瓜果腐霉毒素除草活性物质的初步分离

为分离纯化瓜果腐霉毒素中的除草活性物质,本研究利用吸附树脂对瓜果腐霉毒素进行了吸附,利用薄层层析对其粗毒素样品进行了初分离,在展开剂乙酸乙酯-甲醇-石油醚-乙酸为30∶5∶25∶1时,可以分离出5个条带,生物测定结果表明,其中M1和M2条带的除草活性较强。对M1进行了HPLC分析,结果表明,该样品可分离出2种除草活性组分,其保留时间分别为9.89 min和14.98 min,其中保留时间为14.98 min的组分与已报道的邻苯二甲酸二甲酯相同。     

伽师甜瓜猝倒病生防放线菌的筛选

【目的】分离、鉴定引起伽师甜瓜(Cucumismelo L.)猝倒病的病原菌,筛选可用于甜瓜猝倒病生物防治的拮抗性放线菌。【方法】采用组织分离法分离伽师甜瓜猝倒病的病原菌,用琼脂块法和无菌发酵滤液抑菌性试验筛选拮抗瓜果腐霉的生防放线菌,搭片法观察生防放线菌菌丝与瓜果腐霉菌丝间的相互作用。【结果】伽师甜瓜猝倒病的病原菌为瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum);筛选出7株对瓜果腐霉具有显著拮抗性的生防放线菌,其中8号放线菌对瓜果腐霉的拮抗环宽度为13.3mm,其无菌发酵滤液对瓜果腐霉的抑菌率在培养120h时高达88.3%。【结论】7株生防放线菌对由瓜果腐霉引起的伽师甜瓜猝倒病均有显著抑制作用;7株生防菌可通过产生抗菌物质或缠绕、消解菌丝的方式抑制瓜果腐霉生长。     

坪草腐霉病菌毒素产生除草活性物质的条件优化

从多年生黑麦草上分离得到了5株腐霉菌(编号依次为PA1、PA2、PA3、PA4、PA5),通过鉴定,PA1和PA5菌株为瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidermatum)。将所得5株菌株分别在PD培养基、PS培养基、玉米粉培养基、改良Fries培养基、Czapek-Dox培养基和Richard培养基中进行培养,所得培养滤液、粗毒素对马唐和反枝苋的除草生物活性进行了测定。结果表明,在PD培养基中所产生的毒素除草生物活性最强,在供试的5株菌株中以PA1菌株所产生的毒素除草活性最强。PA1菌株在PD培养基中培养所得粗毒素对马唐、反枝苋、虎尾草、金色狗尾草、野燕麦、稗草、藜7种杂草的生长有明显的抑制作用;对玉米、小麦有轻微药害,而对大豆安全。试验发现,PA1菌株产毒的适宜pH值为7.0,以培养5d的毒素除草活性最强;在100~150r/min条件下,振荡培养所得粗毒素的除草活性要明显高于静止培养。     

大蒜白腐菌粗毒素活性分析与组分鉴定

以大蒜白腐菌为材料，分别用正丁醇和乙酸乙酯萃取得到了大蒜白腐病菌粗毒素，采用气相色谱对粗毒素进行了物质组分分析。结果表明，用正丁醇提取的大蒜白腐病菌粗毒素活性高于乙酸乙酯提取的大蒜白腐病菌粗毒素，但二者均可引起大蒜叶片病斑产生，表明其具有生物活性；其中有4种物质被鉴定，分别为2,4-二甲基庚烷、十一烷、3,5,5-三甲基-2-环己烯-1-酮、邻苯二甲酸丁基酯2-乙基己基酯。     

坪草腐霉枯萎病菌(Pythium aphanidermatum)的生物学特性及诱变菌株毒素的除草活性研究

为了明确坪草腐霉枯萎病菌PA1菌株的生物学特性及其诱变菌株所产生毒素的除草活性,对PA1菌株的生长适度、保存条件及孢子囊和藏卵器的产生条件进行了研究,测定结果发现,PA1菌株菌丝生长的最适温度为34℃,菌种保存的适宜温度为10℃～15℃;20℃条件下,在CMA培养基和燕麦粉液体培养基中可以大量产生藏卵器和卵孢子;5℃～15℃条件下,可以产生孢子囊。利用紫外线对PA1菌株的菌丝进行紫外诱变,得到了18株诱变菌株(PAM 1～18)。通过生长速率测得,PAM1菌株的生长速率最快,诱变菌株所得粗毒素对马唐和反枝苋的生长抑制作用结果表明,以PAM1的除草活性最高。对PAM1诱变菌株进行了发酵试验,在72 h的发酵过程中,发酵液的pH值逐渐降低;用发酵液制备所得粗毒素对马唐、反枝苋具有很好的除草活性。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定

【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的DON毒素降解率达到75.47%。【结论】选出的DON高效降解菌株徳沃斯氏菌,不但对液体培养基中的DON毒素具有很好的降解作用,对饲料中DON毒素也有很好的降解效果。这为真菌毒素的生物脱毒处理提供了可行的方法。     

灰葡萄孢诱变菌株毒素的除草活性研究

 对灰葡萄孢BC4菌株进行紫外线诱变得到了15个诱变菌株, 经测定筛选出BC4-1、BC4-2和BC4-15等3个诱变菌株中以BC4-1菌株效果最好。试验发现，用于毒素产生的PD培养基的pH 值对产毒能力影响很大，以pH 4.0最优。用三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯萃取培养滤液制备BC-粗毒素，生物测定结果表明，以乙酸乙酯萃取所得粗毒素对杂草种子萌发及生长抑制作用最强。通过柱层析法和HPLC法分离和纯化除草活性组分,得到1个在271 nm有最大UV吸收的化合物,该组分在100 mg·L-1浓度下对马唐的生长具有强烈的抑制作用，在50 mg·L-1浓度下可完全抑制马唐和反枝苋种子的萌发。     

稻曲毒素A的相对含量分析及其与致病力的相关性

【目的】明确稻曲菌粗毒素的主要活性组分;比较不同地区稻曲球的稻曲毒素A含量;研究不同稻曲菌菌株产毒素A量与致病力的相关性。【方法】分别用丙酮、甲醇、水等不同极性溶剂从稻曲球中萃取制备粗毒素,并用小麦胚根抑制法检测其活性;高效液相色谱（HPLC）检测采集自全国224份稻曲球样品的毒素A含量,紫外扫描及液相色谱-质谱（LC-MS）验证稻曲毒素A;用人工接种的方法,测定52个稻曲菌株对感病品种两优培九的致病力;应用SPSS统计软件对稻曲菌产毒素A量与致病力进行相关性分析。【结果】用水和甲醇萃取得到的粗毒素活性较高,丙酮最低;质谱测定组分Ⅱ的分子量为673.9,结合紫外吸收光谱初步证明粗毒素的主要活性成分是稻曲毒素A。采集自不同地区的224份稻曲球样品的毒素A含量有明显差异。不同稻曲菌株的产毒素A量与致病力相关性不显著（相关系数R=0.222,显著性概率P=0.114）。【结论】稻曲球的活性成分中含有稻曲毒素A;不同地区稻曲球中的毒素A含量有显著差异;稻曲菌菌株的产毒素A量与其致病力没有显著相关性。     

粗皮侧耳粗毒素的杀线虫活性及其基本特性

 粗皮侧耳 (Pleurotusostreatus)菌物能产生杀线虫毒素。菌丝细胞提取物和菌丝液体培养滤液对植物寄生线虫的卵、幼虫及成虫均具有较强的毒杀活性 ;用乙酸乙酯从该菌丝麦粒培养物中提取的粗毒素稀释 10倍 ,击倒 95 %的线虫 (Panagrellusredivivus)仅需 4 .5h ;该菌产生的毒素可溶于水及各种有机溶剂 ,石油醚除外 ,对热和酸碱均具有高度的稳定性 ,尤其对酸的稳定性强 ,对线虫的毒杀活性具有一定的广谱性。     

瓜果腐霉的液体发酵工艺及代谢产物活性测定

本试验对具有除草活性的瓜果腐霉PA1-M1菌株进行了液体发酵工艺探讨,并对其发酵产物进行了除草活性和抑菌活性测定。结果表明:PA1-M1菌株以振荡方式、中酸性发酵为适宜,其培养滤液粗提物和菌丝粗提物对马唐根和芽的IC50分别为0.36 mg/mL、0.46 mg/mL和7.36 mg/mL、4.09 mg/mL。此外,培养滤液粗提物对小麦赤霉病菌表现出了一定程度的抑菌活性。     

Isolation and Structural Indentification of Herbicidal Toxin Fractions Produced by Pythium aphanidermatum

In order to understand the compsition and structure of herbicidal component of Pythium aphanidermatum,the isolation and structural indentification were researched.The culture filtrate was extracted by ethyl acetate,petroleum,and chloroform with the same volume respectively and the activity of the crude toxin was bioassayed.The toxin was separated by using the method of thin layer chromatography（TLC）,then the main fraction was separated by HPLC,and the structure was analyzed by the sepctrum of IR,13C-NMR and 1HNMR.The results showed that the ethyl acetate extracts had the strongest herbicidal activity.Using the method of TLC,the bioassay results showed that the extracts with Rf 0.19 had the strongest effect on weeds and the inhibition to Digitaria sanguinalis and Amaranthus retroflexus reached five levels,and the component was proved to be dimethyl o-phthalate from the spectrum of IR,13C-NMR and 1HNMR,which was one of the components from the toxin,and it had herbicidal activity.     

黑米抗氧化活性成分的分离纯化和结构鉴定

 【目的】分离、纯化和鉴定黑米抗氧化的主要活性成分。【方法】以体外总抗氧化能力为活性跟踪指标，对黑米抗氧化提取物用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等不同极性溶剂萃取分部后得到抗氧化能力最强的部分，再用Sephadex LH-20分离得到抗氧化主活性成分，采用紫外-可见光谱、红外光谱、ESI-MS质谱和核磁共振（1HNMR和13CNMR）波谱法对其进行结构解析。【结果】黑米抗氧化提取物的5种溶剂萃取物以水部和正丁醇部的抗氧化能力最强，其总抗氧化能力分别为383和392 ku·g-1，其中，从水部可得到4种抗氧化主活性成分，总抗氧化能力分别为976、878、1 134和1 087 ku·g-1。波谱结构解析表明，4种成分均为花色苷类化合物，分别是锦葵素、天竺葵素-3.5-二葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3, 5-二葡萄糖苷。【结论】花色苷类化合物是黑米抗氧化作用的主要物质基础。     

Isolation and Structural Identification of Herbicidal Active Substance from Root of Flaveria bident （L.） Kuntze

In order to understand the composition and structure of herbicidal active substance from the root of Flaveria bidentis （L.） Kuntze, the isolation and structural identification were researched in this paper. The crude extract from the root ofF. bidentis （L.） Kuntze was extracted by petroleum ether, ethyl acetate, and water saturation of n-butyl alcohol, respectively, and the extraction fluid was separated by using the method of TLC, then the main fraction was separated by HPLC, and the structure of the herbicidal active substance was analyzed by LC-MS, elemental analysis and ~H-NMR. The results showed that the petroleum extraction had the strongest herbicidal activity, and the purple blue stripe separated by TLC had the strongest effect on Digitaria sanguinalis. The herbicidal active substance was identified as ct-terthienyl according to the data of LC-MS, elemental analysis and 1H-NMR.     

灰葡萄孢BC7-3菌株固体发酵条件的优化

 【目的】探讨灰葡萄孢BC7-3菌株固体发酵的基本条件以提高其除草活性物质的产量。【方法】通过正交试验设计确定最优化的培养基组合,并结合生长抑制法测定外加碳源、氮源等因素对除草活性物质产生的影响,以确定最佳的发酵条件。【结果】确定了小米5 g、高粱5 g、麦麸5 g、玉米秸秆2.5 g为最佳复合培养基质;明确了该菌株在加入1%硝酸铵、1%蔗糖的培养基中,20℃黑暗条件下,接种量8%、含水量80%、静置培养15 d,得到的除草活性物质活性最强。【结论】固体发酵适合于灰葡萄孢代谢产物中除草活性物质的产生。     

The Herbicidal Activity of Mutant Isolates from Botrytis cinerea

Fifteen mutant isolates were obtained by ultraviolet mutation from parent isolate Botrytis cinerea BC-4. Among them three mutant isolates, BC4-1, BC4-2, and BC4-15, showed strong herbicidal activity. BC4-1 showed maximum herbicidal activity for inhibition of germination and growth of Digitaria sanguinalis L. and Arnaranthus retroflexus L. The results also showed that herbicidal activity was influenced by differing pH of PD media, with pH value of 4.0 being the optimum. The crude toxin was extracted using chloroform, petroleum ether, and ethyl acetate, respectively, and the ethyl acetate extracts showed the strongest inhibitory activity on the germination and growth of D. sanguinalis L. and A. retroflexus L. Using HPLC, one fraction with an absorption peak at 271 nm was separated from the crude toxin. This fraction could strongly inhibit the growth of D. sanguinalis L. at a concentration of 100 mg L^-1 and could completely inhibit the seed germination of D. sanguinalis L. and A. retroflexus L. at a concentration of 50 mg L^-1 .     

链格孢菌Alternaria augustiouoidea突变菌株毒素的除草活性研究

通过对链格孢菌Alternaria augustiouoidea菌株AAEC05紫外线诱变得到的8个诱变菌株进行除草剂活性测定,筛选出的AAEC05—3、AAEC05—5、AAEC05—8和AAEC05-2等4个诱变菌株具有较强的除草剂活性,其中AAEC05—3和AAEC05—5菌株效果最好。研究表明,pH值对菌株产毒能力影响很大,以pH5．0最佳。用石油醚、三氯乙烷、乙酸乙酯萃取培养滤液制备粗毒素。生物测定结果表明,以乙酸乙酯萃取所得粗毒素对稗草种子萌发及生长抑制作用最强。     

大蒜根系分泌物化感作用及化感物质的比较

【目的】利用生物测定和GC-MS分析方法,研究大蒜根系分泌物的化感作用及化感物质。【方法】采用琼脂培和砂培2种栽培方式收集大蒜根系分泌物,分别采用乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷和正丁醇4种有机溶剂进行萃取分离,对各有机溶剂萃取液进行萝卜种子发芽试验,确定出强化感作用组分,并对其成分进行GC-MS分析。【结果】各有机溶剂萃取液的化感作用强弱顺序依次为：乙酸乙酯萃取液>三氯甲烷萃取液>正丁醇和乙醚萃取液,初步确定大蒜根系分泌物中的化感物质为2,6-二异丙基苯酚、2,6-二叔丁基对甲酚和二烯丙基二硫醚。【结论】2种栽培方式收集的大蒜根系分泌物的乙酸乙酯组分中的成分相似,但在含量上差异较大,表现为砂培>琼脂培。     

高山绣线菊提取物对几种植物真菌的抑制活性及其活性成分

 【目的】研究高山绣线菊（Spiraea alpina）对植物病原真菌的抑制活性,从高山绣线菊中分离纯化新的抗真菌化合物。【方法】以水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）、小麦赤霉病菌（Gibberella zeae）、稻瘟病菌（Pyricularia oryzea）和玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）为供试菌种,进行生物活性导向的创新农药筛选。将高山绣线菊叶乙醇提取物依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇和甲醇进行萃取,选择较高抑菌活性的乙酸乙酯萃取物大柱粗分、小柱细分,得到一种抗真菌活性成分。采用高分辨质谱、紫外-可见光谱、红外光谱和核磁共振波谱（1H-NMR,13C-NMR,135°-DEPT和HMBC）法对其进行结构解析。【结果】从高山绣线菊中分离得到一种新化合物6-O-（3',4'-二羟基-2'-甲烯基-丁酰基）-1-O-反式-肉桂酰基-β-D-吡喃葡萄糖,其对水稻纹枯病菌和玉米大斑病菌的生长具有一定的抑制作用,作用浓度为0.3 mg?ml-1时,抑制率分别为87.6和63.2%。【结论】高山绣线菊叶乙醇提取物对水稻纹枯病菌和玉米大斑病菌具有一定的抑制作用,高山绣线菊中含有新的抗植物病原真菌化合物。     

鸦胆子废渣抑菌活性成分分析

【目的】探究鸦胆子去油后废渣的抑菌活性成分,为开发生物药肥提供理论依据。【方法】采用菌丝生长速率法、孢子萌发法和滤纸片法等测定鸦胆子废渣粗提物及不同溶剂萃取物对禾谷镰刀菌、茄子黄萎病菌和西瓜枯萎病菌等18种供试植物病原真菌的生物活性,并通过生物活性跟踪对其乙酸乙酯萃取物的化学成分进行分离及鉴定。【结果】在10 mg/mL浓度下鸦胆子甲醇提取物仅对水稻纹枯病菌具有抑制活性,其抑制率为33.33%;但在5 mg/mL浓度下其石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物对供试病原真菌均具有一定的抑制作用,以乙酸乙酯萃取物的抑菌活性最明显,对12种供试病原真菌菌丝生长均具有一定的抑制作用,其中对火龙果溃疡病菌、苦瓜枯萎病菌和水稻纹枯病菌的抑制率分别达75.71%、56.47%和51.72%,对应的致死中浓度（EC₅₀）分别为2.65、3.48和2.10 mg/mL。乙酸乙酯萃取物对火龙果溃疡病菌孢子萌发的抑制作用随浓度的升高而增强,在浓度为2.5000 mg/mL时抑制率达100.00%;在紫外光和自然光条件下乙酸乙酯萃取物对火龙果溃疡病菌的抑菌活性稳定。从乙酸乙酯萃取物中分离得到catechol（1）、benzofuran-2-carboxaldehyde（2）、1H-Indazole（3）、vanillic acid（4）、cleomiscosin A（5）等5种化合物,其中,化合物2和3为首次从鸦胆子中分离获得,但化合物1、2、4和5对供试火龙果溃疡病菌、苦瓜枯萎病菌和水稻纹枯病菌均无显著抑菌活性（P>0.05）。【结论】鸦胆子废渣中含有抑菌活性成分,在植物病害防控上具有良好的应用前景。