细菌对松材线虫繁殖的影响

该研究采用从中国松材线虫病发生的6个疫区、2种主要寄主马尾松和黑松的不同发病期采集病木,从病木上直接分离并鉴定了松材线虫携带的18株属于假单胞属、泛菌属以及其他属的细菌菌株.用双氧水处理松材线虫卵得到无菌卵,在无菌条件下,研究松材线虫携带的细菌对其繁殖的影响.结果表明只有假单胞菌属的细菌菌株能够显著促进松材线虫的繁殖,其他细菌菌株均抑制松材线虫的繁殖.该试验证明了假单胞菌属的细菌在松材线虫病发病过程中起重要的作用,这一发现为松材线虫病的线虫与细菌复合致病假说提供了进一步的实验证据.      

不同根际细菌对南方根结线虫抑制效果的研究

采用稀释平板涂布方法从番茄根结土壤中初步筛选出对明胶有水解作用的菌株。通过各菌株发酵上清液对南方根结线虫二龄幼虫死亡率和虫卵孵化率抑制作用,以及拮抗菌悬浮处理番茄根系30 d后观察番茄根结数量变化,进一步筛选获得高效菌株。通过16S rDNA基因序列分析,对能显著抑制根结线虫生长的2株菌株进行了鉴定。结果表明:筛选出了10株对明胶有明显水解圈的细菌,其中菌株BTG和X5具有较强的明胶水解能力。菌株BTG和X5发酵的上清液处理二龄幼虫24 h后的死亡率比无菌上清液处理死亡率提高了72.13%和62.14%;而用菌株上清液处理14 d后的虫卵孵化率比无菌上清液处理的孵化率降低了38.62%和30.73%。菌株BTG和X5的菌悬液处理的番茄根结数比不加菌悬液对照处理根结数分别降低了80.49%和73.17%。经16S rDNA基因序列分析表明,菌株BTG和X5都属于芽孢杆菌。通过比较各株细菌对二龄幼虫(J2)死亡率,虫卵孵化率及番茄根结数量的影响,筛选出了2株可用于生物防治作物根结线虫的芽孢杆菌。     

黏质沙雷氏菌次生代谢产物杀灭松材线虫效果

为寻找研制新型绿色杀线虫生物制剂,首次报道利用灵菌红素(prodigiosin,简称PGN)对混合虫龄松材线虫的生物活性,灵菌红素是一种广泛分布于环境中的黏质沙雷氏菌的次生代谢产物,试验测定不同浓度下灵菌红素的杀虫活性及对松材线虫卵孵化率的影响。离体杀虫试验结果表明,灵菌红素对松材线虫各虫龄段都有较高的生物活性,32 h时的LC90为(90.24±1.41)mg/L,阳性对照组硫酸铜的LC90为(60.60±1.48)mg/L;在离体虫卵孵化率测定试验中,灵菌红素在较低浓度时就已经表现出较高的生物活性,浓度为9.5 mg/L时,卵的孵化率仅为45.5%,与此同时,对照组的孵化率为97.6%。灵菌红素以其杀虫效率高、环境污染小、来源广泛等优势,在农林业生产中有极好的应用前景。     

几种影响因子与内蒙古西部地区卤虫卵孵化率相关分析

根据对从现场采集的卤虫卵在室内用温度、盐度、H2O2、甲醛等诱导因子刺激提高孵化率试验所得出的数据,采用回归分析方法进行温度、盐度变化及3%H2O2、3%甲醛溶液浸泡与孵化率相关分析,推导出回归方程,并依此绘制出预测趋势线.所推导出的回归方程的相关系数都在0.9以上,为科学合理地开发利用内蒙古西部地区卤虫资源提供了科学依据.     

松材线虫携带的一株细菌分离及其致病性

从患松材线虫病致死的黑松和马尾松病树组织及松褐天牛虫体中分离的松材线虫虫体上均分离到同一细菌菌株 .经致病性、革兰氏染色、菌体形态、培养性状和生理生化反应等测定 ,将致病菌株鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌 .ATBExpression自动鉴定仪的鉴定结果与上述结果相同 .在分离过程中该菌出现频率较高 ,说明是松材线虫携带的主要细菌 .人工接种试验结果显示 ,用无菌线虫或洋葱伯克霍尔德氏菌菌株分别接种的黑松无菌苗不发病 ,而用二者混合接种则使无菌苗迅速发生褐变和萎蔫 .林间利用 6年生黑松进行的接种试验结果证明 ,用无菌松材线虫和洋葱伯克霍尔德氏菌菌株混合接种的黑松与使用野生松材线虫接种的黑松都 10 0 %的患病 .单独用无菌松材线虫接种有 4株发病 ,6株没有发病 .其中发病黑松中不仅分离到了松材线虫 ,也分离到了细菌 ,而没有患病的 6株黑松中仅分离到少量松材线虫 .这说明在野外条件下接种的松材线虫可以通过某种途径重新获得细菌 ,导致了接种的黑松患病 .而接种后无菌松材线虫没能获得细菌的那些黑松就没有患病 ,说明单独无菌松材线虫不能使黑松患病 .这些结果说明松材线虫携带的细菌与松材线虫的致病性有关 .因此 ,可以把松材线虫病看作是线虫和细菌共同侵染引起的一种植物复合侵染病害 .在这     

野生大豆内生芽孢杆菌BHL3501的鉴定及对大豆胞囊线虫的抑制作用

[目的]鉴定野生大豆内生芽孢杆菌BHL3501并研究其对大豆胞囊线虫的抑制作用。[方法]通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA分析,鉴定了从野生大豆根中分离筛选到的1株具有杀线虫活力的内生细菌BHL3501,并研究了BHL3501菌株代谢物不同倍数稀释液对大豆胞囊线虫卵孵化及2龄幼虫活力的影响。[结果]BHL3501菌株初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.。其发酵原液处理24h后对大豆胞囊线虫卵孵化的相对抑制率为98.3%;10倍稀释液处理下相对抑制率为79.5%,均与无菌水对照差异显著。发酵原液处理24 h后,2龄幼虫的校正死亡率为93.1%,各稀释浓度处理均与无菌水对照差异显著。[结论]BHL3501代谢物对大豆胞囊线虫卵孵化有强烈的抑制作用,对其2龄幼虫有较强的毒杀作用。     

不同药剂对南方根结线虫卵孵化及2龄幼虫活性的影响

在室内条件下，采用浸渍法测试质量分数为3%的阿维菌素EC、质量分数为10%的噻唑膦GR、质量分数为15%的灌根阿维·毒EC及质量分数为1.8%的阿维·丁硫克百威EC在不同质量浓度和时间处理下对南方根结线虫卵囊、卵孵化及2龄幼虫活性的影响。结果表明，供试药剂均对线虫卵、卵囊孵化起抑制作用，对2龄幼虫有致死作用。随着药剂质量浓度的增加和处理时间的延长，线虫卵、卵囊孵化的抑制率，2龄幼虫的死亡率显著提高。其中10%噻唑膦GR 25 mg/L对线虫卵囊孵化的抑制效果最好，处理8 h抑制率达76.9%，16 h后达100%；3%阿维菌素EC 10 mg/L对线虫卵孵化有很强的抑制作用，处理8 h达80.9%，16 h后达100%，同时不同药剂对2龄幼虫的活性测试结果表明，3%阿维菌素EC对南方根结线虫2龄幼虫的杀灭活性较强，其LC50为1.970 1 mg/L，15%灌根阿维·毒EC的活性最弱，LC50为919.878 1 mg/L。     

蜡样芽胞杆菌NJSZ-13致死松材线虫的因子

蜡样芽胞杆菌NJSZ-13对松材线虫有较高的致死作用。为了明确蜡样芽孢杆菌NJSZ-13对松材线虫的致死因子，探讨了蜡样芽胞杆菌NJSZ-13对松材线虫的作用机制。首先将NJSZ-13菌悬液处理的松材线虫体表彻底消毒并研磨后涂含青霉素的抗性平板，并通过荧光显微镜观察线虫虫体上含gfp荧光质粒的NJSZ-13菌体以明确菌株在线虫虫体上的存在位置。然后测定菌株与松材线虫混合后上清液及其中胞外蛋白粗提物的杀线活性，并测定虫菌混合液的吸光度，观察菌体繁殖量的变化。结果表明：松材线虫体表彻底消毒研磨后涂布抗性平板未长出菌落，且在松材线虫体表观察到菌株NJSZ-13。菌株与松材线虫混合并静置48 h后，其上清液无显著杀线活性。菌株与松材线虫混合并摇培4 d后，上清液中胞外蛋白粗提物浓缩10倍后具有较高的杀线活性，处理松材线虫48 h后的松材线虫死亡率达到66.23%。粗提物经沸水浴30 min后处理松材线虫，线虫死亡率显著降低，处理48 h后松材线虫死亡率仅有23.88%。菌株与松材线虫混合并摇培1 d后，虫菌混合液的吸光度开始显著高于菌液的吸光度，此后两者吸光度下降明显，摇培2至10 d期间，虫...     

松材线虫对其携带的一株致病细菌产毒的影响

该文报道了以黑松细胞为材料的一种改进的细胞荧光染色显微生测法.用该方法测定了接种松材线虫虫体上分离到的荧光假单胞GcM5-1A菌株或该菌株和无菌松材线虫混合物接种后的愈伤组织水提物的毒性.结果表明,单独接种无菌松材线虫或单独接种该菌株后的愈伤组织水提液未表现出毒性;而接种无菌松材线虫与该菌株的混合物后的愈伤组织水提液与接种野生松材线虫后的愈伤组织水提液的毒性以及该菌株的NB培养液的无细胞滤液的毒性均很强,并且它们三者之间没有显著差异.该结果说明松材线虫在寄主组织中能促进细菌的产毒.向该菌株的NB培养液的无细胞滤液中添加松材线虫后测定其毒性,结果表明无菌松材线虫对其毒性并无显著影响.实验结果表明松材线虫本身不产生毒素,在荧光假单胞菌培养液的无细胞滤液中加入无菌松材线虫未能显著改变其毒性.      

松材线虫携带细菌在疫区和寄主中的分布及致病性研究

作者在江苏、上海、广东、安徽、湖北、浙江等疫区 ,采集了呈现松材线虫病典型症状的黑松、马尾松的病样 ,采用病木组织分离法 ,分离获得松材线虫所携带的细菌菌株 2 4株 ,经鉴定 ,2 4株细菌中 ,假单胞菌属有 11株 ,泛菌属有 6株 ,其余有不解糖消化链球菌、河生肠杆菌、乡间步丘菌和粘质沙雷菌 .由此可知 ,假单胞菌和泛菌分布较广 ,在所有采样疫区感染松材线虫病的马尾松和黑松病死木中都能分离到 ,是普遍存在病木组织中松材线虫携带的主要细菌 .致萎活性测定结果表明 :所有假单胞菌属和泛菌属的菌株对无菌黑松切根苗均有致萎活性 .用假单胞菌和泛菌分别与无菌松材线虫混合接种室内无菌黑松苗和野外多年生黑松 ,结果表明 :用细菌单独接种 ,无菌黑松苗和野外黑松均不发病 ,无菌松材线虫单独接种的无菌黑松苗和野外黑松也不发病或发病轻、慢 ,无菌线虫和致萎细菌二者混合接种能使无菌黑松苗和野外黑松发病快且严重 .由此认为松材线虫携带到寄主组织中的假单胞菌和泛菌属的一些种对松材线虫病有明显的协同作用     

松材线虫BxPrx基因抗H2O2胁迫的转录模式及功能

为探究松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)响应H_2O_2胁迫的分子机制,利用荧光定量PCR测定松材线虫过氧化物还原酶基因BxPrx在不同浓度(2.5、5.0、7.5、10.0mmol/L)H_2O_2胁迫下的转录水平;利用RNA干扰技术,沉默松材线虫BxPrx基因,比较H_2O_2胁迫下BxPrx基因沉默组与非基因沉默组松材线虫存活率的差异。结果显示:松材线虫的存活率与H_2O_2胁迫浓度呈负相关;松材线虫BxPrx在H_2O_2胁迫下的转录水平均提高;在5.0、7.5、10.0 mmol/L H_2O_2胁迫下,经过BxPrx基因沉默处理的松材线虫存活率显著低于对照组。     

多次继代培养的松材线虫分离种致病力变异的研究

通过人工接种2年生黑松(Pinus thunbergii)苗测定松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的致病力,分析经过多次继代培养的松材线虫致病力变异的原因,结果显示:多次继代培养的松材线虫繁殖速度比初代培养的要慢5~6 d,繁殖能力显著下降,保存时间短,显示出多次继代培养的松材线虫活力差。说明了松材线虫致病力与增殖和活力有着极大的关系,继代培养时15次之后致病力会急剧下降。     

松材线虫及携带细菌对黑松复合的侵染

从不同松树上分离松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫,并从松材线虫和小杆线虫体上分离细菌,将线虫无菌化处理后与从线虫体上分离到的荧光假单胞杆菌、产气肠杆菌混合接种无菌黑松苗和愈伤组织。结果表明,单独接种无菌线虫或细菌不能使黑松致病,无菌松材线虫、无菌拟松材线虫只有与有毒性的荧光假单胞杆菌混合接种时才能使黑松无菌苗和愈伤组织发病,细菌通过线虫携带在树体内传播扩散,使松树致病。研究进一步证明了线虫和细菌在松材线虫病致病过程中起协同作用。     

赣南地区松材线虫病发生规律研究

对赣南地区松材线虫病的基本情况进行调查分析,以确定感染松材线虫病枯死松树的症状特点、病木分布和症状变化时间,寻求感染松树发病情况与树种、树龄、松墨天牛及其他虫害、立地条件之间的关系,观察越年枯死型和枝条枯死型松树的 发生特点,探索松材线虫随时间在树体上发展的规律。结果表明：赣南地区松材线虫感病松树以中龄马尾松为主,7~11月为马尾松病症高发期,松树感病2~3个月后表现出症状;枝枯型、越年枯死型马尾松的树龄主要集中在15~25年生之间,比当年枯死型松树的树体略大,且枝叶浓密、病虫害稀少;马尾松越年枯死和枝枯症状还与树形及树皮厚度有关,厚皮类型和宽冠密枝类型的马尾松出现上述症状的频率大于薄皮类型和窄冠疏枝类型。     

松材线虫效应因子基因筛选及Bx-Hh-grl功能研究

  目的  通过对松材线虫效应因子基因的克隆和功能研究,揭示Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用,为防治松材线虫提供理论依据。  方法  用松材线虫Bx1022株系接种黑松,20 d后提取线虫总RNA进行转录组测序,将该转录组设为松材线虫植食阶段转录组。提取由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培养的Bx1022的总RNA进行转录组测序,将该转录组设为菌食阶段转录组。比较分析两个转录组,筛选到差异表达基因Bx-Hh-grl。对Bx-Hh-grl编码蛋白质的跨膜结构域和信号肽进行预测。利用原位杂交检测Bx-Hh-grl表达部位。应用RNAi技术干扰Bx-Hh-grl表达以探究Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用。通过Q-PCR验证,确定RNAi效果显著。将经RNAi处理的松材线虫接种3年生黑松枝条,以未经处理的松材线虫（CK组）和ddH₂O（Mock组）处理的黑松作为对照,比较黑松发病情况进而比较不同处理后松材线虫的致病性差异。  结果  筛选出植食阶段与菌食阶段转录组差异表达基因Bx-Hh-grl,其编码蛋白质具有跨膜结构域和信号肽。原位杂交试验结果显示Bx-Hh-grl在松材线虫食道腺表达,符合效应因子基因特征。Q-PCR结果显示经RNAi处理后的松材线虫Bx-Hh-grl表达量下调,RNAi处理效果显著。接种实验表明,Bx-Hh-grl-RNAi组显症的时间明显晚于CK组,Mock组黑松一直保持健康状态。  结论  Bx-Hh-grl是与松材线虫致病相关的效应因子基因。明确Bx-Hh-grl功能有利于进一步了解松材线虫致病机理,为降低松材线虫危害,防治松材线虫奠定理论基础。      

基于贝叶斯最大熵模型的紫金山松材线虫危害程度时空分析

【目的】对紫金山国家森林公园松材线虫危害程度进行时空预测,旨在为森林病虫害防治规划的制定提供科学依据。【方法】以2004-2008年紫金山国家森林公园风景林96个松材线虫病疫点定点观测数据为主要信息源,与松材线虫危害程度相关的6个生态环境因子作为辅助信息源,采用GIS平台及贝叶斯最大熵（BME）方法,对松材线虫危害程度进行了时空分析。【结果】2004-2008年,紫金山国家森林公园松材线虫病各个疫点的林木平均死亡株数从29.96下降到8.17;在空间分布上,2008-2012年,紫金山西部的疫情得到缓解,中部的疫情得到控制,东部依然较为严重,死亡株数多的高疫点之间的连通性降低。2012年松材线虫病疫点林木死亡株数空间聚类结果表明,交通不便、林龄老化、蓄积量大、松林分布面积较广的紫金山深山区域,是松材线虫危害严重、需要重点防治的区域。【结论】借助于GIS平台和BME方法及少量的定点观测数据,可以对松材线虫的危害程度进行时空预测,这为森林重大有害生物入侵的预防与控制工作提供了科学依据。     

浅谈松材线虫病的发生及防治措施

松材线虫病属于复杂病害系统，涉及到传播活动、媒介昆虫、寄主植物和松材线虫。该病虫 害属于严重森林灾害，诊断方法与防治技术能够对松材线虫的防控效果造成直接影响。此次研究主 要是探讨分析松材线虫病的发生与防治，首先介绍松材线虫病的发生发展与诊断技术，之后提出详细 的防治措施，希望能够对松材线虫的诊断与防治起到参考价值。