ELISA检测方法中最佳封闭液和样品稀释液的筛选研究(英文)

[目的]为提高酶联免疫吸附法(ELISA)的敏感性和特异性,研究分析了不同类别和不同浓度的封闭液和样品稀释液对ELISA检测结果的影响。[方法]研究采用酪蛋白(Casein)、明胶(Gelatin)、BSA、山羊血清(GS)、马血清(HS)和兔血清(RS)等不同类封闭液和同一类不同浓度封闭液进行ELISA检测试验。[结果]2%BSA较1%BSA和3%BSA封闭效果好,2%Casein和1%Casein较3%Casein封闭效果好,8%RS和10%RS封闭效果强于6%RS和7%RS;与BSA和Casein相比,RS具有更好的封闭效果,且8%RS封闭液和8%RS样品稀释液组合最佳。[结论]良好的封闭液和样品稀释液组合可有效降低非特异性反应,提高ELISA检测方法的敏感性和特异性,这为良好ELISA检测方法的建立提供了重要实践指导作用。     

菊苣酸对蓖麻毒素活性的抑制作用研究

为了解菊苣酸对蓖麻毒素活性的抑制作用,通过硫酸铵沉淀法和亲和层析技术,纯化得到活性良好、蛋白纯度较高的蓖麻毒素活性蛋白。将菊苣酸与蓖麻毒素共孵育,通过LDH检测发现,菊苣酸可以显著抑制蓖麻毒素活性,在药物质量浓度为64 mg·L~(-1)时,LDH释放率为38%。通过动物实验,发现菊苣酸能够降低蓖麻毒素中毒引起的小鼠死亡,死亡率为50%。研究结果表明,菊苣酸通过抑制蓖麻毒素活性,降低细胞LDH释放率,降低小鼠死亡率。表明菊苣酸是一种治疗蓖麻毒素中毒的潜在天然化合物。     

猪瘟病毒结构蛋白E0抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,采用间接ELISA(E0-ELISA)方法,以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件。结果显示,优化后的E0-ELISA在包被原1.0μg/mL质量浓度下37℃包被1 h效果最佳,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉溶液37℃作用2 h,待检血清以1∶100稀释后37℃作用60 min效果最佳,二抗以1∶5 000稀释后37℃孵育45 min效果最佳。当OD_(450)0.370时,判断为猪血清CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为1.99%～7.69%和2.16%～9.23%,表明该方法具有良好的稳定性;E0-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清时结果均为阴性;当CSFV阳性血清稀释至1∶640时结果仍为阳性,表明该检测方法具有良好的敏感性;与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E0-ELISA检测符合率为92.00%,敏感性为97.86%,特异性为78.33%。综上,成功建立一种经济、稳定、特异性好和敏感性高的CSFV血清抗体间接ELISA检测方法。     

宁夏黄瓜霜霉病和白粉病病原菌种类鉴定及保存方法研究

本试验采用离体叶片接种、人工接种和形态学鉴定方法对宁夏黄瓜霜霉病和白粉病的病原菌进行了种类鉴定,并采用悬滴法等研究了4种保存方法对2种病原菌孢子(囊)的萌发和致病性的影响。结果表明:宁夏黄瓜霜霉病的病原菌为古巴假霜霉菌[Pseudoperonospora cubensis (PerketCurt) Rostov],黄瓜白粉病的主要致病菌为瓜类单囊壳白粉菌[Sphaerotheca fuliginea (Schlecht) pollacci]。明确了黄瓜霜霉病菌适宜的保存方法为10%二甲基亚砜+5%脱脂乳保存法;琼脂粉保存法次之,保存条件为-20℃冷冻24 h,再放入-78℃低温保存,其孢子萌发率较高,致病力较强。黄瓜白粉病菌适宜的保存方法为10%蔗糖+12%甘油+7%二甲基亚砜+8%脱脂牛乳混合液保存法,保存条件为-20℃冷冻24 h,再放入-78℃低温保存或直接放于-20℃冰箱保存效果较好。     

快速检测黄瓜细菌性角斑病菌的间接ELISA法优化

采用黄瓜细菌性角斑病菌作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立较优黄瓜细菌性角斑病菌间接酶联免疫吸附分析(ELISA)检测方法。通过对抗原包被浓度和抗体稀释浓度、封闭液和封闭时间、抗体温育时间等的优化,确定ELISA法最低检测限。结果表明:抗原的较优包被浓度为106cfu·mL-1,抗体的较优工作浓度为1∶4000,以5%胎牛血清作为封闭液,在37℃下封闭1.5h,加入抗体温育1.5h是间接ELISA法的较优反应条件,方法的检测限为105cfu·mL-1。对田间采集的病叶进行检测表明,该方法可准确检测出黄瓜细菌性角斑病菌,可用于田间黄瓜细菌性角斑病的快速诊断。     

复配农药对夏大豆田间杂草的防除试验

研究了3种复配药剂对大豆田主要杂草的防除效果及对大豆的安全性评价。结果表明:大豆田播后苗前土壤封闭处理,药后15天和30天各调查1次,3种药剂均可有效控制马唐、牛筋草、马齿苋、皱果苋等大豆田杂草。其中以配方2(666.7m2用90%乙草胺160 ml+70%嗪草酮可湿性粉剂35 g+80%阔草清水分散粒剂5 g)除草效果最好,且对大豆安全。建议推广使用配方2。     

不同除草剂对高粱地杂草防除效果

为探索防治高粱田杂草的适宜除草剂类型及其对高粱的安全性,采用田间小区试验,分别进行了4种播后苗前封闭除草剂和9种苗后除草剂对高粱田杂草的防除效果、高粱生长的安全性评价以及对高粱产量的影响研究。结果表明:播后苗前封闭处理的药剂为38%莠去津和二甲戊灵混合组合,使用剂量为(1995 g+1950 m L)/hm2,苗后茎叶处理的有效药剂有50%二氯喹啉酸450 g/hm2+50%氯氟吡氧乙酸异辛酯900 m L/hm2、10%乙羧氟草醚450 m L/hm2+50%乙草胺1350 m L/hm2、50%氯氟吡氧乙酸异辛酯900 m L/hm2+50%乙草胺1350m L/hm2,或单施10%乙羧氟草醚450 m L/hm2。以上5种药剂对高粱田杂草有很好的防除效果且对高粱生长安全,高粱产量也有显著提高。     

几种新型除草剂防除麦田杂草效果试验示范

为探明几种新型除草剂对麦田杂草的封闭化除效果及对小麦生长的安全性,特进行了几种新型除草剂防除麦田杂草效果的试验示范。结果表明,以小麦播后苗前每667 m~2施用33%拜宝玛SC 80 g进行土壤封闭处理,然后于早春每667 m~2施用50 g/L爱秀EC 120 mL+50%快达WP 150 g+50 g/L金植SC 6mL+200 g/L使它隆EC 60 mL进行茎叶喷雾处理,对麦田杂草的防除效果较好。     

羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板,用脱脂奶粉封闭酶标板,设置封闭时间分别为1.0,1.5和2h,再用不同稀释度的血清(1∶100,1∶200,1∶400和1∶800)与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原,最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08,血清的最佳稀释度为1∶400,封闭时间为2h,阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清,羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应;组内,组间变异系数10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性强、重复性好,可用于临床诊断和批量血清学检测。     

应用DIBA法检测侵染辣椒的TMV与CMV的研究

采用斑点免疫结合法(Dot Immunobinding Assay,DIBA)检测侵染辣椒的TMV与CMV均具有极强的专化性.在可检测的感染叶片的汁液稀释范围内,用TMV与CMV的抗血清分别交叉检测CMV与TMV,均未出现阳性反应.检测感染叶片粗汁液的最高稀释度TMV为1:5 120;CMV为1:2560.利用3种不同封闭系统[TBST,TBST+3%牛血清白蛋白(3%BAs),TBST+3%酪蛋白(3%Casein)]检测,比较结果表明;采用TBST+3%BAS与TBST+3%Casein封闭效果较好:与免疫电镜(ISEM)检测TMV与CMV相比较,DIBA敏感性分别高出15与7倍.     

直投式木葡萄糖醋酸杆菌发酵剂的保护剂筛选研究

利用冷冻干燥技术制备一种直投式木葡萄糖醋酸杆菌的复合保护剂,先采用单因素试验优选出10％脱脂奶粉、5％海藻糖、1％谷氨酸可作为木葡糖醋酸杆菌发酵剂的单一保护剂,然后采用响应面分析法优化了直投式木葡萄糖醋酸杆菌复合保护剂中脱脂奶粉、海藻糖、谷氨酸的浓度和配比.结果表明,当复合冻干保护剂中含脱脂乳6.4％、海藻糖0.075％、谷氨酸0.575％时,木葡萄糖醋酸杆菌冻干后细胞的存活率最高、达93.346％.对比试验表明,添加复合冻干保护剂的发酵剂与同浓度的活菌液体发酵剂的细菌纤维素产率差异不显著.     

直投式木葡萄糖醋酸杆菌发酵剂的保护剂筛选研究

利用冷冻干燥技术制备一种直投式木葡萄糖醋酸杆菌的复合保护剂,先采用单因素试验优选出10%脱脂奶粉、5%海藻糖、1%谷氨酸可作为木葡糖醋酸杆菌发酵剂的单一保护剂,然后采用响应面分析法优化了直投式木葡萄糖醋酸杆菌复合保护剂中脱脂奶粉、海藻糖、谷氨酸的浓度和配比。结果表明,当复合冻干保护剂中含脱脂乳6.4%、海藻糖0.075%、谷氨酸0.575%时,木葡萄糖醋酸杆菌冻干后细胞的存活率最高、达93.346%。对比试验表明,添加复合冻干保护剂的发酵剂与同浓度的活菌液体发酵剂的细菌纤维素产率差异不显著。     

莲子乳酸菌发酵工艺

研究了莲子乳酸菌的发酵工艺及发酵过程中酸度,还原糖、氨基态氮含量,以及乳酸菌数的变化.结果表明:乳酸菌在最适发酵温度(42.5℃)下,采用蔗糖6%、脱脂乳粉2.0%、莲子6%、CMC-Na0.20%的配方,经过9h发酵,可以获得最佳风味;在发酵过程中,随着乳酸菌数的增加,发酵液的酸度以及氨基态氮含量明显提高,还原糖含量明显降低.     

藠头施肥试验及种藠消毒试验初报

为探究藠头高效施肥技术及病虫害防治方法,开展了藠头施肥试验及种藠消毒试验,结果表明:藠头基肥氮、磷、钾适用量为20.0、15.0、20.0 kg/667 m2,N∶P∶K的配比为1∶0.75∶1;种藠消毒较优配方为:40%乐果乳油1000倍液+50%多菌灵可湿性粉剂500倍液+25%三唑酮可湿性粉剂1000倍液;40%乐果乳油1000倍液+15%恶霉灵可湿性粉剂1000倍液。     

新型乳酸制品──核桃酸奶的制作

试验以核桃仁和脱脂奶粉为原料，对核桃仁预处理、发酵剂的制备、酸奶原料配比及发酵时间等工艺进行了探讨，确定合理的制作工艺．研制出芳香浓郁，口感细腻的核桃酸奶。     

通辽市水稻高产优化施肥模型的建立和施肥参数的确定

采用"3414"二次回归最优设计试验方案,研究氮(X1)、磷(X2)、钾(X3)肥配施对水稻产量的影响,并对水稻产量和施肥量关系进行模拟。结果表明:水稻产量(Y)与肥料用量之间的数学模型为Y=301.48+178.19 X1+27.64 X2+40.29 X3-56.18 X12-22.08 X22-13.05 X32+22.87 X1X2+6.14 X1X3+2.93 X2X3,该模型的最高产量施肥量为235.5(纯氮),84.0(P2O5)和84.0(K2O)kg.hm-2,最高产量为8 371.95kg.hm-2,施肥配比为1∶0.36∶0.36。该试验区土地肥力情况为氮素水平低下,磷素、钾素水平中等。肥料利用率氮肥为40.1%、磷肥为17.5%、钾肥为41.0%,土壤养分校正系数分别为0.51(氮)、1.14(磷)、0.56(钾)。     

浩化氮肥+在大豆上应用效果研究

为了更好地验证添加肥料生物活化剂的氮肥肥料（简称氮肥+）,在大豆生产上的应用效果,更好提高肥料利用率,研究氮肥+在大豆上应用效果,确定氮肥+在大豆生产上的最佳用量和施用方法,验证了氮肥+肥料添加的生物活化剂在氮肥中是否能够确切提高肥料利用率,提高大豆单产促进大豆生产发展提供新肥料的施用技术。在本试验条件下每公顷施85%氮肥+38.25 kg、二铵180 kg、50%硫酸钾75 kg增产效果显著,比对照增产147.75 kg/hm2,增产率为4.12%。     

不同生根剂对葛萝槭扦插繁殖的影响

通过不同生根剂处理葛萝槭插穗,对插穗生根率、苗高、地径、生物量进行测定分析,研究了不同生根剂对葛萝槭扦插繁殖的影响。试验结果表明,不同生根剂处理对葛萝槭的生根率、成活率、苗高、地径都有显著影响。以处理四IBA40 mg.kg-1+La+Mo+Zn+Cu+N+P+K浸泡硬枝插穗2 h的效果最好,生根率、地径都最高,分别为58.33%、0.271 cm,生物量以IBA80 mg.kg-1+La+Mo+Zn+Cu+N+P+K效果最好为14.97 g。     

酒糟-单细胞蛋白(SCP)及其对畜禽饲养效应的研究 Ⅳ.酒糟-SCP取代日粮中常规蛋白质饲料对母牛泌乳性能的影响

试验选取黑白花母牛１８头,采用３因子２重复试验设计,研究酒糟－ＳＣＰ对母牛泌乳性能的影响。供试母牛随机分为３组和３种处理。酒糟－ＳＣＰ按Ｎ当量,以不同梯度取代日粮精料补充料中的大豆饼进行饲养试验。取代比例（酒糟－ＳＣＰ％＋大豆饼％）处理１、２和３分别为：０＋２４．０,７．６＋１８．０和１５．２＋１２．０。结果指出,处理２较处理１日泌乳量提高６．１２％（ｐ＜０．０５）;处理３则相应提高１６．５６％（ｐ＜０．０１）。单位泌乳消耗精料补充料,组间差异不显著（ｐ＞０．０５）。试验期末３种试验处理的乳牛其乳脂率和无脂固形物均呈下降趋势。     

I群禽腺病毒间接33K-ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种鉴别I群禽腺病毒（FAVI）灭活苗免疫和野毒感染的检测方法,为FAVI的防控与净化提供技术支撑。【方法】以FAVI 33K重组蛋白为包被抗原,筛选和优化间接ELISA的条件,建立FAVI抗体的间接33K-ELISA检测方法,检验其特异性、敏感性和重复性,并鉴别检测FAVI活病毒感染血清和灭活苗免疫血清各50份。【结果】33K重组抗原最佳包被浓度6.0 μg/mL,包被条件为37℃孵育1 h后4℃过夜,最佳封闭液为5%脱脂奶,封闭时间1.0 h;待检血清稀释度1∶100,抗原抗体最佳作用时间1.0 h;酶标二抗最佳稀释度1∶3000,作用时间45 min。优化后的间接33K-ELISA的阴、阳性临界值为0.316。其特异性、敏感性、重复性试验及鉴别检测结果表明,优化后的间接33K-ELISA具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,且能成功鉴别FAVI感染与灭活疫苗接种。【结论】间接33K-ELISA操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、适于批量检测,可有效鉴别FAVI感染和灭活苗免疫接种,利于挑选出FAVI感染动物,为FAVI的防控与净化提供了新思路和新方法。