山羊胚胎质量与胚胎移植妊娠率关系

本试验用子宫角回收法采集波尔山羊胚胎,对胚胎质量与受体移植妊娠率的关系进行分析。结果表明,胚胎质量是影响胚胎移植成功率的主要因素,妊娠率随胚胎等级降低而下降。移植单胚,A级胚胎妊娠率达71.0%,B级为65.8%,而C级仅为29.2%。     

体细胞克隆牛生产效率的影响因素

体细胞克隆牛生产效率受实验室环节和胚胎移植环节等多种因素的影响。依据前期试验结果,重点分析了胚胎移植数量、季节变化和胚胎移植受体牛生理状态等因素对体细胞克隆牛生产效率的影响。结果表明:移植2枚胚胎比移植1枚胚胎和3枚胚胎能获得较高的妊娠率和产犊率及较低的流产率;在春、夏和秋季(5~9月)进行胚胎移植的效果显著优于冬季(12~1月);A、B级黄体受体牛的妊娠率显著高于C级黄体受体牛的妊娠率。胚胎移植数量、移植季节和受体牛生理状况均能显著影响克隆牛的生产效率。     

杜泊羊冷冻胚胎移植的影响因素

为进一步提高杜泊羊的冻胚移植成功率,于春秋两季同期处理湖羊和小尾寒羊受体共997只(次),同期发情782只(次),发情率达78.4%,其中湖羊春秋两季平均发情率为84.6%,显著高于小尾寒羊(73.9%)(P＜0.01),秋季两品种平均发情率83.3%,显著高于春季75.8%(P＜0.01);对431只发情受体羊进行移植,总妊娠率为58.5%(252/431),产羔率为58.0%(250/431).其中湖羊为受体的春秋两季平均妊娠率62.5%,高于小尾寒羊(54.7%);秋季两品种的平均妊娠率为64.8%,显著高于春季(52.5%).囊胚移植后的平均妊娠率为61.5%,显著高于桑椹胚(41.5%),其中A级囊胚为67.4%,显著高于B级囊胚(P＜0.05)和所有桑椹胚(P＜0.01);B级囊胚显著高于B级桑椹胚(P＜0.05),B级囊胚与A级桑椹胚间及A、B级桑椹胚间均无显著差异;C级囊胚和桑椹胚均未见妊娠.此外,受体羊卵巢黄体发育状况及移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响.     

波尔山羊批量胚胎移植莎能奶山羊

采用阴道栓 FSH超数排卵,经产供体波尔山羊22只,在放栓后第9～11天,连续4d递减量肌肉注射FSH。22只供体羊发情与纯种波尔山羊种公羊配种后第7天,手术回收输卵管中早期发育胚胎再经手术移入同期发情的受体奶山羊输卵管内妊娠产仔。结果表明:1获得373枚早期胚胎,其中A级胚胎占31.1%(85/273),B级胚胎占49.5%(135/273),异常胚胎占19.4%(53/273)。2将167枚7日龄可用胚胎(A级和B级)移植147只受体羊输卵管内,移植后35d,妊娠98只,妊娠率为67%(98/147),83只羊足月产羔为89只,产羔率为85%(89/98),20只受体移植了两枚胚胎,只有6只产双羔。3羔羊出生重平均为3.7±0.54kg。每只供体羊平均产羔4.05只。胚胎移植所得羔羊的初生重与自然繁殖波尔羔羊无显著差异(P>0.05)。试验证明,山羊胚胎移植计划可使良种群体繁殖率提高3～5倍,优秀个体繁殖力提高6～8倍,从而加快纯种山羊的繁殖。     

鲁西黄牛超数排卵与冻胚移植

1990～1991年按鲁西黄牛超排技术程序,用 FSH+PGF_(2α)对11头鲁西黄牛进行超排处理,有效率为100%。共获卵119枚,其中可用胚92枚,胚胎可用率为77.3%。按鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序,以甘油作冷冻保护剂,对 A、B 级胚胎进行常规冷冻。解冻33枚,27枚可用,解冻恢复率为81.8%。将23枚可用胚移植23头受体,90天妊检,13头妊娠,妊娠率为56.5%。     

无角道塞特羊胚胎移植技术研究

(1)超排处理无角道塞特绵羊163只,育成羊(76只)只均回收胚胎5.53枚,可用胚3.91枚,经产母羊(87只)只均回收胚胎7.55枚,可用胚6.34枚。经产羊平均回收胚胎总数高于育成羊(P<0.05)。春季和秋季之间超排效果差异不明显。重复超排羊和非重复超排羊之间平均回收胚胎总数和可用胚胎数差异均不显著(P>0.05)。(2)共处理受体876只,春季和秋季受体的同期发情率分别为56.37%和89.02%,发情受体利用率分别为84.67%和88.77%。(3)移植受体545只,妊娠318只,产羔396只,受体移植妊娠率为58.35%,移植胚胎成羔率为57.47%,在移植受体中,小尾寒羊的妊娠率最高为61.2%,同羊和内蒙细毛羊分别为54.62%和56.58%,受体品种之间移植妊娠率差异不显著(P>0.05)。受体黄体数对移植妊娠率及胚胎成羔率有一定的影响。胚胎的发育阶段对移植妊娠率也有影响,移植囊胚受体妊娠率最高为64.76%,明显高于早期桑椹胚移植妊娠率42.86%(P<0.05)。胚胎成羔率从桑椹胚到囊胚差异不显著(P>0.05)。     

影响杜泊绵羊胚胎移植效果的因素分析

系统探讨了在生产条件下杜泊绵羊移植胚胎数量、胚胎发育阶段、受体重复利用、卵巢黄体数量、季节和移植方法对胚胎移植效果的影响.结果表明:移植2枚或3枚胚胎的妊娠率(63.79%、61.90%)显著高于移植1枚胚胎的妊娠率(50.30%)(P<0.05);2～8细胞胚胎的移植妊娠率与桑椹胚/囊胚移植妊娠率差异不显著(P>0.05);受体重复利用对妊娠率无显著影响(P>0.05);受体单侧卵巢上有3个及以上黄体数妊娠率最高,但与单侧卵巢上有1个和2个黄体的妊娠率无显著性差异(P>0.05);在秋季进行胚胎移植,妊娠率为59.77%,高于冬季移植的妊娠率(52.94%),但差异不显著(P>0.05);常规手术法与腹腔内窥镜法移植相比,妊娠率无显著差异(P>0.05).     

受体牛黄体位置及黄体等级对胚胎移植效果的影响

为探索黄体等级和黄体位置对胚胎移植后受体牛妊娠率的影响,便于在应用中准确判断受体牛是否可以进行移植,整理、统计分析了137头移植受体牛的记录资料,结果表明:"2次PG"法和"CIDR PG"法处理受体牛,对形成黄体的等级没有影响;同期发情处理后,受体牛A、B、C级黄体的移植妊娠率分别为47.37%、42.86%和48.34%,黄体等级之间无明显差异(p>0.05);左、右侧黄体的妊娠率分别为43.63%和47.56%,移植时黄体存在的位置与移植妊娠率没有明显差异(p>0.05)。     

体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究

[目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞(GFF)和乳腺上皮细胞(GMGE)移植到MII期去核卵母细胞内,经电融合、激活、体外培养后,2~8细胞期克隆胚被移植到同期发情山羊的输卵管内,囊胚被移植到子宫角内。[结果]GFF与GMGE的妊娠率相近(输卵管移植妊娠率分别为26.47%及20.00%);在GFF,输卵管移植的妊娠率与子宫角内移植妊娠率接近(分别为26.47%及25.00%),输卵管移植胚胎平均数为21.2组的妊娠率显著高于5.93组和9.64组(40.00%及26.67%,21.43%)。[结论]供体细胞类型、移植胚胎的发育阶段及移植部位对山羊转基因克隆效率的影响不大,但对于输卵管移植,受体羊移植胚胎数量对妊娠率有明显的影响。此外,该研究还提示了利用成年羊乳腺上皮细胞制作转基因动物的可行性。     

奶牛胚胎分割移植试验研究

用简单方法直接分割7～8日龄新鲜胚胎(一分为二),裸半胚成对移植给66头受体,90d 妊检,移植妊娠率为56.1%(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6%(9/26),半胚产犊率为29.2%(35/110)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的因素如胚胎质量、胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、黄体状况、受体牛品种等进行了较系统的研究。此外对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5%(5/11),产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0%(1/4)和57.4%(4/7)。     

南德温牛胚胎移植研究

为了研究适于大型肉牛———南德温牛的超数排卵及胚胎移植技术,选择11头适龄南德温牛为供体牛和9头南阳牛为受体牛,进行CIDR-FSH-PG超数排卵和胚胎移植试验。结果表明,供体牛均按时发情,反应率100%,共采胚99枚,获可用胚胎65枚,平均每头5.91枚,可用胚胎率65.0%,可用胚胎等级A、B、C级分别为38.5%、30.8%、30.7%,共移植受体9头,妊娠6头,受胎率66.67%,共产犊9头,其中产双犊3头,其余胚胎进行了冷冻保存。     

以鲁西黄牛为受体的高产奶牛胚胎移植研究

以自然发情的鲁西黄牛为受体,移植经性控技术生产的高产奶牛7日龄雌性冷冻胚胎,共移植合格受体牛5 516头,移植后60～80d进行直肠孕检,怀孕2 228头,移植准胎率为40.39％;共繁殖奶牛犊牛1346头,其中母牛1 279头,公牛67头,胚胎性别控制率为95.02％.左侧与右侧卵巢排卵移植准胎率分别为35.14％和43.15％,差异极显著(P＜0.01);春季与秋季的移植准胎率分别为36.93％和43.53％,秋季明显高于春季,差异极显著(P＜0.01);黄牛不同黄体级别A级、B级、C级的准胎率分别为39.16％、41.70％和33.42％,A级与B级移植准胎率差异不显著(P＞0.05),B级与C级移植准胎率差异极显著(P＜0.01);移植单胚与双胚的受体牛准胎率分别为40.73％和38.24％,差异不显著(P＞0.05).     

肉羊胚胎移植成活的影响因素实例分析

【目的】胚胎移植技术是获得优秀种质资源的一种重要应用技术,研究影响胚胎存活和妊娠的因素。【方法】回顾性调查分析影响胚胎移植后成活的胚胎和受体因素。【结果】三种胚胎运输方式的妊娠率极显著低于就近移植的妊娠率(P0.01);胚胎卵裂期与囊胚期移植妊娠率差异不显著(P0.05),但以2细胞移植的妊娠率最低;鲜胚与冻胚的妊娠率差异不显著(P0.05),2枚胚胎的妊娠率高于1枚胚胎的妊娠率,胚胎妊娠率随着胚胎质量而下降;囊胚与受体同期性差-24 h,妊娠率差异不显著(P0.05);放牧与舍饲的受体羊在胚胎妊娠率方面没有显著差异性(P0.05)。【结论】胚胎和受体因素对胚胎发生成功妊娠具有重要的影响。     

绵羊半胚移植的研究

本试验用含5％灭活羊血清的PBS为冲卵液,冲出绵羊胚胎,选择质量好的晚期桑椹胚和囊胚,保存在含20％灭活羊血清的PBS中,然后在立体显微镜下,用胚胎简易分割法平均分割胚胎。共分割34枚绵羊胚胎,分割成功率为85.3％(58/68),其中A级胚胎的分割成功率为95.7％(44/46),B级胚胎的分割成功率为63.6％(14/22)。将29枚裸半胚,移植于10只受体绵羊子宫,结果6只妊娠,共产12只羊羔,其中两对为同卵双生羊羔,妊娠率达60％(6/10),半胚成活率达41.4％(12/29)。在10只受体中,各移4枚半胚的4只受体绵羊均妊娠,其中一只产3只羊羔。     

不同品种受体对波尔山羊胚胎移植效果的研究

将2127枚波尔山羊胚胎移植给1182只受体,移植单胚、双胚、3胚和4胚时的受体妊娠率分别为60.2%(171/ 284)、62.7 %(540/ 862)、64.0 %(16/ 25)和54.6 %(6/ 11),胚胎成羔率分别为60.2 %(171/ 284)、51.6 %(890/ 1724)、41.3 %(31/ 75)和36.4 %(16/ 44).各品种受体移植单胚时妊娠率和胚胎成羔率均无显著差异(P＞0.05),移植双胚的奶山羊受体胚胎成羔率显著高于成都麻羊和简阳大耳羊(P＜0.05),而南江黄羊低于奶山羊、高于成都麻羊和简阳大耳羊,但差异不显著(P＜0.05).受体羊卵巢上黄体数量对受体妊娠率和胚胎成羔率无明显影响,但随着黄体体积变小,胚胎成羔率逐渐下降.     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。     

中国美利奴(细毛型)胚胎冷冻移植试验

用澳大利亚进口FSH、LH、PMSG。氟孕酮阴道海棉栓等激素 ,进行胚胎移植、B超妊娠检查等技术 ,对中国美利奴 (细毛型 )母羊 45只进行超排处理。有效供体母羊 42只 ,有效率 93.33% (4 2 / 45 )。共计采得胚胎 35 6枚 ,平均每只供体母羊 8.48枚 (35 6 / 42 ) ,可用胚胎数 30 6枚 (A、B级 ) ,平均可用胚胎数 7.2 9枚(30 6 / 42 )。将其采用三步甘油浓度由低到高按编制程序冷冻 ,液氮保存 2 0天后 ,35℃水浴中解冻 ,无鉴定分级 ,移植受体母羊 2 0 7只。 45天B超诊断检查 ,冷冻胚胎移植受胎率为 48.31% (10 0 / 2 0 7)。产羔母羊率为39.13(81/ 2 0 7)。繁殖率为 12 0 .86 % (10 8/ 81)。双胎率为 30 .86 % (2 5 / 81) ,单胎率 6 9.41% (5 6 / 81)。羔羊初生重量公羔平均为 4.5 9± 0 .76kg ,母羔平均 4.43± 0 .6 4kg。     

提高牛冷冻胚胎移植妊娠产犊率的研究

分别对牛冷冻胚胎的解冻液、解冻后胚胎的质量评定、解冻后的胚胎处理,及受体牛的同步发情处理方法和移植方法等方面开展研究。结果表明：(1)进口解冻液脱甘油的胚胎复苏率为76％(19／25),优于传统解冻液。(2)解冻后未作任何处理直接移植的妊娠率(68．4％),产犊率(47．37％)最高,切割未作培养的次之(妊娠率37．5％,产犊率25％,流产率33．3％),移植前切割培养的最差(妊娠率、产犊率均为9．09％);(3)受体黄体发育正常、同步发情率高达83％,妊娠率高达62．5％;(4)移植枪加套管受体妊娠率(52．9％)明显比不加套管的高。熟练的操作技术受体妊娠率较高(62．5％)。     

小鼠胚胎嵌合的研究

选用昆白.CI_(57)及B/L_(615)三个品系小鼠,对其8细胞期(8C),桑椹期(M)和囊胚期(B)的全胚和半胚(半)进行聚合,培养和移植试验。8细胞期及桑椹期胚胎的聚合发育率显著高于囊胚期(P<0.05),全胚聚合的发育率显著高于半胚(P<0.05)。将同品系和不同品系的8细胞期,桑椹期和囊胚期胚胎嵌合移植给27只受体,9只妊娠,妊娠率分别为17％(1/6),40％(6/15)及33％(2/6),平均为33％(9/27),共产仔35只,其中不同品系胚胎的嵌合胚移植,产仔15只,4只为皮毛嵌合体。     

不同培养条件对牛核移植胚胎体外发育的影响

[目的]进一步优化牛核移植胚胎的体外培养体系。[方法]在培养液中添加谷胱甘肽和胚胎培养的0~3 d采用5%O2浓度,在不同培养条件下对牛核移植重构胚胎进行体外培养,测定卵裂率8、细胞发育率、桑椹胚率以及囊胚发育率。[结果]结果表明,试验组B的8细胞发育率(38.3%)、桑椹胚率(17.0%)和囊胚率(8.5%)与对照组A(17.9%、1.3%、1.3%)差异显著(P<0.05)。试验组B和试验组C的桑椹胚率(17.0%、11.8%)、囊胚率(8.5%、7.8%)与对照组A(1.3%、1.3%)均差异显著(P<0.05)。[结论]在培养液中添加谷胱甘肽和胚胎培养的0~3d采用低O2浓度(5%O2),能够提高牛核移植胚胎的体外发育率。