that are expressed in a tissue-specific manner in the mouse, in order to study their function at later developmental stages.     

高山雪鸡和藏雪鸡血清酯酶多态性的研究

[目的]为高山雪鸡和藏雪鸡的选育、保护和利用提供科学依据。[方法]应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对10只高山雪鸡和10只藏雪鸡血清酯酶同工酶多态性进行研究,与20只家鸡进行了比较。[结果]高山雪鸡、藏雪鸡和家鸡血清酯酶均存在ES1、ES2和ES3 3种同工酶,且ES3均为单态。高山雪鸡ES1同工酶以ES1 ABC为优势表型(70.00%),藏雪鸡和家鸡ES1同工酶均以ES1B为优势表型(80%和75%)。高山雪鸡ES2同工酶只有1条浓染的酶活性区带。藏雪鸡ES2同工酶则表现为有带(+)和无带(-)2种区带,而家鸡ES2同工酶无显现酶活性区带。[结论]高山雪鸡和藏雪鸡ES同工酶多态性存在较大差异,也表明ES同工酶的区带数、着染强度、迁移率、基因表型等可作为区分禽类亲缘关系的生化遗传标记。     

城市居住小区环境空间的景观特色和场所营造——以西安紫薇城市花园为例

对西安紫薇城市花园的环境空间进行了分析和探讨,提出了城市居住小区的环境空间应该满足居民的交往需求、营造场所空间的观点,并分析探讨了现代景观设计方法在小区环境景观设计中的运用。     

昆明小鼠ES细胞的分离培养及鉴定

[目的]摸索一种适合昆明小鼠ES细胞分离培养的方法,以提高昆明小鼠ES细胞的建系率。[方法]分别采用5种方法分离ICM和ES细胞集落,摸索了以BMSCs作为饲养层时,丝裂酶素处理的合适时间。[结果]连续消化法要明显好于其他4种方法。MMC处理BMSCs 1、1.5、2 h时效果较好,3个时间点无显著差异(P>0.05)。mMEF作为饲养层与BMSCs作为饲养层时获得5代ES细胞相比差异不显著(P>0.05)。[结论]连续消化法分离ES细胞效率较高,饲养层采用MMC处理1~2 h的BMSCs饲养层或常规mMEF饲养层对昆白小鼠ES细胞无明显影响。     

籽用西瓜种质资源对白粉病的抗性鉴定

为筛选出新疆昌吉地区优质的抗白粉病籽瓜资源采用室内苗期人工接种和田间自然发病对62份籽瓜材料进行了抗病性鉴定并对昌吉地区籽瓜白粉病生理小种进行鉴别,结果显示昌吉地区籽瓜白粉病病原菌是单囊壳（Sphaerotheca fuliginea）小种1,对62份种质抗病性鉴定未发现免疫和高抗娄型;抗病娄型有ES52、ES88、ES90等13份;中抗娄型有ES62、FS13、ES32等18份;感病娄型有ES55、ES46、ES19、ES40、ES53等31份.     

哺乳动物胚胎干细胞分离与培养的研究进展

从胚胎干细胞的来源、分离方法和饲养层细胞等方面,总结了胚胎干细胞分离与培养在近年来所取得的进展。     

高温热化法制备磷脂酰胆碱方法研究

[目的]用高温热化法来制备磷脂酰胆碱。[方法]将磷脂原料高温加热,使所有非胆碱磷脂降解,然后用丙酮处理磷脂原料热化物,沉淀出包含磷脂酰胆碱在内的丙酮不溶物(AI),接着用乙醇处理AI,离心分离,得墨黑色乙醇可溶物(ES)溶液,最后对ES溶液进行脱色,得磷脂酰胆碱产品,采用氧化铝层层析、活性炭多次吸附、氧化铝二次吸附、活性炭吸附结合氧化铝吸附几种方法对ES溶液进行脱色,并进行比较研究。[结果]结果表明:这几种脱色方法对产品的品质都有不同程度的改善,不同的脱色方法所得产品的PC有很大差别。[结论]氧化铝层层析法对ES溶液脱色效果最好,其产品的PC含量可达90%以上。     

Application of Pruning Algorithm on Voice Service Platform of Cow Disease Diagnosis Expert System

Expert System （ES） is considered effective and efficient in agricultural production, as agricultural informationization becomes a main trend in agricultural development. ES, however, is applied unsatisfactorily in most rural areas of China and it has considerably affected and restricted the development of the agricultural informationization. This paper proposed a solution to voice service system of ES, which was suitable for the information transmission, and it especially could help the peasants in remote regions obtain knowledge from ES through the voice service system. As for the disadvantages of massive knowledge data and slow deduction, in this system the classification method could be adopted based on the decision tree. Designing pruning algorithm to ＂trim off＂ the unrelated knowledge to the users in query course would simplify the structure of the decision tree and accelerate the speed of deduction before the inference engine deduced the knowledge required by users.     

曝气充氧对城市污染河道水体硝化过程的影响

[目的]研究曝气充氧对城市污染河道水体硝化过程的影响。[方法]通过室内模拟试验,研究不同曝气条件(水曝气EW、底泥曝气ES)对城市污染河道水体硝化过程的影响。[结果]对照组EC(无曝气措施)底泥硝化进程缓慢,2种曝气条件均促进了硝化过程启动,EW和ES组硝态氮的峰值分别是对照组的5.15和3.83倍;EW和ES组上覆水中均出现了NO2--N的累积现象,累积天数分别为10、14 d,峰值分别为11.41和7.41 mg/L;2组曝气工况硝化过程进程不一致,EW组亚硝酸盐氧化速率大于ES组;曝气停止后,反硝化过程明显,试验结束时EW和ES组上覆水中硝态氮浓度分别为1.26、2.82 mg/L。[结论]该研究为城市污染河道水体修复提供了理论参考。