欧美杨108离体叶片和茎段再生体系的优化(英文)

[目的]优化欧美杨108的无性繁殖再生体系的培养条件。[方法]以欧美杨108无菌苗为材料,采用正交试验优化叶片直接分化和茎段愈伤组织分化再生体系的培养条件。[结果]欧美杨108的叶片适宜在光照下进行直接再生分化,茎段适宜在光照下进行愈伤组织诱导再生分化。叶片不定芽分化的培养基为MS基本培养基(琼脂7.0 g/L、pH 6.0、蔗糖20 g/L)附加0.6 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA;茎段愈伤组织诱导培养基为WPM固体培养基附加0.75 mg/L KT和1.5 mg/L 2,4-D。不定芽诱导生根培养基为WPM固体培养(蔗糖30 g/L)附加2.0 mg/L IBA。[结论]该研究优化了欧美杨108叶片的直接分化再生体系和茎段愈伤组织再生体系的培养条件,为其组织培养及遗传转化体系的构建提供了基础支持。     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

杨树农杆菌介导遗传转化中抗生素浓度的筛选

研究头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢拉啶、头孢他啶4种头孢类抗生素对根癌农杆菌LBA4404和EHA105的抑制作用;以欧美杨111和盖杨组培苗为材料,研究卡那霉素（Km）对2种杨树叶片分化及茎段生根的影响,并分析头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化及茎段生根的影响。结果表明,头孢噻肟钠、头孢曲松钠和头孢他啶对LBA4404具有良好的抑菌效果,使用浓度为50 mg/L,其中头孢噻肟钠对农杆菌EHA105的抑菌效果最好,头孢拉啶抑菌效果较差。不同杨树品种对卡那霉素的耐受性差异不大,欧美杨111在叶片转化筛选培养时,使用浓度为10 mg/L,抗性芽生根阶段为20 mg/L;盖杨在叶片转化筛选培养时,卡那霉素使用浓度为20 mg/L,抗性芽生根阶段为25 mg/L,头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化和茎段生根影响不大。     

秘鲁番茄高效再生体系的研究

以秘鲁番茄的叶片和茎段为外植体,研究不同外植体种类、激素配比对秘鲁番茄愈伤组织诱导、分化和不定芽生根的影响,以期建立秘鲁番茄组织培养高效再生体系。结果表明:秘鲁番茄的叶片较茎段更适宜愈伤组织诱导与分化,以叶片为外植体时,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达100.0%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达92.4%。以茎段为外植体时,最佳诱导愈伤培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达95.8%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达86.5%。不定芽最适宜的生根培养基为MS+1.0 mg/L NAA,生根率达100.0%。采用草炭土+珍珠岩(体积比1∶1)的混合基质作为移栽基质,移栽成活率可达90%以上。     

108杨叶片再生体系的建立

[目的]研究欧美杨108离体叶片再生技术,为遗传转化研究提供科学依据。[方法]研究了外植体的消毒方法和不同激素组合对叶片再生和不定芽生根的诱导效果。[结果]茎段外植体消毒的最佳处理为：75%乙醇溶液消毒10s＋0.1%升汞消毒10min,污染率和褐化率均低,成活率较高;叶片诱导分化培养基以MS＋6-BA0.6mg/L＋NAA0.2mg/L效果最好,诱导率100%,平均不定芽诱导数为26.43个;最佳生根培养基为1/2MS＋IBA0.3mg/L或1/2MS＋IAA0.3mg/L,生根率可达100%,生根数分别为4.83条和5.20条。[结论]以108杨叶片为外植体,建立了108杨的高效再生体系。     

欧美杨108离体叶片和茎段再生体系的优化

[目的]优化欧美杨108的无性繁殖再生体系的培养条件。[方法]以欧美杨108无菌苗为材料,采用正交试验优化叶片直接分化和茎段愈伤组织分化再生体系的培养条件。[结果]欧美杨108的叶片适宜在光照下进行直接再生分化,茎段适宜在光照下进行愈伤组织诱导再生分化。叶片不定芽分化的培养基为MS基本培养基(琼脂7.00 g/L、pH 6.00、蔗糖20 g/L)附加0.60 mg/L 6-BA和0.20 mg/L NAA;茎段愈伤组织诱导培养基为WPM固体培养基附加0.75 mg/L KT和1.50 mg/L 2,4-D。不定芽诱导生根培养基为WPM固体培养(蔗糖30 g/L)附加2.00 mg/L IBA。[结论]优化了欧美杨108叶片的直接分化再生体系和茎段愈伤组织再生体系的培养条件,为其组织培养及遗传转化体系的构建提供了基础支持。     

山新杨组织培养快繁技术研究

山新杨冬季枝条经FC处理,选择萌发新枝的茎段和叶片为接种外植体;诱导茎段产生腋芽的培养基为1/2MS 6-BA0.2~0.5mg/L NAA0~0.5mg/L,诱导叶片产生不定芽的培养基为1/2MS或MS 6-BA0.5mg/L NAA0.5mg/L;丛生芽快繁培养基MS 6-BA0.3mg/L NAA0.3mg/L,每20天继代一次,繁殖倍数20左右;生根培养基为1/2MS或MS,附加0.1~0.5mg/L的多效唑,对生根有促进作用。     

火龙果茎段组织培养快繁技术研究

以火龙果的幼嫩茎段为外植体进行组培快繁研究,结果表明,火龙果不同长度的茎段均能产生愈伤组织,茎上的不定芽大部分可以启动生长,其中,以3 cm长的幼嫩茎段诱导效果最佳,愈伤组织诱导率为100%;不定芽诱导培养基以MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L效果最好,诱导率可达75%;当6-BA质量浓度为8 mg/L和NAA质量浓度为0.05 mg/L时,不定芽的繁殖系数最高,当6-BA质量浓度为1 mg/L和NAA质量浓度为0.2 mg/L时,虽然不定芽的繁殖系数低,但其不定芽生长较快、苗壮,可以依生产的需要交替使用这2种培养基;适宜的生根培养基为1/2 MS+IBA2.0 mg/L。     

‘红阳’猕猴桃叶片和带芽茎段的组织培养快繁技术

以‘红阳’猕猴桃雌株的幼嫩叶片和带腋芽茎段为外植体,通过诱导叶片愈伤组织及不定芽、带腋芽茎段直接出芽,不定芽增殖、生根,从而建立高效稳定的快速繁殖体系。结果表明：叶片极易诱导形成愈伤组织,试验中各种类型培养基对其的诱导率均达100%,其中MS+1.0 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA 所得到的愈伤组织易于分化成苗,芽分化率达到99.33%,不定芽的增殖系数平均达到5.2个;MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA最适宜带芽茎段上腋芽的萌发,最高诱导率达83.33%,不定芽在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L GA中的增殖系数平均达4.5;培养基1/2 MS+0.7 mg/L IBA诱导不定芽生根效果佳。     

抗生素与除草剂对尾巨桉离体植株再生的影响

为研究不同抗生素和除草剂对尾巨桉无性系SP7再生体系建立过程中叶片诱导植株再生的影响,在尾巨桉无性系SP7不定芽诱导和生根诱导培养基中添加不同浓度的卡那霉素、潮霉素、草甘膦和草胺膦。结果表明:卡那霉素、潮霉素、草甘膦和草胺膦对桉树无性系SP7叶片不定芽诱导和生根诱导过程中的影响显著。潮霉素、卡那霉素、草甘膦、草胺膦浓度分别为10、40、40、2.5 mg/L时不定芽的产生完全受到抑制;在生根诱导培养基中分别添加8 mg/L潮霉素、50 mg/L卡那霉素、30 mg/L草甘膦、7.5 mg/L草胺膦时,不定芽的生根完全受到抑制。     

SMART策略构建小黑杨茎形成层全长cDNA文库

为了研究小黑杨木材形成过程中的关键基因,以2年生小黑杨茎形成层组织为试验材料提取RNA,采用SMART(RNA转录过程中的5′末端转换机制)技术合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成双链cDNA。利用SfiⅠ限制性酶酶切后将其连接到质粒载体pDNR-LIB上,采用电穿孔法将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,构建全长cDNA文库。文库质量鉴定表明:原始文库滴度为2.18×106pfu/mL,扩增后的文库滴度为5.46×109pfu/mL,重组率为96%。插入片段长度在0.5～2.0kb之间,平均长度为1.12kb,表明构建的小黑杨茎形成层cDNA文库较为理想。     

山杨组织培养技术研究

以山杨(Populus davidiana Dode)为实验材料,利用植物组织培养技术建立快繁再生系统.实验结果表明,山杨组织培养不同培养阶段的适宜培养基分别为:分化培养基:MS 6-BA 0.5mg/L NAA 0.05mg/L;继代培养基:MS BA0.5mg/L NAA0.1mg/L;生根培养基:MS IBA1mg/L.     

I-72杨再生体系的建立

以水培I-72杨（Populus euramericana San Martino）的叶片和叶柄为外植体，探讨了I-72杨植株再生的方法。结果表明：I-72杨愈伤组织诱导和不定芽分化的最佳培养基为MS＋BA 0．5mg／L＋NAA0．1mg/L，愈伤组织诱导率为97．0％，不定芽分化率为91．1％；在诱导培养基中添加Vc（150 mg／L）能有效地抑制叶片的褐变，褐变降低率达25．0％；不定芽在MS＋BA 0．3mg／L＋NAA 0．05mg／L培养基中继代增殖系数为6．3；添加0．8mg／L GA3对继代培养中不定芽的伸长和增殖有显著效果；在生根培养基1／2MS＋NAA 0．05mg／L＋IBA0．2mg／L上，生根率达93．5％。     

酵母双杂交筛选与小黑杨PsnWRKY70相互作用的蛋白质

小黑杨PsnWRKY70是能够响应盐胁迫的转录因子。为了进一步探究该转录因子在参与盐胁迫应答途径中与哪些蛋白质之间存在相互作用关系,本研究以140 mmol/L NaCl溶液处理过的小黑杨叶片为材料,利用热稳定核酸酶(DSN)构建了均一化的pGADT7-DEST酵母双杂交cDNA文库,将PsnWRKY70基因亚克隆至pGBKT7载体,形成BD-WRKY重组质粒,并以之为诱饵蛋白表达载体筛选小黑杨酵母双杂交cDNA文库。经过2轮酵母双杂交筛选以及回转验证试验,初步选出了5种与PsnWRKY70相互作用的蛋白质。对所筛选出的5种蛋白质进行保守结构域分析发现:有2种预测蛋白(HP1和HP2,其中HP1包含ClpP结构域),1种环化酶相关蛋白(CAP1),1种包含RNA识别基序的蛋白(RRM)以及1种泛素样修饰蛋白酶(Ulp1);对CAP1、HP1、RRM、HP2和Ulp1的毛果杨同源基因编码区上游2 000 bp范围内的顺式作用元件进行分析发现:CAP1、HP1、RRM、HP2和Ulp1的毛果杨同源基因上游启动子区均富含能够特异性结合WRKY转录因子的W-box。采用GST-pull down技术验证CAP1、HP1、RRM、HP2、Ulp1蛋白全长与PsnWRKY70转录因子之间是否存在直接的相互作用关系,将等量的His-X(X:CAP1、HP1、RRM、HP2或Ulp1)融合蛋白分别上样于正常谷胱甘肽琼脂糖树脂以及结合了GST或GST-WRKY蛋白的谷胱甘肽琼脂糖树脂中,SDS-PAGE电泳分离互作蛋白,最终Western blot结果显示:在体外状态下,HP1、RRM和Ulp1蛋白能够直接与PsnWRKY70相互作用,而CAP1和HP2则不能直接与PsnWRKY70相互作用。      

杨树幼茎特异表达基因及PsnLAC基因的克隆

利用cDNA-AFLP技术对小黑杨茎、叶基因的差异表达进行分析.结果表明,64对引物组合在茎和叶中共扩增出4 192条带,其中差异条带2 275条.通过对茎中特异表达基因的克隆和测序,获得了4条cDNA序列.经Blast-x比对分析表明,它们分别是类伸展蛋白、漆酶、过氧化物酶和细胞壁相关水解酶.进行RT-PCR分析发现...     

几种木本植物蛋白质的电泳分析

利用凝胶电泳技术（SDS—PAGE）和考马斯亮蓝染色法对美洲黑杨、杂种鹅掌楸、银杏3个树种发叶初期的叶片及1年生枝皮层的蛋白质含量和组分进行测定分析,结果表明：叶片内蛋白质含量在美洲黑杨和杂种鹅掌楸中表现为4月下旬最高,在银杏中为5月上旬最高．皮层内蛋白质含量在美洲黑杨中表现为随生长推移显著下降,而杂种鹅掌楸和银杏都表现为先升后降。且银杏变化幅度较大．SDS—PAGE电泳表明：叶片内普遍存在的蛋白质分子量为78—13KD,发生明显变化的蛋白质包括美洲黑杨的50,32和23KD蛋白,杂种鹅掌楸的23,19,17和16KD蛋白,银杏59,35,16,14和13KD蛋白．皮层内普遍存在的蛋白质分子量为58—16KD,发生明显变化的蛋白包括美洲黑杨的49,26,21,15和14KD蛋白,杂种鹅掌楸的70和22KD蛋白,银杏的58,29,24和23KD蛋白、     

中华红叶杨对镉的富集效果研究

研究了不同浓度镉胁迫下对中华红叶杨生长的影响以及杨树对镉的富集作用。结果表明,镉浓度100~500μmoL/L对中华红叶杨有明显的抑制作用。中华红叶杨对镉的富集作用表现在随着镉浓度的增加和处理时间的延长而增加;镉主要积累在根部;幼叶中的富集量高于老叶;杨树各部位镉的富集水平为:树皮茎木材部分。