河南省大蒜病毒病的分子检测

为了明确引起河南省大蒜病毒病的病原,采用RT-PCR方法对采集的表现矮缩症状的大蒜样品分别用5对引物进行检测,结果表明,在大蒜样品中同时检测到洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)、韭葱黄条病毒(leek yellow stripe virus,LYSV)和青葱潜隐病毒(shallot latent virus,SLV)3种病毒,没有检测到大蒜普通潜隐病毒(garlic common latent virus,Gar CLV)和青葱X病毒(allexiviruses)。根据测序结果进行序列和遗传进化分析发现,河南省OYDV分离物与SLV分离物在进化树上都单独形成一分支,其中OYDV与其他分离物的核苷酸同源性为94.8%~96.9%,SLV与其他分离物的核苷酸同源性在86.5%~88.5%,河南省LYSV分离物与墨西哥分离物的同源性达到99.4%,亲缘关系最近。试验中同时检测到3种病毒,说明河南省大蒜病毒病为多种病毒复合侵染。     

中国主要大蒜品种和品系的病毒检测

对 96份大蒜品种和品系进行了病毒病症状及有关农艺学性状观察记载 ,其中 6 6份用 5种病毒抗血清作Dot-ELISA和免疫电镜检测及观察 ,发现大蒜不同品种 (系 )对不同种类病毒侵染存在明显差异 ,84.8%的大蒜品种 (系 )受 2种以上病毒侵染。韭葱黄条斑病毒 (LYSV) ,洋葱螨传潜隐病毒 (OMbFV)和洋葱黄矮病毒 (OYDV)是侵染中国大蒜的主要病毒种类 ,大蒜普通潜隐病毒 (GCLV)和青葱潜隐病毒 (SLV)也有检出     

嘉定白蒜的病毒检测

为明确嘉定白蒜在种植区的病毒情况,从嘉定白蒜两个种植基地采样,分别提取总RNA,然后反转录。采用RT-PCR方法检测洋葱黄矮病毒(OYDV)和大蒜普通潜隐病毒(GCLV)。结果表明:根据GCLV中间保守序列设计3对特异性引物,在两处样品中均分别扩增到300、710和450bp片断。将其中450bp片断克隆后测序。测序结果与GenBank上的GCLV基因序列比对,发现其同源性达到95%。由此确认嘉定白蒜中含有GCLV。根据OYDV中间保守序列设计5对引物,在两处样品中均未扩增到可检测的片断,表明嘉定白蒜中不含OYDV。     

应用多重RT-PCR检测甘肃‘成县迟蒜’中的大蒜潜隐病毒和洋葱黄矮病毒

根据大蒜潜隐病毒(garlic latent virus,GLV)和洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)的外壳蛋白基因核苷酸序列分别设计2对特异性引物,在单重RT-PCR检测的基础上,建立同时检测GLV和OYDV的多重RT-PCR技术体系.结果表明:该方法可从带病的甘肃‘成县迟蒜’大蒜样品中扩增出GLV(849bp)和OYDV(571bp)的2条特异性片段.GLV扩增产物与GenBank中登录的其他分离物核苷酸同源性在90.00%～99.76%,OYDV扩增产物与其他分离物核苷酸的同源性为90.00%～98.00%.     

河南大蒜韭葱黄条病毒的分子鉴定及其系统进化分析

2019年本研究对河南大蒜病害进行调查时发现当地大蒜病毒病发生比较普遍,为明确病原种类,我们对田间样品进行采集(累计采集疑似病样38份)并利用葱蒜类病毒引物对其进行了RT-PCR检测。结果发现,在用韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LYSV)引物检测时,有33份样品中检测到1条大小为304 bp的目的条带,为了进一步确定检测到的病毒为LYSV,本研究对其外壳蛋白基因(CP)序列进行了克隆,结果发现其序列全长864 bp,编码1个由289个氨基酸组成的相对分子质量约32 300的蛋白质。CP基因序列构建的系统进化树结果分析显示,其与LYSV其他分离物共同聚类到1个大分支,表明该病毒属于LYSV的1个分离物;同时序列分析结果也显示LYSV分为2支,本研究检测到的LYSV河南分离物与中国其他分离物共同聚类到1个分支,其中与中国厦门等地分离物同源性最高,而与之前检测到的河南分离物同源性相对较低。这些结果表明本研究在河南大蒜中检测到的病毒是韭葱黄条病毒,虽然之前在河南也有该病毒侵染大蒜的报道,但本研究检测到的分离物与之前报道的分离物之间差异比较大,暗示河南大蒜上可能出现了新的LYSV类型或株系,生产上应当重视。     

河北省番茄病毒病种类鉴定及分布

[目的]鉴定河北省番茄上主要病毒病种类,明确病原和分布。[方法]采用分子生物学技术及免疫试纸条技术,对2016—2018年采自河北省8个县市18个番茄主产区的番茄样品进行病毒病种类鉴定。[结果]采集的番茄样品中共检出3种病毒,分别为番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus)、番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus)、番茄花叶病毒(tomato mosaic virus)。其中TYLCV是目前河北省危害最严重、分布最广泛的一种病毒,各调查地区均能检出,检出率为63.29%,其次为ToCV,检出率为17.19%,田间主要表现与番茄黄化曲叶病毒混合侵染;ToMV检出率仅为0.09%,为零星发生。[结论]河北省番茄病毒病的主要种类为粉虱传播的番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒。     

韭葱黄条病毒黑龙江分离物外壳蛋白基因克隆与序列分析

韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LYSV)是大蒜上的重要病毒病害,几乎分布于全国所有大蒜种植区域,严重影响大蒜的产量和品质。对其建立RT-PCR分子检测体系以及对其外壳蛋白(CP)基因进行序列分析尤为重要。根据已报道的LYSVCP基因的核苷酸序列设计合成1对引物,以带毒植株总RNA为模板,应用RT-PCR方法,克隆了LYSV黑龙江分离物(LYSV-HLJ)CP基因全长cDNA序列。结果表明,LYSV-HLJCP基因全长885bp,编码295个氨基酸残基;与GenBank中其他不同分离物的CP核苷酸序列同源性为79.7%～88.6%,氨基酸序列同源性为83.7%～93.1%。依据LYSVCP氨基酸序列建立系统进化树,将LYSV不同分离物划分为4个类群,LYSV-HLJ与韩国和巴西大蒜上的LYSV有较近的亲缘关系,同属于ⅳ类,表现出一定的寄主相关性。     

干旱和温度胁迫对大蒜生理生化特性及病毒LYSV和OYDV积累的影响

【目的】探明干旱和温度胁迫对大蒜病毒积累的影响.【方法】采用qRT-PCR等方法对干旱和温度胁迫下大蒜叶片生理生化特性以及LYSV和OYDV两种病毒的积累量进行测定.【结果】干旱和温度胁迫下,叶绿素含量、净光合速率和气孔导度显著低于对照(土壤含水量20%,温度22℃),对可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量以及SOD活性呈现不同程度的影响;干旱胁迫下,LYSV和OYDV的积累量均随着胁迫程度的增加显著增加,在10%土壤含水量下,LYSV和OYDV分别达到8.60×106和6.54×106;温度胁迫下,低温4℃显著阻止了LYSV和OYDV的积累,高温35℃也对LYSV的积累量(1.78×106)起阻碍作用,而对OYDV的积累量(5.00×106)起促进作用.【结论】干旱和温度对大蒜LYSV和OYDV积累的影响不尽相同,对于其影响机制还需进一步的研究.     

如何防止茶陵紫皮大蒜种性退化

<正>茶陵紫皮大蒜是特色农产品,以香、辣、脆而享誉国内外。而近些年来,茶陵紫皮大蒜种性退化相当严重。茶陵紫皮大蒜种性退化的主要原因是病毒侵害。通过对茶陵紫皮大蒜取样进行病毒检测,发现主要病毒有大蒜潜隐病毒(GLV)、韭葱黄条病毒(LYSV)、洋葱黄矮病毒(OYDV)和大蒜病毒(GV)。从2013年起,茶陵县农业局与株洲市农业科学研究所进行了合作,利用茎尖脱毒技术进行脱毒和种球繁殖。其主要技术路径:选取品质较好的种球进行茎尖脱     

黑龙江省马铃薯病毒病的普查及鉴定

通过对黑龙江省近30个县市马铃薯主产地的系统调查采样,经鉴别寄主反应、血清学测试、电镜观察、种薯传毒试验,系统鉴定出马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯Y病毒(Ptato virus Y,PVY)、马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)、马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)、马铃薯A病毒(Potato virus A,PVA)、马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacoo mosaic virus,TMV)、烟草脆裂病毒(Tobacoo rattle virus,TRV)、马铃薯Y病毒坏死株系(PVYn);标样K-04和番茄黑环病毒(Toma-to black ring virus,TBRV)有强烈的阳性反应,球形粒体,直径约30 nm,但在田间表现蕨叶症状,可认为该标样疑似番茄黑环病毒引起,或可能携带番茄黑环病毒。TRV,PVYn为局部分布,马铃薯蕨叶病呈局部零星发生。经研究证实至2005年黑龙江省无马铃薯黄矮病毒(Potato yellow dwarf virus,PYOD)马铃薯帚顶病毒(Potato mop top virus,PMTV)、安第斯马铃薯潜隐病毒(Andean potato latent virus,APLV)、安第斯马铃薯斑驳病毒(Andean potato mottlevirus,APMV)、马铃薯V病毒(Potato virus V,PVV)、马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)的分布,没有发现侵染马铃薯的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)和苜蓿花叶病毒(Alfalfa mosaic virus,AMV)。     

大蒜茎尖组培苗的检测

从市售阿城紫皮蒜生长的叶片经ＰＥＣ沉淀差速离心提纯,获得复合病毒制剂,得率为４．９０ｍｍ（１００ｇ）－１叶。电镜观察病毒粒体为长度５５０～８００ｎｍ的线状物,经抗血清测定主要为洋葱黄矮病毒（ＯＹＤＶ）和大蒜潜隐病毒（ＧＬＶ）。用复合病毒制剂免疫制备的抗血清效价为１０２４～２０４８。ＯＹＤＶ抗血清检测茎尖脱毒组培苗,脱毒率为５０％左右,用ＧＬＶ抗血清检测,脱毒率为９５％～９７％,复合病毒抗血清检测结果与ＯＹＤＶ相同。证明复合病毒抗血清可用于组培苗的检测。组培脱毒大蒜在田间种植１年后发病率为５０％,３年后达８０％。茎尖组培脱毒率不高。需用抗血清逐株检测挑选,淘汰病苗,才能获得健康无毒的大蒜群体。     

Detection of GLV, OYDV and LYSV in potato onion （Allium cepa L., Aggregatum group） by RT-PCR

Three pairs of primers were designed and synthesized from nucleotide sequences of garlic latent virus (GLV), onion yellow dwarf virus (OYDV), and leek yellow stripe virus (LYSV) by using PCR primer design software. The expected fragments about 170 bp, 287 bp, and 191 bp were amplified by RT-PCR for GLV, OYDV, and LYSV, respectively in disease-infected plants of potato onion (Allium cepa L., Aggregatum group), but such fragments were not obtained from healthy-looking plants and virus-free seedlings of shoot-tips. The amplified products of GLV, OYDV and LYSV were cloned into pGEM-T vectors, and transformed into Escherichia coli. JM109. The recombinant plasmids were obtained and sequenced. The nucleotide sequences were compared with corresponding viral nucleotide sequences reported in GenBank by performing a NCBI BLAST. The analysis showed that their homology attained 75% to 90%,89.5% to 96.1%,and 91.6% to 96.3% in GLV, OYDV, and LYSV, respectively. The total RNA of 6.34 μg·μL~(-1) from infected plants was diluted to a series of 10~(-1) to 10~(-5) and the detection sensitivity of RT-PCR was 10~(-4) (about 4 ng). Thus, a method of identification and detection by RT-PCR of GLV, OYDV, and SLYV was established.     

云南、黑龙江两省南瓜主要病毒病原种类鉴定

应用电镜、酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法检测了云南、黑龙江两省南瓜病毒病病原种类。研究结果表明,云南省南瓜病毒病原种类较多,检测到番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papararingspot virus W,PRSV-W)、西葫芦黄色花叶病毒(Zucchini yellow mosaicvirus,ZYMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、粉虱传双生病毒(Whitefly-transmitted geminivirus,WTGs)。黑龙江省检测到两种病毒:西瓜花叶病毒2号(Watermelon mosaic virus 2,WMV-2)、黄瓜花叶病毒(CMV)。两省样品的电镜检测均观察到了番茄斑萎属病毒(Tospovirus)。     

大蒜病毒病原的鉴定及组培脱毒研究

系统鉴定的结果表明,为害大蒜的病毒有GLV,GMV和TMV。GMV引起大蒜花叶及条纹花叶,而GLV在大蒜上表现潜隐症状。GLV的紫外吸收峰最低在245.2nm,最高在275.7nm,其A260/280为1.36。GLV和GMV粒子大小分别为548～700×13nm和750～773×13nm。德国GLV抗血清仅与GLV有阳性反应。采用0.10～0.25mm生长点能完全脱除病毒,而用0.30～0.70mm有部分脱毒效果。     

蒜苔贮藏过程中气体成分变化规律

试验选用 4种不同的蒜苔保鲜袋分别对山东苍山及黑龙江阿城蒜苔进行了贮藏试验。装量为 15 kg及 2 0 kg。以普通聚乙烯袋做对照 ,通过对贮藏过程中各袋内气体组成的测定 ,确定了合理的放风时间 ,并从中筛选出一种最佳的蒜苔气调保鲜袋