R-phycoerythrin标记抗猪瘟病毒荧光抗体的制备及其与FITC标记荧光抗体检测的比较研究

用摩尔比100∶1的化学交联剂SPDP分别将RPE、抗猪瘟病毒抗体衍生,两种衍生物再以摩尔比1∶1液相交联,HPLC纯化制备出RPE标记的抗猪瘟病毒荧光抗体.对制备的荧光抗体从荧光特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定.以澳化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用固相免疫荧光检测法,以制备的RPE、FITC分别标记的荧光抗体检测猪瘟病毒细胞毒.结果表明,RPE标记的荧光抗体检测阳性微球在蓝绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无本底光干扰,检测灵敏度高达2.67×10-6mg·mL-1,是FITC标记的荧光抗体检测灵敏度的10倍.RPE可替代FTTC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测.     

鸡新城疫卵黄荧光抗体的制备及其应用

本试验以鸡新城疫强毒株,采用大剂量连续强化免疫的方法免疫产卵母鸡,获得了含有高效价抗新城疫抗体的鸡卵。在室温条件下,用硫酸葡聚糖钠沉淀的方法,从免疫鸡卵黄液内提取出高效价的、比较纯净的IgG。以异硫氰酸荧光素标记提纯的卵黄IgG所制成的荧光抗体,对人工感染的鸡胚、鸡只和细胞培养物染色检查的结果表明,卵黄荧光抗体具有特异性强、制备方法简便、成本低廉、保存期长而不改变染色性能等优点。因此,本试验所研创的荧光抗体制备法具有广泛的应用和推广价值。     

包被LPS抗原检测鸡源鲍氏志贺氏菌抗体的间接ELISA方法的建立

以鸡源鲍氏志贺氏茵菌体提取的脂多糖(LPS)成分作为检测抗原,以辣根过氧化物酶标记的免抗鸡IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功建立了检测鸡源鲍氏志贺氏茵抗体的间接ELISA方法.通过对间接ELISA反应条件的一系列研究,确定了各种最适工作条件:鸡源鲍氏志贺氏茵LPS抗原最适包被质量浓度为5mg·L-1,最适包被...     

间接ELISA法检测贝氏隐孢子虫特异性IgY抗体的研究

应用蔗糖密度梯度离心法纯化贝氏隐孢子虫卵囊,冰浴超声波破碎、反复冻融卵囊,低温离心获得贝氏隐孢子虫卵囊蛋白质抗原.免疫产蛋鸡,6次免疫后获得高免特异性卵黄抗体IgY.制备辣根过氧化物酶(HRP)标记免抗鸡IgG,其最佳工作浓度为1:4 000～1:6 000,贝氏隐孢子虫卵囊抗原包被浓度8.15 mg·L-1,4℃包被过夜(≥10 h);1×106mg·L-1 BSA-PBST稀释卵黄,建立了检测抗贝氏隐孢子虫特异性卵黄抗体的间接ELISA方法.     

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。     

抗犊牛支原体肺炎卵黄抗体的制备

以灭活的支原体免疫高产母鸡,用分离、匀浆的方法制备高效价卵黄抗体,并应用间接血凝检测鸡卵黄中免疫球蛋白(Immunoglobulin of egg yolk,IgY)的活性。结果显示灭活的支原体能诱导鸡产生高效价的抗体,且效价高达4.096×103,经上述简单、实用的路线,制备出了高纯度的IgY。卵黄是一种含量高、经济的特异性抗体源,可为犊牛支原体肺炎的防治提供新的途径。     

R-藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用

用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂SPDP将R-藻红蛋白与纯化的禽流感病毒H9亚型多克隆抗体交联,并经高效液相色谱纯化制备R-藻红蛋白标记抗体荧光探针.以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用双抗体夹心法建立固相免疫荧光检测法,以制备的R-藻红蛋白标记抗体荧光探针检测禽流感病毒H9尿囊毒.结果表明,阳性微球在蓝、绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无背景光干扰,特异性好,灵敏度高,可检测蛋白浓度为1.85×10-5 mg·mL-1的H9亚型尿囊毒.R-藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于FITC标记探针,R-藻红蛋白可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测.     

培氟沙星抗体的制备

为了制备培氟沙星(PFLX)抗体,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法将培氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原PFLX-BSA和检测抗原PFLX-OVA,用PFLX-BSA免疫小鼠以获得高效价的抗体。结果显示,免疫抗原PFLX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特性,其最大吸收峰在277.5nm处,说明载体蛋白BSA与PFLX成功偶联,可用于动物免疫。检测抗原PFLX-OVA最大吸收峰在275nm处,说明载体蛋白OVA与PFLX成功偶联,可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明,所得小鼠抗血清效价较高,均达1∶32 000以上,说明有特异性抗体产生。该研究成功制备了抗培氟沙星抗体,也进一步证明药物偶联成功。     

兔抗猪瘟高免血清的制备及纯度鉴定

利用猪瘟弱毒疫苗(C株)免疫新西兰大白兔,制备抗猪瘟高免血清IgG。运用间接ELISA方法测血清效价,再经饱和硫酸铵盐析沉淀法提纯血清IgG,SDS-PAGE电泳法鉴定提纯IgG的纯度,结合无菌检查试验和仔猪接种试验,检测血清IgG的安全性。结果表明,获得了蛋白含量为6 mg/mL,效价为1∶6400的高效价、安全性高、成本低的抗猪瘟高免血清IgG。为猪瘟病毒的检测和猪瘟的防制提供了理想的生物制剂。     

抗人轮状病毒IgY的制备

利用能引起婴儿腹泻的轮状病毒制备灭活疫苗,免疫产蛋母鸡,并用ELISA法检测抗体活性。结果表明:母鸡在免疫后第11 d卵黄中出现特异性抗体,加强免疫后抗体活性迅速升高,免疫35~42 d达到高水平,3次免疫后活性较长时间不下降。经硫酸铵两步沉淀法从鸡卵黄中分离抗人轮状病毒卵黄免疫球蛋白(抗HRV-IgY),透析纯化IgY测得抗体蛋白含量达14 mg/m l蛋黄液。