五味子木脂素类成分中护肝主活性成分的体外筛选

目的:比较五味子木脂素成分对CCl4致L02肝细胞损伤的保护作用,筛选出护肝作用最大的主活性成分。方法:体外培养L02细胞,分别以不同浓度五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲对细胞加以保护,CCl4体外诱导细胞损伤;MTT法测定细胞存活率;通过试剂盒的方法分别检测各组细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力。结果:CCl4最佳造模浓度为80mmoL·L-(1P0.01);5～20μmoL·L-1的五味子木脂素单体均能增加L02肝细胞存活率(P0.01);考察浓度为20μmol·L-1时,均可抑制CCl4引起ALT、AST活性的升高(P0.05或P0.01);结论:通过比较得出五味子乙素护肝作用最强。     

7种五味子木脂素对草鱼原代肝细胞的毒理研究

为研究五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲和五味子酯乙这7种木脂素对草鱼肝细胞的毒性作用和安全浓度,采用草鱼原代肝细胞作为实验模型。实验组加入1~1 000μmol/L不等的待测木脂素,溶剂对照组加入等体积的二甲基亚砜,阳性对照组加入8 mmol/L的四氯化碳。培养22 h后,采用CCK-8细胞毒性实验评价木脂素的细胞毒作用,并检测培养上清GPT和GOT评价肝细胞膜通透性的改变。结果显示,醇乙在≥700μmol/L、乙素在≥100μmol/L时有细胞毒性,但均未见GPT和GOT的升高;醇甲在最高1 000μmol/L、甲素丙素在最高100μmol/L、酯甲酯乙在最高50μmol/L时均未见明显的细胞毒性。结果表明,醇乙和乙素具有一定的肝细胞毒性,主要表现为细胞代谢水平的下降,但不足以引起细胞膜通透性的显著改变;其余5种木脂素无明显肝细胞毒作用。     

五味子木脂素舒张大鼠离体气管平滑肌的功能研究

【目的】探讨五味子木脂素6种单体成分对大鼠离体气管平滑肌张力的影响及其舒张气管平滑肌的作用机制。【方法】采用离体气管灌流法,观测终浓度为10^-7~10^-3 mol/L的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲和体积分数1‰二甲基亚砜（DMSO,对照）对静息状态及乙酰胆碱（ACh）预收缩状态下大鼠离体气管环张力的影响。用L型Ca²⁺通道阻滞剂维拉帕米（10^-5 mol/L）、β-肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔（10^-5 mol/L）和体积分数1‰ DMSO（对照）预孵育大鼠离体气管环15 min,然后依次加入浓度为10^-5~10^-3 mol/L 的五味子醇甲,观测维拉帕米和普萘洛尔对五味子醇甲舒张气管作用的影响。【结果】与对照比较,不同浓度的6种五味子木脂素单体对静息状态下的气管环张力均无显著影响（P>0.05）。五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素对ACh预收缩的气管环张力相较对照具有显著抑制作用,且呈剂量依赖性（P<0.001）,最大抑制率分别为（92.12±3.28）%,（78.23±10.20）%,（62.95±12.93）%及（46.58±4.92）%;而五味子酯甲和五味子丙素对ACh 预收缩气管环张力无明显影响（P>0.05）。与DMSO对照组相比,五味子醇甲对大鼠离体气管环的舒张作用可被维拉帕米明显减弱（P<0.001）,最大抑制率降低了（26.24±8.42）%,但普萘洛尔对其作用无显著影响（P>0.05）。【结论】五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素可呈剂量依赖性地舒张大鼠离体气管平滑肌,其中五味子醇甲的作用机制可能与阻断L型Ca²⁺通道有关。     

扇贝多肽对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用

[目的]建立H2O2诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的体外模型,探讨扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用及其作用机制。[方法]采用不同浓度的H2O2(50、100、200、300、500μmol/L)作用HaCaT细胞12 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;用不同浓度(1.42、2.84、5.68 mmol/L)的PCF分别处理细胞12 h后,加入H2O2(300μmol/L)继续作用12 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用酶生化法法测定细胞上清液中LDH活性以及细胞质中GSH-Px、T-AOC和CAT水平。[结果]与正常组相比,50~500μmol/L浓度的H2O2依赖性地引起HaCaT细胞氧化损伤,300μmol/L的H2O2使存活率降低到56%(P0.01);与模型组相比,不同浓度的PCF均可保护H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞存活率,降低细胞LDH的释放量,提高GSH-Px、T-AOC和CAT含量,增强细胞抗氧化作用。[结论]扇贝多肽能对抗H2O2诱导的氧化应激,对细胞受损具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力有关。     

高效液相色谱法测定北五味子中木脂素的含量

[目的]建立同时测定北五味子中3种木脂素成分（五味子甲素、五味子乙素和五味子酯甲）的分析方法。[方法]以甲醇和水为流动相,采用等度洗脱对标样以及供试品进行分离,并且通过标准品以及保留时间进行定性。[结果]五味子甲素、五味子乙素以及五味子酯甲分别在0156.0、0138.0、0120.4 mg/L范围内呈现良好的线性关系,检出限分别为0.202,0.204,0.338μg/L。[结论]该方法操作简单,分离效果好,灵敏度高     

五味子根、藤茎及叶提取物中五味子甲素、乙素的含量测定

目的采用HPLC法测定五味子根、藤茎及叶不同溶剂提取物中五味子甲素、乙素的含量,同时筛选出最佳提取溶剂,为扩大五味子的入药部位资源提供理论依据。方法采用Hypersil ODS2（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱;流动相：A.甲醇、B.水,梯度洗脱,0～20min,70%～80%A、20～35min,80%～70%A;流速：1mL/min;检测波长：254nm。结果五味子根中五味子甲素、乙素的含量最高,乙醇为最佳提取溶剂。     

五味子甲素在小鼠体内组织的分布特点及其靶向疗效研究

【目的】建立小鼠组织中五味子甲素的质量浓度测定方法,并研究五味子甲素在小鼠体内的组织分布及其靶向治疗效果。【方法】将五味子甲素按25mg/kg一次灌胃ICR雄性小鼠,于给药后0.5,1,2,3和4h分别取小鼠心、肝、肾、脑,用生理盐水洗净后制成0.25g/mL组织匀浆,以睾丸酮为内标物,采用高效液相色谱法(HPLC)测定五味子甲素在小鼠心、肝、肾、脑中的质量浓度,并对HPLC方法的专属性、回收率、精密度和稳定性进行考察。依据五味子甲素在各组织中的峰值及各时间段的质量浓度,确定其分布最高的组织,对质量浓度分布最高的组织进行相关的药理学评价。【结果】小鼠心、肝、肾、脑组织中五味子甲素质量浓度为0.625~20μg/mL时,其质量浓度与五味子甲素/内标峰面积线性关系良好(r≥0.999 0)。HPLC法的专属性良好;日内精密度为(3.15±0.82)%~(4.77±0.57)%,日间精密度为(5.51±1.82)%~(8.46±2.93)%;稳定性试验的RSD10%;绝对回收率为(89.04±3.82)%~(91.37±3.77)%,相对回收率为(95.65±5.76)%~(106.07±8.29)%。五味子甲素1次灌胃给药(剂量25mg/kg)后在小鼠体内心、肝、肾、脑组织中均有分布,给药1h后五味子甲素在小鼠心脏、脑组织中质量浓度达到峰值,给药2h后在小鼠肝脏和肾脏中质量浓度达到峰值。整个分布情况显示,给药后1,2,3h五味子甲素在小鼠肝脏组织中的质量浓度均高于其他组织,且达峰值时其质量浓度也显著高于心脏、肾脏、脑(P0.05);其次是肾脏,五味子甲素质量浓度较低的为心脏和脑。五味子甲素对CCl4所致的小鼠急性肝损伤确有一定的保护作用。【结论】该测定方法简便、快速、稳定,可用于小鼠内脏组织中五味子甲素质量浓度的测定;小鼠灌胃给药后五味子甲素在小鼠体内心、肝、肾、脑组织中均有分布,且达峰值时以肝脏中质量浓度最高,其次是肾脏,心脏与脑中较低;五味子甲素对CCl4所致的小鼠急性肝损伤有一定保护作用。     

南五味子和北五味子藤茎中五味子素类化合物含量的HPLC法测定及差异比较分析

为了测定与比较我国南北地区五味子藤茎中的五味子素的含量和差异,探究五味子藤茎的可开发利用度。以五味子酯甲与五味子乙素含量作为考察五味子素类化合物的指标,采用超声-乙醇法提取五味子素类化合物,高效液相色谱法测定,测定条件：Kromasil-C18(4.6 mm×200 mm, 5 mm)色谱柱,柱温30℃,检测波长220 nm,流动相：甲醇-水(体积比75∶25),进样量5μL,流速0.8 mL/min。结果显示五味子乙素含量在0.026 4～0.132 mg/mL范围内线性关系良好,在南五味子藤茎中约0.028%,在北五味子藤茎中约0.147%,平均回收率为98.73%,RSD为1.33%。五味子酯甲含量在0.032 4～0.162 mg/mL范围内线性关系良好,在南五味子藤茎中约0.237%,在北五味子藤茎中约0.100%,平均回收率为103.64%,RSD为2.60%。表明了南五味子藤茎和北五味子藤茎中均含有丰富的五味子素类化合物,本研究中的两种五味子素类化合物在南北地区五味子藤茎中的分布差异具有统计学意义,五味子藤茎的开发利用具有广阔的前景。     

山羊睾丸支持细胞分离培养及其氧化应激效果研究

为探究在体外培养过程中山羊睾丸支持细胞(GSCs)存在的氧化应激问题,采用2步酶消化法分离和纯化GSCs,通过形态学观察、MTT法、油红染色和流式细胞鉴定细胞活度和纯度,再用不同浓度的H2O2处理GSCs,研究GSCs的活性、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及其DNA指数(DI)的变化。结果表明:GSCs形态为多角形状;在培养至第5天时GSCs活性最强;油红O染色鉴定多数细胞胞质含有红色的脂滴;GATA4阳性细胞率达到88.27±3.29%;添加50μmol/L H2O2组细胞存活率与对照组相比差异不显著(P0.05),其它各组均显著低于对照组(P0.05);添加50μmol/L H2O2组MDA含量和SOD的活性均与对照组无显著性差异(P0.05),而其他各组均与对照组有显著差异(P0.05);细胞DNA倍体检测发现添加50μmol/L H2O2时,细胞DI为1.08±0.01,未出现异倍体;其他各组细胞DI分别为1.15±0.02、1.20±0.03、1.26±0.03和1.32±0.01,均有异倍体产生。本研究分离纯化了GSCs,并进行培养和鉴定,200μmol/L H2O2处理GSCs后,SOD活性显著降低,MDA含量显著增加,出现明显的异倍体,200μmol/L H2O2是建立GSC氧化应激模型的适宜浓度,以此为后期建立GSC氧化应激模型提供研究基础。     

玉米赤霉烯酮对猪睾丸间质细胞DNA损伤作用的彗星试验

[目的]观察玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪睾丸间质细胞(Leydig cell)的DNA损伤效应。[方法]以体外培养的猪Leydig cell为材料,用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定ZEN对离体培养的猪睾丸间质细胞的半数致死浓度,选用0(对照组)、1、5、10和20μmol/L浓度的ZEN体外作用于猪Leydig cell,通过彗星试验观察了ZEN对猪Leydig cell DNA的损伤效应。[结果]ZEN浓度为0、1、5、10和20μmol/L时,所造成的细胞拖尾率分别为16.67%、34.00%、40.67%、52.00%和64.67%,各染毒组细胞拖尾率与对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系;各剂量组对应的拖尾细胞尾长(Tail length)分别为57.60±4.78、57.75±6.25、78.97±5.83、100.50±6.94和146.83±12.31μm,尾部DNA含量(Tail DNA%)分别为21.29±2.25%、22.24±2.43%、31.21±6.27%、37.45±4.33%和60.68±9.83%,与对照组比较,5μmol/L及以上ZEN浓度染毒组的Tail length和Tail DNA%均有显著性差异(P<0.05),且随ZEN浓度增加呈上升趋势。[结论]ZEN对猪Leydig cell存在遗传毒性,可以损伤Leydig cell的DNA,且有明显的剂量-效应关系。     

硒对镉胁迫下白术抗氧化能力的影响

[目的]探讨硒对镉胁迫下白术抗氧化能力的影响,为白术种植中重金属污染防治提供参考.[方法]采用室内水培试验,利用1/2 Hoagland＇s营养液培养白术幼苗30 d后,按营养液中单独加入4 mmol/L镉及不同浓度的硒（Na2SeO3）（10、20、40、60、80和100 μmol/L）分别与4 mmol/L镉混合设7个处理,另设不添加镉和硒的营养液处理为对照,48 h后取各处理的白术叶片进行相关生理指标测定.[结果]镉胁迫导致白术的H2O2和丙二醛水平显著升高,而超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化酶（CAT）酶活性下降.在镉胁迫下,添加不同浓度的硒后,白术抗氧化系统出现不同的反应.当加入相对较低浓度（10～60 μmol/L）的硒对,SOD和CAT酶活性显著增加,而H2O2和丙二醛水平显著下降,表明镉胁迫造成的过氧化伤害有所减轻;而加入相对较高浓度（80～100 μmol/L）的硒对,SOD和CAT酶活性下降,H2O2和丙二醛水平上升,表明镉胁迫造成的过氧化伤害没有缓解.[结论]较低浓度的硒处理有利于增强镉胁迫下白术幼苗抗氧化能力.     

外源 H2O2处理对两种小麦叶绿素荧光和叶绿素的影响

[目的]研究不同浓度H2O2处理对2种小麦幼苗叶绿素荧光和叶绿素的影响。[方法]以小麦品种宁春四号和西旱二号幼苗为材料,采用室内水培试验。[结果]对于宁春四号,200μmol／LH2O2处理使得初始荧光（FO）、最大荧光（Fm）、PSI处调节性能量耗散的量子产量Y（NPQ）、光化学淬灭（qP）和非光化学淬灭（NPQ）明显低于对照;不同浓度的H2O2处理使得幼苗叶片叶绿素a（Chla）、叶绿素b（Chlb）和叶绿素总量均显著降低。50、100和200μmol／LH3O2处理下西旱二号幼苗叶片Chla含量和F0显著降低,PSI的最大量子产量（Fv/Fm）、实际光化学反应效率（1,（II））、电子传递速率（ETR）、qP和ⅣPQ均增大,而Chlb和叶绿素总量无显著变化。[结论]与宁春4号相比,外源H2O2胁迫使西旱2号小麦幼苗叶片PSⅡ反应系统更开放,光合机构的损伤较严重。     

外源茉莉酸甲酯对草莓冷藏期间采后腐烂和品质的影响

[目的]研究了不同浓度的外源茉莉酸甲酯（MeJA）处理对“丰香”草毒（Fragaria ananassaDuch cv.Fengxiang）果实采后品质及果实腐烂的影响.[方法]将供试草莓用MeJA在25℃下熏蒸处理9h并摊凉2h,最终MeJA浓度为1和100 μmol/L.处理后迅速预冷至5℃后,置于（5±1）℃下贮藏（相对湿度90％～95％）.贮藏期间每隔3d取3盒（每盒30果）测定草莓的腐烂指数和备品质指标.[结果]试验表明,1 μmol/L MeJA处理可显著抑制采后草莓果实腐烂的发生,但对果实硬度、Vc可滴定酸（TA）、总糖的含量变化无显著影响.100μmol/L MeJA则显著促进贮藏后期草莓果实硬度及VC的损失,促进果实腐烂的发生,对其他品质指标无显著影响.1和100 mol/L MeJA均没有显著影响果实的呼吸速率.因此,1 μmol/L MeJA没有显著促进草莓果实的衰老,可维持某些果实品质;高浓度MeJA将促进草莓果实品质的下降.[结论]研究得出,1μmol/L的MeJA处理在草莓果实采后贮藏保鲜中具有一定的应用价值.     

体外模拟胃肠消化对芒果抗氧化成分及其活性的影响

[目的]探讨芒果经体外模拟胃肠消化后,其抗氧化成分多酚和黄酮的含量及抗氧化活性的变化规律,为今后开发利用广西芒果资源提供参考依据.[方法]以芒果肉为原料,采用体外模拟消化法对芒果的抗氧化成分及活性进行研究,测定芒果经模拟胃肠消化后其多酚、黄酮含量及其抗氧化活性（ORAC）.[结果]经模拟胃消化后,与空白组对比,胃消化组的芒果多酚和黄酮含量在消化0.5 h内显著升高,消化3.0 h后均达最大值,分别为178.33±2.42 mg没食子酸当量/100 gFW和226.86±8.70 mg儿茶素当量/100 gFW;而盐酸组的多酚和黄酮含量无显著变化.经模拟肠消化后,肠消化组的多酚和黄酮含量在消化2.0 h后均达最大值,分别为251.56±4.49 mg没食子酸当量/100 gFW和469.84±21.96 mg儿茶素当量/100 gFW.芒果提取液抗氧化活性的变化类似多酚,胃肠消化0.5 h内显著提高,之后趋于稳定,模拟胃消化的ORAC最高为2610.22±20.40 μmol Trolox当量/100 gFW,模拟肠消化的ORAC最高为4393.52±129.50 μmol Trolox当量/100gFW.[结论]胃酸对芒果的多酚释放及抗氧化活性无促进作用,对黄酮释放有一定促进作用;胃肠道中的消化酶对芒果的多酚和黄酮释放及其抗氧化活性均有显著的促进作用.     

4个品种猪血清中sLAIR-1表达量的ELISA检测

【目的】进一步证实利用广西巴马小型猪建立异种器官移植供体模型的可行性。【方法】利用夹心ELISA方法分别检测广西巴马小型猪、长白猪、大约克猪及杜洛克猪血清中可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体1（sLAIR-1）含量,筛选出血清中sLAIR-1表达量最低的猪品种,为异种移植提供一定参考指标。【结果】所检测的4个不同品种猪血清中sLAIR-1的表达量分别为：广西巴马小型猪（2．39＋0．20μmol／L）〈大约克猪（3．51±0．28μmol／L）〈长白猪（3．59±0．28μmol／L】〈杜洛克猪（3．62_±0．31μmol／L）,且广西巴马小型猪血清中sLAIR-1的表达量显著低于长白猪、大约克猪、杜洛克猪3个品种（P〈0．01）。【结论】广西巴马小型猪在异种移植中具有良好的先天优势,可能会成为异种移植的理想动物模型。     

铝·铅及其互作胁迫对大麦幼苗生长和抗逆生理代谢的影响

[目的]为明确铝(Al)、铅(Pb)及其交互作用对大麦幼苗生长及抗氧化代谢的影响。[方法]采用营养液培养方法,研究了胁迫处理10 d后不同浓度Al、Pb单独及复合胁迫对大麦幼苗株高、根长等生长指标和功能叶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活性以及丙二醛(MDA)、游离脯氨酸含量的影响。[结果]单一Al、Pb胁迫处理均在0.05水平显著抑制大麦幼苗生长,表现为根长、株高等生长指标均在0.05水平显著低于对照。胁迫处理导致大麦叶片中SOD、POD活性及MDA、游离脯氨酸含量上升,且Al处理下随着胁迫浓度增加的幅度加大。Al、Pb复合处理时,大麦幼苗生长受抑制程度及SOD、POD活性和MDA、游离脯氨酸含量高于相应单一Al处理值。植株生长、SOD、POD活性及MDA含量以200μmol/L Al+150μmol/L Pb处理下变幅最大,但游离脯氨酸含量在50μmol/LAl+150μmol/L Pb复合处理时最高。[结论]Al、Pb复合处理引发更严重的生长抑制和氧化胁迫。     

外源脱落酸和冠菌素对小麦籽粒萌芽的影响

[目的]通过研究外源脱落酸(ABA)和冠菌素(COR)对小麦籽粒萌芽的影响,探索COR用于防治小麦收获期穗发芽的可行性。[方法]以易穗发芽的白皮小麦品种济麦22和抗穗发芽的红皮小麦品种扬麦16为材料,以不同浓度ABA和COR处理两品种小麦籽粒后进行萌芽,测定萌芽率、芽长以及萌芽过程中的α-淀粉酶活性。[结果]38μmol/L以上浓度的ABA处理和0.05μmol/L以上浓度的COR处理均对两品种籽粒的萌发及芽的生长表现出显著的抑制作用,且COR抑制小麦种子萌发的生物活性约为ABA的200～1 500倍;浓度高于76μmol/L的ABA和0.05μmol/L的COR对两品种小麦籽粒萌发过程中的α-淀粉酶活性有抑制作用,且浓度越高抑制程度越大。[结论]ABA和COR可能通过抑制α-淀粉酶活性来抑制小麦籽粒的萌发和芽的生长;同浓度同一抑制剂处理下,白皮的济麦22萌芽及α-淀粉酶活性受抑制的程度显著高于扬麦16。该研究为COR用作控制大田小麦收获期穗发芽的可行性提供理论依据。     

七元瓜环对三环唑的分子识别及抑茵活性研究

利用紫外吸收光谱法研究了七元瓜环与三环唑在水溶液中的分子识别作用，考察了温度对该作用体系的影响；并探讨了瓜环对三环唑抑制稻瘟病菌抑菌活性的影响。结果表明：七元瓜环与三环唑可形成1：1配合物；其稳定常数（K）为（9．23±0．05）×10^3L／mol，热力学参数为△G（-2．26×10^4J／mo1），△H0（-43．79J／mol），△S0（-72．78J／K·mol）。并且七元瓜环与三环唑形成的包结配合物对三环唑抑制稻瘟病菌活性具有增效作用，抑菌率提高16％。     

微波萃取液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用测定水产品中甲基汞、乙基汞和无机汞

[目的]研究水产品中甲基汞、乙基汞和无机汞的检测方法。[方法]采用Hypersil gold 150×4.6 mm色谱柱进行HPLC分离条件优化,用含Li、Co、In、U各1μg/L的调谐液进行ICP-MS参数优化,对样品进行微波萃取。[结果]采用盐酸微波萃取样品,C18柱(150×4.6 mm)分离,流动相为5%甲醇-0.06 mol/L乙酸铵-1 g/L半胱氨酸。甲基汞、乙基汞的线性范围均为0.5~100.0μg/L,检出限分别为0.2、0.3μg/L;无机汞线性范围均为0.5~20.0μg/L,检出限为0.2μg/L。不同浓度下甲基汞、乙基汞、无机汞的加标回收率分别为89%~98%、82%~89%、86%~96%。鱼肉标准物质(GBW10029)中汞形态的测定均值在标准值范围内。[结论]该方法前处理简便、精密度高、准确性好,适用于水产品中汞化合物的形态分析。