根瘤菌菌剂研究

以豌豆根瘤茵三叶草生物型(Rhizobium leguminosarum bv.trifolii)TA1和华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653R为供试菌,在测定生长曲线的基础上制备了固体茵剂和浓缩液体菌剂.固体茵剂分别以草炭、蛭石和珍珠岩为载体,比较测定了3种茵剂在室温条件下的保存情况.结果表明在武汉3～9月测定时间内,3种茵剂中以草炭菌剂保存效果最好,成活茵数最多,珍珠岩茵剂次之,蛭石菌剂稍差.同时还比较了保存温度、抑菌剂和保护剂等因素对浓缩液体菌剂根瘤菌存活率的影响,筛选并确定了抑茵剂和保护剂的应用浓度.     

枯草芽孢杆菌A干粉菌剂的制备及其对桃果实病害的防治

研究枯草芽孢杆菌A干粉菌剂的制备效果,并将其用于桃果实灰霉病的防治和保鲜,研究其生防效果.鲜桃果实提前刺伤接种干粉菌剂菌悬液,再接种灰霉病菌统计防效;鲜桃果实表面喷洒菌悬液,统计保鲜效果.制备的干粉菌剂活芽孢含量高,可较长时间保存.桃果实刺伤接种4 d后对桃灰霉病防效可达90%以上,表面喷洒储藏8 d后自然防病效果为55.94%.因此,发酵液适宜制备成干粉菌剂,并可长期保存,应用方便,对桃果实病害的防治有一定的效果.     

多功能农药降解基因工程菌剂保藏条件研究

应用多功能农药降解基因工程菌修复农药污染潜力巨大,但由于微生物菌剂的保存一直是个难题,直接影响到微生物菌剂的应用.本实验室构建的基因工程菌属于鞘胺醇单胞菌属,易受到污染而消亡,液态菌剂保藏效果不理想,因此找到一种吸菌量大,并能增加细胞密度和保持菌种存活力的载体显得尤为迫切.通过单一载体吸菌量的测定、不同剂型保藏试验、不同接种量保藏试验、保护剂选择试验等方法研究了不同剂型对微生物菌剂活菌数量及保存期的影响.结果表明草炭是一种优良的同体载体--吸菌量大,可达1011 CFU·g-1,并能促进工程菌的生长,109CFU·g-1接种量接种后120 d仍能使工程菌数量维持在109CFU·g-1水平.通过盆钵试验表明长期保藏后的微生物菌剂能在25 d内将甲基对硫磷和呋喃丹完全降解,应用效果不受保藏影响.本实验为工程菌剂的保存和应用提供了理论参考.     

低温高效降解玉米秸秆复合菌系发酵条件优化及腐解菌剂的研究

为解决北方低温条件下玉米秸秆降解难的问题,利用筛选于锯末的一组玉米秸秆降解复合菌系GF-S72,通过单因素、正交试验及载体生物相容性试验,研究了复合菌系的发酵条件、菌剂载体类型、用量及保存条件。结果表明,复合菌系GF-S72最佳发酵条件为:尿素0.1%、碳氮比20∶1、培养温度10℃、初始p H为8.0、装液量18 m L/150 m L、培养时间6 d、接种量2%。基于试验选取硅藻作为最佳载体,在菌液∶载体=3∶1、菌剂与秸秆配比为0.05 g/2 g,制备低温高效降解玉米秸秆复合型菌剂。试验结果还表明,p H值为8.2、含水量为1.42%、保藏湿度为10%、保藏温度为15℃时,复合型菌剂降解玉米秸秆的效率最高。     

铜绿假单胞菌菌剂载体的筛选

为将铜绿假单胞菌应用于重金属污染环境的生物修复,以硅藻土(1~3 mm)、硅藻土(3~6 mm)、活性炭和轻石为材料,通过测定不同材料的吸水率、菌体吸附与释放作用及制备菌剂的活菌数,筛选出适宜的菌剂载体.结果表明,在设定的载体浓度下(0~20 g·L-1),不同载体的菌体去除率随浓度提高而增大,Q值在4.90%~49.60%之间;载体负载量随浓度提高而减小,L值在923.33~82.83 mg·g-1之间;硅藻土、活性炭的Q值在30 min达到最大.硅藻土(1~3 mm)、硅藻土(3~6mm)、活性炭和轻石的吸水率依次为60.3%、43.3%、23.4%和33.1%;以上4种载体制备的菌剂(菌剂A、B、C和D)的活菌释放率依次为27.4%、28.8%、19.7%和37.1%.室温保存30 d后,菌剂A活菌数为6.25×108CFU·g-1,减少了78.4%,菌剂B活菌数为1.12×1010CFU·g-1,是初始值的5.38倍,菌剂C的活菌数为2.95×108CFU·g-1,减少了73.9%,菌剂D的活菌数为3.61×109CFU·g-1,增殖了127.0%.可见,载体浓度及吸附时间显著影响其对菌体的吸附作用,3~6 mm硅藻土的负载量适中,菌体存活率高,活菌释放率高,可作为铜绿假单胞菌的菌剂载体.     

农药,除草剂和菌剂保存条件对水稻联合固氮工程菌存活率的影响

经不同农药处理４ｈ时,水稻联合固氮菌株ＮＧＨ１１１和ＥＨ１１１３存活率在４８．１％－５９．４％范围内,活菌的浓度大于１０＾９／ｍＬ。用８种除草剂处理联合固氮工程菌,存活率分别为３０．２％－８３．７％。在液体菌剂中加４％甘油,于室温条件下保存２个月,存活率为１０％,活菌数达１０＾８／ｍＬ。固体菌剂以草炭为介质,先于２８℃培养４－５ｄ,后置４℃保存３个月,存活率为５０％,活菌数达１０＾９／ｇ。     

多菌灵降解菌djl-6和啶虫脒降解菌D-2液体菌剂的研发

以长期受多菌灵和啶虫脒农药污染的土壤中分离筛选得到的多菌灵降解菌株庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii sp. nov.)djl-6和啶虫脒降解菌株噬染料菌(Pigmentiphaga sp.)D-2为供试菌株,研究了降解菌菌剂的不同保存剂型与初步应用的情况。结果表明,2株降解菌均以苯甲酸钠作为防腐剂的处理效果最好,能维持活菌数较高且不产生杂菌污染。降解菌djl-6复配保护剂的最佳使用浓度:0.30%柠檬酸钠、0.30%羧甲基纤维素、0.20%CaCl_2。降解菌D-2复配保护剂的最佳使用浓度:0.20%糊精、0.20%柠檬酸钠、0.30%CaCl_2。与对照相比,添加保护剂后,菌株djl-6、菌株D-2活菌数分别够提高32.03%、38.70%。2株菌的液体菌剂保存45 d后,降解菌djl-6能够在10 d内将土壤5 mg/kg多菌灵降解95.23%,降解菌D-2能够在10 d内将土壤5 mg/kg啶虫脒降解92.75%,有效延长了液体菌剂的保存期。     

人参锈腐病生防用菌剂制作及效果检测

为探明制作的拮抗菌(Y-S-Y12、YBN13和YBN18)菌剂的有效性,检测了不同时间段菌剂中的活菌数目、菌剂保存100d后的抑菌效果,试验结果表明:Y-S-Y12菌株和YBN18菌株可选用滑石粉和高岭土制作菌剂;YBN13菌株可选用滑石粉、高岭土和活性炭制作菌剂。田间防病试验结果表明:Y-S-Y12菌剂以及Y-SY12+YBN13混合菌剂、Y-S-Y12+YBN18混合菌剂对人参锈腐病菌具有较高防病效果,防效达到了72.04%~77.42%,并对人参生长有明显的促进作用。     

固定化木质素降解菌对园林废弃物堆肥的影响

  目的  以生物质炭和米糠为载体,将木质素降解菌No.11通过固定化的方式制备促进园林废弃物堆肥腐熟的固体菌剂。  方法  通过单因素试验探究接菌量(5%、10%、15%、20%、25%)、保护剂体积分数(0、4%、8%、12%、16%、20%)、含水率(5%、10%、15%、20%、25%)的优化范围,再通过正交试验在该范围内寻找固体菌剂的最佳制备条件。以市售常见有效微生物复合菌(EM菌)菌剂为对比,将制得的菌剂添加到园林废弃物堆肥中,探究其对木质素、纤维素降解和相关酶活力的影响。  结果  木质素降解菌No.11的最佳固定化条件为:接菌量10%、保护剂体积分数8%、含水率15%,制得的菌剂中有效活菌数达1.26×1011 CFU·g?1。园林废弃物堆肥中添加自制菌剂后木质素降解相关酶(漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶)的活力均得到提高。与添加EM菌相比,木质素降解率提高8.69%;与不添加菌剂相比,木质素降解率提高23.91%,纤维素降解率提高8.34%,堆肥产品达到腐熟标准。  结论  通过固定化木质素降解菌制备的固体菌剂,其有效活菌数符合GB 20287?2006《农用微生物菌剂》的相关要求,将菌剂添加到园林废弃物堆肥中可提高木质素和纤维素降解率,促进堆肥产品腐熟。图3表3参36     

生物炭固定化石油降解菌剂的制备

以前期筛选的高效石油烃降解菌多食鞘氨醇杆菌（ Sphingobacterium multivorum）为目标微生物,选择多种生物质材料（松针、玉米芯、草）为前体物制备生物炭载体,采用吸附法制备固定化石油降解菌剂,探索获得较高除油效果菌剂的制备条件。结果表明：以松针及其生物炭为载体的菌剂除油效果优于玉米芯系列和草系列;以生物炭为载体的菌剂除油效果优于以其前体物为载体的菌剂。由于玉米芯易在当地大量低成本获得,考察了玉米芯炭固定化菌剂的制备条件：300℃热解玉米芯4 h,以粒径＞200目的玉米芯炭为载体,投加量为1 g／100 mL的固定化培养基,菌接种量为5％,固定时间为18 h,转速160 r／min,温度30℃,离心后沉淀用无菌生理盐水清洗2次获得菌剂。该菌剂对5 g／L原油培养基的周除油率是47．6％～50．7％;菌剂含降解菌5．8×109 CFU／g,吸附法对菌的固定效率为80．7％,降解菌主要附着区域为玉米芯炭表面及孔。该菌剂可为进一步修复油田石油污染土壤提供技术支撑。     

致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05 Pfs基因的克隆、功能序列分析及原核表达

采用PCR技术从致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05基因组中扩增得到甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)基因的全序列,对其功能序列进行分析,同时与其他细菌相应序列及编码的氨基酸进行同源性分析,构建该基因的原核表达载体,对表达蛋白进行反应原性分析。结果显示:XJ05的Pfs基因全长696bp,与XJ01、XJ08、XJ11,与屎肠球菌TX 2466之间的同源性在99.1%以上,其中,XJ05与V583为100%,且关键的功能序列相同,与肺炎链球菌同源性在55.8%以上、霍乱弧菌同源性在55.0%以上;pfs基因编码231个氨基酸,XJ05、XJ01、XJ08、XJ11与肺炎链球菌、霍乱弧菌、粪肠球菌V583、屎肠球菌TX 2466的同源性在86.43%以上;构建的重组质粒经诱导后表达蛋白分子量为28ku,Western blot检测显示特异性条带。结果表明,表达的融合蛋白具有良好的反应原性。     

低温胁迫对水稻再生芽抗冷性的影响

以能够在自然条件下越冬再生的粳稻(WD1)为试验材料,以湘粳2号(X J2)为对照。在低温处理前、低温处理后和低温处理恢复后3个阶段,对2个粳稻品种再生芽中过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等保护酶系活性的变化及丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)含量和细胞膜透性进行测定分析,结果表明:低温胁迫后WD1的抗冷性相关指标优于X J2,WD1主动调节适应低温环境以及忍耐低温的能力较强。     

羔羊肝脏IGF-I和IGF-I R基因表达的发育性变化研究

【目的】通过对羔羊IGF-Ⅰ和 IGF-ⅠR基因表达的发育性变化的研究，为羔羊生长发育规律提供理论依据。【方法】选择2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只（共54只，120日龄只有新疆细毛羊），测体重后屠宰，采取肝脏，用荧光实时定量PCR法，以GAPDH基因为内标，检测IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因的发育性变化，并进行品种之间比较。【结果】（1）肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量都呈先升后降的趋势，其中雄性哈萨克羊肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量从2日龄到60日龄持续上升，60日龄后开始下降，90日龄的表达量显著低于前三个时期（P＜0.05）；雄性新疆细毛羊肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量从2日龄到90日龄持续上升，90日龄后开始下降，120日龄的表达量显著低于60日龄（P＜0.05）。雄性哈萨克羊肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量在2日龄时与新疆细毛羊差异不显著（P＞0.05），在30～60日龄期间都显著高于新疆细毛羊（P＜0.05），在90日龄时极显著高于新疆细毛羊（P＜0.01）；（2）肝脏IGF-ⅠR基因的表达量都呈现持续下降的趋势，其中哈萨克羊肝脏IGF-ⅠR基因在2日龄的表达量最高，然后就持续下降，2日龄时的表达量与其他各时期差异显著（P＜0.05）；新疆细毛羊肝脏IGF-ⅠR基因在2日龄的表达量最高，然后就持续下降，2日龄时的表达量与其他各时期差异显著（P＜0.05）。哈萨克羊肝脏IGF-ⅠR基因的表达量在2和90日龄时都极显著低于新疆细毛羊（P＜0.01）。【结论】羔羊肝脏组织中IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR的基因表达量有特定的发育模式，IGF-ⅠR的基因表达水平的变化不依赖IGF-Ⅰ的基因表达水平。     

落叶型大丽轮枝菌T-DNA插入突变体库的构建

采用ATMT技术建立大丽轮枝菌落叶型菌株XJ2008菌株的T-DNA插入突变体文库,共获得6 043个突变体。从中随机挑选104个突变体,以野生型XJ2008菌株为参照,评价其致病性、菌落生长速率、分生孢子及微菌核的产生能力等。结果表明,有12.5%的突变体丧失产孢能力,4.8%的突变体的生长速率显著减慢,8.7%的突变体的生长速率显著加快,12.5%的突变体丧失产生微菌核的能力,47.1%的突变体的致病性显著低于野生型菌株XJ2008,且突变体2-736、2-740、2-745的病情指数分别约为野生型菌株XJ2008的0.184、0.168和0.197倍。该突变体库突变体遗传稳定性好,性状多样性丰富。     

一株具有农药降解潜能的鞘氨醇单胞菌的鉴定

[目的]为鞘氨醇单胞菌属的开发利用提供依据。[方法]通过菌株培养、BIOLOG微生物鉴定系统鉴定和16S rRNA序列同源性分析,对1株具有农药降解潜能的鞘氨醇单胞菌XJ进行鉴定。[结果]XJ菌株在LB和MAC培养基上的生长、革兰氏染色反应、氧化酶和TSI试验结果表明,该菌株为革兰氏阴性非肠道菌;对BIOLOG微生物鉴定系统中的95种供试碳源,XJ不能利用的碳源有37种（包括多羟醇和菊糖）,符合鞘氨醇单胞菌的生理生化鉴别特性;XJ菌株可扩增出1500bp左右的16S rRNA基因片段,且其16S rRNA基因序列与登陆号为AF331661（Sphingomonas yanoikuyae）的菌株最接近。[结论]供试菌株被鉴定为矢野口鞘氨醇单胞菌XJ菌株（S.yanoikuyaeXJ）。     

Biological characteristics of Pestalotiopsis versicolor，the agent of bayberry twig blight in Southern China

To study the biological characters of Pestalotiopsis versicolor, one of the agents of bayberry twig blight disease, the effects of media type, carbon （C） and nitrogen （N） sources, temperature, pH, and light on P. versicolor were examined to determine optimal conditions for mycelial growth and sporulation. Three independent isolates showed a similar trend of growth and sporulation with different C and N sources. However, the growth rates varied significantly among seven agar media. Fungal growth rates were the highest on potato dextrose agar （PDA） and potato sucrose agar （PSA）. The fungi grew fast on bayberry fruit extract agar （BFA） but sparsely. Growth rates were moderate on oatmeal agar （OMA） and Czapek\|Dox agar （CDA）, and low on bayberry leaf extract agar （BLA） and bayberry branch extract agar （BBA）. Sucrose, dextrose, maltose, lactose, mannose, levulose, sorbose, and starch were optimal carbon sources, whereas glycerol and ribose were moderate, and xylose was poor for the fungus. Potassium nitrate, ammonium nitrate, urea, and all of the amino acids tested （i.e. cysteine, glycine, tyrosine, histidine, alanine, arginine, glutamate, and proline）, were good sources of nitrogen for the fungus. Growth occurred between 10 and 30℃ and was optimal between 25 and 28℃. Growth was normal and no significant difference between pH 5 to 10 was found. The quantity of conidia from two isolates （XJ27 and XJ42） on PDA after 10 days growth under light was significantly greater （P< 0001） than that under darkness. In contrast, sporulation of the other isolate, RA2\|1, was unaffected by light. P. versicolor has wide adaptivity to media, carbon, nitrogen, temperature and pH, while light influences sporulation of some isolates. These results will be helpful to understand the epidemiology of the disease and to develop a reasonable disease management strategy in reforestation areas.     

产甲烷细菌保藏方法研究

[目的]研究适合产甲烷细菌保存的方法。[方法]采用严格厌氧技术,对从贵阳周边沼气池中初步筛选的28株产甲烷细菌进行保存,经过短期、长期保存方法试验,测得短期保藏6个月和12个月后,菌株存活率为71.4%,18个月为67%;长期保藏18个月菌株存活率为57.1%。[结论]结果为重新开展产甲烷细菌保藏方法的研究奠定了基础。     

河北省农村老年人生活状况研究——基于河北省XJ市JC镇的调查

农村是我国养老保障体制有待完善的1个重要区域,农村老年人的生活状况值得关注。通过对河北省XJ市JC镇的调查,多方面展现农村老年人的生活状况,并结合农村老年人的养老问题作进一步的思考。     

温度对槟榔保鲜的影响

[目的]研究槟榔保鲜的适宜温度,为槟榔保鲜提供参考.[方法]以槟榔鲜果为材料,采用不同温度处理,通过测定低温条件下果实含水量、表皮叶绿素含量及其内含物的变化,筛选出槟榔保鲜的最适温度处理.[结果]槟榔鲜果贮藏期间果实水分含量、可溶性糖含量及果皮叶绿素相对含量均呈逐渐下降趋势,而粗纤维含量呈明显上升趋势;经低温处理使果实水分含量、可溶性糖含量及槟榔果皮叶绿素相对含量下降平缓,粗纤维含量上升减慢.其中以常温处理槟榔黄化与老化速度最快,以11℃低温处理保鲜效果最明显.[结论]低温处理对对槟榔鲜果贮藏具有一定效果,可延长槟榔鲜果供应期,且以11℃低温效果相对较好.     

禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4的M基因的序列分析

利用RT-PCR技术对禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4的M基因进行了扩增与克隆,得到了全长核苷酸序列为1 016 bp的M基因,序列分析表明,M基因最大的开放阅读框位于19～1 000碱基;M1蛋白位于19～777碱基,编码252个氨基酸.M2蛋白位于19～44碱基和733～1 000碱基,编码97个氨基酸.同源性分析显示,A/Duck/XJ/4 株M基因的核苷酸序列和氨基酸序列与所选H5N1亚型的参考毒株以及所选不同HA亚型的参考毒株均有很高的同源性.