松材线虫效应因子基因筛选及Bx-Hh-grl功能研究

  目的  通过对松材线虫效应因子基因的克隆和功能研究，揭示Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用，为防治松材线虫提供理论依据。  方法  用松材线虫Bx1022株系接种黑松，20 d后提取线虫总RNA进行转录组测序，将该转录组设为松材线虫植食阶段转录组。提取由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培养的Bx1022的总RNA进行转录组测序，将该转录组设为菌食阶段转录组。比较分析两个转录组，筛选到差异表达基因Bx-Hh-grl。对Bx-Hh-grl编码蛋白质的跨膜结构域和信号肽进行预测。利用原位杂交检测Bx-Hh-grl表达部位。应用RNAi技术干扰Bx-Hh-grl表达以探究Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用。通过Q-PCR验证，确定RNAi效果显著。将经RNAi处理的松材线虫接种3年生黑松枝条，以未经处理的松材线虫（CK组）和ddH₂O（Mock组）处理的黑松作为对照，比较黑松发病情况进而比较不同处理后松材线虫的致病性差异。  结果  筛选出植食阶段与菌食阶段转录组差异表达基因Bx-Hh-grl，其编码蛋白质具有跨膜结构域和信号肽。原位杂交试验结果显示Bx-Hh-grl在松材线虫食道腺表达，符合效应因子基因特征。Q-PCR结果显示经RNAi处理后的松材线虫Bx-Hh-grl表达量下调，RNAi处理效果显著。接种实验表明，Bx-Hh-grl-RNAi组显症的时间明显晚于CK组，Mock组黑松一直保持健康状态。  结论  Bx-Hh-grl是与松材线虫致病相关的效应因子基因。明确Bx-Hh-grl功能有利于进一步了解松材线虫致病机理，为降低松材线虫危害，防治松材线虫奠定理论基础。 

Screening of effector genes of Bursaphelenchus xylophilus and the function of Bx-Hh-grl