人参茎叶总皂苷对腐皮镰刀菌的抑制作用及抑菌机理初探

采用HPLC法确定人参茎叶总皂苷中五种单体皂苷的含量;生长速率法测定人参茎叶总皂苷对腐皮镰刀菌菌丝生长抑制作用;载玻片萌发法测定人参茎叶总皂苷水溶液对腐皮镰刀菌孢子萌发的抑制作用;测定人参茎叶总皂苷处理前后的腐皮镰刀菌电导率变化情况,进一步确定细胞膜透性变化情况;考马斯亮蓝G-250比色法测定腐皮镰刀菌可溶性蛋白质含量的影响;紫外吸收法测定吸光率的变化速度确定菌体过氧化氢酶的活力。结果:人参茎叶总皂苷中人参皂苷Re、Rg1、Rf、Rd、Rb1的含量分别为1.62%,0.66%,0.10%,1.23%,0.36%;当人参茎叶总皂苷浓度为10mg/m L时,对腐皮镰刀菌菌丝生长抑制率为76.79%,EC50为3.5302mg/m L;对孢子萌发的抑制率达到81.65%,EC50为3.0377mg/m L;人参茎叶总皂苷能引起菌丝细胞膜透性的变化,导致液体培养基电导率增加;菌丝体可溶性蛋白含量升高和过氧化氢酶活性下降;菌丝变细且节间拉长,生长稀疏,菌丝体胞内物质外渗,内含物变少,阻碍腐皮镰刀菌菌丝的生长。     

细辛提取物对镰刀菌抑菌作用的初步分析

为了研究细辛对镰刀菌的抑制作用及机理,采用生长速率法和孢子萌发法测定了细辛对镰刀菌的抑菌作用,采用电导法研究了细辛对镰刀菌细胞膜的通透性影响。结果表明:细辛对镰刀菌菌丝生长和孢子萌发有很好的抑制作用,且菌丝比孢子对细辛提取物的敏感性更强。电导率测定结果表明,细辛提取物处理的镰刀菌的电导率值显著高于对照组,说明了细辛提取物可以破坏镰刀菌的细胞膜选择通透性,导致内容物外渗,细胞膜是细辛提取物的作用靶点之一。     

13种杀菌剂对冬小麦雪腐病菌的毒力测定

为筛选出有效的冬小麦雪腐病菌杀菌剂以指导小麦生产,以冬小麦感病材料337为试材,采用13种杀菌剂对冬小麦雪腐病菌的毒力进行研究。结果表明:13种药剂在系列浓度下对冬小麦雪腐病菌菌丝的生长及孢子的萌发均有不同程度的抑制作用,并对该病害具有一定的防治效果。50%腐霉利WP对冬小麦雪腐病菌的防治效果最佳,其EC50为2.88mg·L-1,菌丝抑制率达到85.48%,孢子萌发抑制率为65.4%,相对防效高达95.7%;12.5%腈菌唑EC的防治效果次之,EC50为4.62mg·L-1,孢子萌发抑制率为66.5%,相对防效为87.1%;50%多菌灵WP效果最差。     

不同腐解方式下棉秆腐解液对棉花枯、黄萎病菌的化感效应

采用自然腐解与接种微生物人工腐解两种方式分别处理棉秆,研究了两种腐解物水浸提液对棉花枯、黄萎病菌的化感效应。结果显示,两种腐解液对枯、黄萎病菌的菌丝生长及孢子萌发均具有较强的抑制作用,抑制强度整体上随着腐解液浓度的升高而增大。棉秆自然腐解液对枯、黄萎病菌菌丝生长的最大抑制率分别为58.17%、48.16%,对孢子萌发的最大抑制率分别为23.29%、16.22%,对枯、黄萎病菌毒力的有效中浓度(EC50)分别为33.20、45.20g·L-1;人工腐解液对枯、黄萎病菌菌丝生长的最高抑制率分别为71.63%、79.04%,对孢子萌发的最高抑制率分别为35.45%、42.74%,EC50分别为24.18、20.75g·L-1。表明棉秆腐解后具有作为植物源抑菌剂的开发潜力,并且采用人工方式腐解棉秆能有效提高腐解液对棉花枯、黄萎病菌的抑制强度。     

九种杀菌剂对刺五加苗木立枯病菌的室内毒力测定

利用菌丝生长速率法和孢子萌发抑制法,测定了9种杀菌剂对刺五加苗木立枯病菌的毒力,筛选出有效控制刺五加苗木立枯病的高效杀菌剂.结果表明:抑制菌丝生长试验,32.5％苯甲+醚菌酯的EC50用药量最小,其对立枯丝核菌和腐皮镰刀菌菌丝生长抑制作用的EC50值分别为0.016 5和0.024 7 mg·L-1,10％苯醚甲环唑次之;在抑制孢子萌发方面,32.5％苯甲+醚菌酯效果最好,对分生孢子萌发抑制的EC50值为0.048 1 mg·L-1,25％醚菌酯次之,与菌丝生长抑制作用结果一致.综合分析,32.5％苯甲+醚菌酯和10％苯醚甲环唑不但可以抑制菌丝生长,还可以有效抑制孢子萌发,同传统杀菌剂多菌灵、代森锰锌比较,苯醚甲环唑和醚菌酯等新型杀菌剂更具优势,可以作为防治刺五加立枯病的备选药剂.     

壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用

研究了壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用,分别测定在不同浓度梯度下灰霉病菌的菌落直径、产孢量、孢子萌发率,观察了壳寡糖对菌丝生长形态的影响。结果表明,壳寡糖的浓度越大对灰霉病菌的抑制作用越明显,1 500 mg/L的壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为100%,2 d为86.32%,5 d为81.95%,菌丝形态发生显著变化,菌丝直径明显增粗,菌隔增多,该浓度下对灰霉病菌的产孢抑制率达到83.82%,抑制孢子萌发率达52.97%。壳寡糖对灰霉病菌菌丝生长2 d的EC50为346.96 mg/L,对灰霉病菌产孢的EC50为521.96 mg/L,对孢子萌发的EC50为1 451.59 mg/L。     

植物内生放线菌Lj20发酵液萃取物对真菌作用＊机理的研究

【目的】明确植物内生放线菌Lj20发酵液萃取物对真菌的抑菌作用机理。【方法】观察100 mg/LLj20萃取物对灰葡萄孢菌菌丝形态的影响,测定0.02,0.2,2,20和200 mg/L Lj20萃取物对灰葡萄孢菌、拟盘多孢菌、弯孢霉和茄链格孢菌菌丝生长及孢子产生、萌发的影响,并测定200 mg/L Lj20萃取物对灰葡萄孢菌菌丝细胞膜的影响。【结果】用100 mg/L Lj20萃取物处理灰葡萄孢菌后菌丝量减少,菌丝体皱缩、断裂、原生质外渗,菌体细胞表面有许多瘤状畸形;Lj20萃取物对4种病原真菌的菌丝生长、孢子产生和萌发均有明显抑制作用,其中对灰葡萄孢菌的抑制作用最强,抑制菌丝生长的EC50为0.96 mg/L,抑制孢子萌发的EC50为8.33 mg/L,200 mg/L Lj20萃取物对其孢子产生的抑制率为89.4%;用200 mg/L Lj20萃取物处理后的灰葡萄孢菌培养液在260 nm处均出现1个吸收峰,而对照(10 g/L NaCl处理)无吸收峰出现。【结论】Lj20萃取物对4种供试病原菌的菌丝形态和生长、孢子产生和萌发均有抑制作用,对细胞膜透性也有明显影响。     

细辛精油对7种玉米病害的离体抑菌效果

采用生长速率法和孢子萌发法测定了细辛精油对引起玉米病害的7种病原菌(小斑病菌、弯孢霉叶斑病菌、链格孢叶斑病病菌、圆斑病菌、顶腐病菌、青枯病菌和瘤黑粉病菌)的菌丝生长和孢子萌发的影响。结果表明,对瘤黑粉病菌、顶腐病菌、青枯病菌和弯孢霉叶斑病病菌的菌丝生长和孢子萌发抑制效果均较好,EC90均低于700mg.L-1;对小斑病菌和链格孢叶斑病病菌的孢子萌发抑制效果较好,而对其菌丝生长的抑制效果较差;对圆斑病菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制效果均较差,EC90均高于900mg.L-1。对于同一种病原菌来说,细辛精油对其孢子萌发的抑制效果好于对其菌丝生长的抑制效果。     

苍耳提取物对番茄灰霉病菌抑制机理的研究

以番茄灰霉病菌为供试材料,对苍耳提取物的抑菌机理进行了研究.结果表明:苍耳提取物对番茄灰霉菌的菌丝生长、分生孢子的形成和萌发都具有较强的抑制作用,当处理浓度为30 mg/mL时,苍耳提取物对番茄灰霉菌菌丝生长的抑制率达78.1%,对分生孢子形成和萌发的抑制率分别为85.1%和77.4%.苍耳提取物能引起番茄灰霉菌菌丝细胞膜透性发生变化,造成菌丝体内含物的渗漏,从而导致液体培养基电导率增加.用苍耳提取物处理番茄灰霉病菌后,可使菌丝体可溶性蛋白含量下降.     

苗菌敌对茄子黄萎病菌的室内毒力测定

采用生长速率法测定结果表明:杀菌剂苗菌敌对茄黄萎病菌(Verticillium albo-atrum Reinke et Beinth)的4个分离菌株的菌丝生长具有较强的抑制作用。在药剂含量为0.001～0.500 mg/mL的PDA培养基上接菌72 h后,兰州枯死菌株菌丝生长的相对抑菌率为28.91 %～100 %,毒力回归式为Y=2.372 7+1.304 7x,EC50=0.010 32 mg/mL;兰州普通型菌株菌丝生长的相对抑制率为20.14 %～100 %,毒力回归式为Y=2.095 14+1.401 6x,EC50=0.011 82 mg/mL;天水分离菌株菌丝生长的相对抑制率为19.30 %～100 %,毒力回归式为Y=1.909 9+1.498 9x,EC50=0.011 52 mg/mL;白银分离菌株菌丝生长的相对抑制率为33.36 %～100 %,毒力回归式为Y=2.453 6+1.324x,EC50=0.008 364 mg/mL。相关分析表明,以上几种分离菌株的x值与Y值相关关系显著。用改良的涂布平板法测定,苗菌敌对茄黄萎病菌孢子萌发有明显的抑制作用,病菌孢子在浓度为0.001～0.500 mg/mL药液中处理48 h后,兰州枯死菌株、普通菌株、天水菌株、白银菌株的孢子萌发相对抑制率分别为0.45 %～86.08 %、2.23 %～91.10 %、1.20 %～91.38 %、0.78 %～93.37 %。4菌株初生菌丝生长的速度均随药液浓度的增大而降低,菌丝出现畸形扭曲,不能正常生长发育,影响分生孢子梗的分化。     

邻菲啰啉及其配合物对人参锈腐病菌的抑菌活性

采用生长速率法测定0.01 mol/L邻菲啰啉及其配合物对人参锈腐病菌室内抑菌活性的结果,对人参锈腐病菌均有抑菌活性,其中Phen、Pr-P-S、Nd-P-S的抑菌率最高,达到100%,说明这3种药剂对人参锈腐病菌菌丝生长具有很强的抑制作用;其次为Tb-P-S和Y-P-S,其抑菌率达到60%.选取抑菌效果好的Phen、Pr-P-S、Nd-P-S进行室内毒力试验,3种药剂抑制人参锈腐病菌菌丝生长和孢子萌发的EC50值均较小,说明这3种药剂在较低浓度下对人参锈腐病菌菌丝生长和孢子萌发具有很强的抑制活性.     

康宁霉素对臭椿苗期致病菌的离体抑菌活性

以引起臭椿苗期病害的4种致病菌腐皮镰刀菌(Fusarium soiani)、木贼镰刀菌(F.equiseti)、棒状拟盘多毛孢菌(Pestalopsis clavispora)和极细链格孢菌(Alernaria tenuissima)为靶标,以康宁霉素水溶剂为研究对象,以苯醚甲环唑、多菌灵、苦参碱和霜霉立克为阳性对照,采用生长速率法和孢子萌发法,研究康宁霉素对致病菌的菌丝生长和孢子萌发的影响。结果表明,康宁霉素对4种致病菌菌丝生长和孢子萌发均有抑制作用,药剂浓度越高,抑制效果越明显,且对致病菌孢子萌发的抑制效果优于对菌丝生长的抑制效果;其中康宁霉素对棒状拟盘多毛孢菌的菌丝生长和孢子萌发EC50最小,分别为32.97mg/L和47.99mg/L;虽然TKS的抑菌效果低于化学药剂多菌灵和生物制剂苦参碱,但优于霜霉立克,说明康宁霉素可用于防治由此4种病原菌引起的臭椿苗期病害。该研究为扩大康宁霉素的应用范围和臭椿苗期病害的生物防治提供了理论依据。     

浙江淡竹黑腐病的室内药剂筛选及毒力测定

采用生长速率法和悬滴法分别测定了14种常用杀菌剂对浙江淡竹黑腐病病原菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用,并筛选测定了其中7种杀菌剂对木贼镰刀菌的毒力。结果表明,各杀菌剂对菌丝生长和孢子萌发有不同程度的抑制作用,其中多菌灵、根腐宁、保鲜克、甲基托布津能很好地抑制菌丝生长,抑制率分别达98．33％、98．33％、94．31％、85．28％;而达科宁、仙生、根腐宁、甲基托布津、可杀得2000、佳爽、安克、保鲜克、多菌灵对孢子萌发有较强的抑制作用,抑制率均在90％以上。对菌丝生长与孢子萌发均有明显作用的杀菌剂为多菌灵、根腐宁、保鲜克和甲基托布津。毒力测定结果表明,保鲜克、根腐宁、多菌灵、世高、甲基托布滓、瑞苗清、可杀得2000对木贼镰刀菌的EC50分别为0．458、1．455、1．822、9．841、10．855、52．741、64．834mg／l。7种药剂的相关系数均在0．97以上,药剂浓度与抑制作用呈正相关。     

细辛精油和4种化学药剂对黄瓜灰霉病菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法及孢子萌发法分别测定了细辛精油和4种化学药剂(30%嘧霉胺BC、50%双福生WP、75%百菌清WP、70%正品甲津托 WP)对引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用.结果表明,供试药剂对灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有抑制作用,且对孢子萌发的抑制效果明显好于对菌丝生长的抑制效果;百菌清对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑菌效果最好,EC50为1.6231 mg/L;双福生对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制效果最好,EC50为0.0042 mg/L;细辛精油对黄瓜灰葡萄孢菌的抑菌效果与其他4种化学药剂相比效果较差,对菌丝生长的EC50为159.580 mg/L,对孢子萌发的EC50为71.1840 mg/L,虽然其EC50偏高,但作为纯植物提取物,其抑菌中浓度低于160 mg/L.     

1株An ctc y 1细菌分离物的鉴定及其对植物病原真菌的作用

以10种植物病原真菌为指示菌,从分离得到的541株细菌中筛选出1株拮抗细菌An-ctc-y-1,该分离物初步鉴定为芽孢杆菌属。其发酵滤液对病原菌丝体生长和孢子萌发均有较强的抑制作用。An-ctc-y-1菌株发酵滤液对稻瘟病菌和番茄灰霉病菌菌丝生长抑制效果最好,抑制率为90%以上,EC50分别为11.26和11.11 mL/L,对稻瘟病菌和番茄灰霉病菌孢子萌发的EC50分别为4.09和2.18 mL/L。经发酵滤液处理,病原菌菌丝末端膨大成球状、菌丝破裂、消解、菌丝体分枝增多。     

镰刀菌酸对水稻稻瘟病菌和稻曲病菌的抑制作用

为研发新型农用杀菌剂的活性物质,采用菌丝生长速率法和孢子萌发抑制法,测定镰刀菌酸对水稻稻瘟病菌和稻曲病菌的抑制作用。结果表明,镰刀菌酸对水稻稻瘟病菌和稻曲病菌具有较强的抑菌活性,其对病菌菌丝生长的EC50值分别为326.36、8.27mg·L~(-1),对孢子萌发的EC50值分别为40.17、222.93 mg·L~(-1)。此外,盆栽试验发现,在水稻破口期和齐穗期喷施400mg·L~(-1)镰刀菌酸,对稻瘟病的防治效果为66.72%;而在水稻破口前7d喷施400mg·L~(-1)镰刀菌酸,其对稻曲病的防治效果可达63.08%。     

玉米秸秆腐解液对假禾谷镰刀菌生理指标的影响

为明确玉米秸秆腐解产物对假禾谷镰刀菌的影响,采用生长速率法和涂布平板法分别测定玉米秸秆腐解液对假禾谷镰刀菌(Fusarium pseudograminearum)菌丝生长和孢子萌发的影响;采用DNS法测定腐解液对该菌多聚半乳糖醛酸酶(PG)和果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)活性;采用Hoffman法测定多聚半乳糖反式消除酶(PGTE)和果胶甲基反式消除酶(PMTE)活性.结果表明:玉米秸秆腐解0 d、7 d和14 d对菌丝生长和孢子萌发均表现低促高抑的作用,浓度高于0.062 5 g·DW/mL腐解液处理均表现抑制作用,且随腐解天数的增加抑制作用增强,两者抑制率最高分别达100％和93.7％.腐解液对假禾谷镰刀菌PMTE和PGTE活性均表现抑制作用,抑制率分别在1.2％～99.0％和6.6％～99.6％;腐解7 d和14 d、浓度低于0.062 5 g·DW/mL腐解液处理,PG活性在8.787～10.420 U/mg,与对照相比增幅在4.2％～22.2％;PMG活性在7.557～8.177 U/mg,与对照相比增幅在2.3％～10.7％.该研究揭示了秸秆还田条件下小麦茎基腐病重发的原因.     

10种杀菌剂对除虫菊根腐病菌的室内毒力测定

为筛选出防治除虫菊根腐病菌的有效药剂,采用菌丝生长速率法测定了10种杀菌剂对除虫菊根腐病菌的主要致病菌——镰刀菌GF4的室内抑菌效果。结果表明：供试的10种杀菌剂对镰刀菌GF4均有一定的抑制作用,其中,微生物杀菌剂100亿CFU/g枯草芽孢杆菌WP对镰刀菌GF4的室内毒力最强,EC50值为1.40E-06mg/L；其次是100万孢子/g寡雄腐霉菌剂,EC50值为0.0039mg/L；化学农药80%多菌灵也表现出较强的室内抑制效果,EC50值为51.6346mg/L。该研究筛选出了能有效抑制镰刀菌GF4菌丝生长的生物农药,用量少且毒性低,为除虫菊根腐病的田间防治提供基础研究。     

梨树根腐病病原菌的分离与鉴定及有效防控药剂筛选

[目的]为了明确黄河故道地区造成梨树根腐病的病原菌的种类,研究18种常用杀菌剂对该病原菌的抑制效果。[方法]通过对梨树根腐病发病根系样品病原菌的分离和单孢纯化,根据代表性菌株形态学观察、rDNA-ITS序列分析和致病性试验,进行病原菌的种类鉴定,对菌丝生长和孢子萌发有效抑制的化学药剂进行筛选,并对部分药剂进行田间防效试验。[结果]从发病根系样品中分离纯化得到4个菌株,经形态学和rDNA-ITS序列分析,鉴定为同一致病菌;结合致病性试验结果,确定该致病菌是腐皮镰刀菌(Nectria haematococca,无性态Fusarium solani)。化学药剂筛选结果表明:72%霜脲·锰锌、1.8%辛菌胺醋酸盐和80%代森锰锌对腐皮镰刀菌的菌丝生长及孢子萌发均有良好的抑制作用;虽然80%碱式硫酸铜、3%噻霉酮、75%百菌清抑制腐皮镰刀菌菌丝生长效果较差,但对其孢子萌发具有很强的抑制作用。毒力测定与田间试验结果显示:腐皮镰刀菌对4种药剂的敏感性存在差异,95%吡唑醚菌酯和80%代森锰锌对菌丝生长的毒力最强,72%霜脲·锰锌的毒力居中,1.8%辛菌胺醋酸盐的毒力最差;72%霜脲·锰锌、1.8%辛菌胺醋酸盐和80%代森锰锌田间实际防效比95%吡唑醚菌酯好。[结论]黄河故道地区梨树根腐病由腐皮镰刀菌(Nectria haematococca,无性态Fusarium solani)引起;室内测定和田间试验结果显示,72%霜脲·锰锌、80%代森锰锌或1.8%辛菌胺醋酸盐对梨树根腐病均具有较好的防治效果。     

问荆活性物质的提取及对番茄灰霉病菌的抑制作用

通过活性物质跟踪的方法,研究了问荆中的活性成分对番茄灰霉病菌的抑菌活性,结果表明:3种溶剂提取物中,氯仿提取物对番茄灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制率最高,EC50分别为0.52和0.21mg/mL;对氯仿提取物萃取分离得到的4种不同溶剂萃取物中,乙酸乙酯组分对灰霉病菌菌丝和孢子萌发的抑制效果最佳,EC50分别为0.37和0.28mg/mL;经柱层析分离得到的12个流分中,L9流分的抑制菌丝生长作用最强,EC50为0.22mg/mL,L9流分处理灰霉病菌后发现菌丝生长稀疏,菌体细胞膜渗透性增大,电镜图片显示菌丝变形,有瘤状突起。因此,问荆提取物对灰霉病菌具有很强的抑制效果,为新型植物源农药的开发提供了一定基础。