梨属植物基因组DNA提取部位对RAPD扩增的影响

中国梨属植物资源丰富,RAPD技术已广泛用于梨资源遗传多样性研究.通过对不同部位提取的DNA纯度进行测定,并进行RAPD扩增分析,为 RAPD技术在梨属种质资源中的应用提供参考.以鸭梨和杜梨为试验材料,利用CTAB法对其幼叶、老叶及韧皮部等不同组织或同一组织的不同时期进行了基因组DNA的提取,并对其进行了RAPD反应的比较.所提取的鸭梨的幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部DNA OD260/OD280的比值分别为2.0、1.8、1.7;杜梨幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部DNA OD260/OD280的比值分别为1.9、1.8、1.6.二者都能成功进行RAPD扩增,且扩增结果基本一致.利用CTAB法从鸭梨和杜梨的幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部提取的DNA均能成功进行RAPD扩增,且结果基本一致.     

一种适于甜菜RAPD分析的DNA快速提取方法

实验用CTAB法、SDS法Ⅰ及SDS法Ⅱ提取甜菜叶片DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度.实验表明,CTAB法所提取甜菜总DNA的纯度高,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定.CTAB法是作为甜菜RAPD分子标记研究的最佳DNA提取方案.     

不同方法提取野生龙眼基因组DNA的效果比较

以广东、海南的3种野生龙眼幼嫩叶片为试验材料,采用常规SDS法、常规CTAB法、改良SDS法和改良2xCTAB法提取龙眼叶片基因组DNA,探索从富含单宁、多酚、多糖和色素等次生代谢物质的野生龙眼叶片中获得高质量DNA的提取方法.结果表明:采用改良的2xCTAB法提取的龙眼叶片基因组DNA纯度最高、质量最佳,可直接用于龙眼RAPD分析和叶绿体DNAtrnL-F基因的PCR扩增分析,且扩增后条带清晰.说明改良的2xCTAB方法获得的DNA纯度和产率较高,提取效果较好.     

悬铃木叶片DNA提取方法研究

以悬铃木组织培养苗叶片为材料,比较了提取叶片DNA的4种方法:SDS-Ⅰ,SDS-Ⅱ,CTAB-Ⅰ,CTAB-Ⅱ,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶酶切、RAPD等方法进行鉴定.研究结果表明,4种方法提取的DNA的得率约为0 347～0 518μg·mg-1,分子量约为23kb,均可被酶切.此外,CTAB-Ⅰ和CTAB-Ⅱ提取的DNA可用于RAPD分析.综合考虑得率、纯度等因素,作者认为CTAB-Ⅱ法可作为悬铃木叶片DNA提取的最佳方法.     

天冬药材基因组DNA提取方法研究

[目的]从天冬药材中提取可用于RAPD扩增的高质量基因组DNA。[方法]分别采用改良CTAB法、SDS法以及植物基因组DNA提取试剂盒法提取天冬药材基因组DNA;通过电泳、DNA浓度与纯度检测以及RAPD扩增效果确定天冬药材基因组DNA的最佳提取方法。[结果]CTAB法提取的基因组DNA较完整,DNA浓度与纯度均较高,可获得丰富的、清晰的RAPD条带。[结论]CTAB法为天冬药材基因组DNA提取的最佳方法,提取的DNA可用于天冬RAPD分析,该方法可为其他药材基因组DNA提取提供参考。     

小麦不同部位DNA提取的比较研究

[目的]探讨小麦不同取材部位对DNA提取质量和产率的影响。[方法]分别以小麦的种子、根尖和幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法分别提取小麦3个部位的基因组DNA,用0．8％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模版进行RAPD扩增。[结果]采用小麦叶片提取DNA的产率最高,种子次之,根尖最低。3个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为756μg/ml;其次是种子,为233μg/ml;根尖获得的DNA浓度最低,为90μg/ml。小麦不同部位提取的DNA模板对RAPD扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。[结论]小麦3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。     

小麦秆锈菌夏孢子DNA提取方法的比较研究

试验分析比较了3种破壁法和4种提取液法对小麦秆锈菌夏孢子DNA的提取效果。结果表明,玻璃珠液氮振荡法获得的DNA纯度及浓度最高,RAPD扩增条带清晰,为提取DNA的最佳破壁法;CTAB法获得的DNA纯度及浓度最高,满足RAPD扩增条件,条带清晰,为最佳提取液法。适合于小麦秆锈菌RAPD分子标记研究的DNA提取方法的最佳体系为玻璃珠液氮振荡法+CTAB提取液法。     

彩色甜椒基因组DNA提取方法的优化

以不同颜色的甜椒为试验材料．采用CTAB法、SDS法、ROSE法和氯化苄法提取彩色甜椒基因组DNA。结果表明,CTAB法所提取DNA的质量和纯度较高,以此DNA为模板进行RAPD—PCR分析,DNA扩增效果较好,带形清晰、整齐,说明CTAB法提取的DNA较为完整,能用作RAPD—PCR模板来开展彩色甜椒分子水平的研究。     

核桃叶片基因组DNA的4种提取方法比较

以核桃叶片为材料,比较了高盐低pH法、SDS法、改良CTAB法和适合酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法提取基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、RAPD、ISSR等方法进行PCR扩增和用EcoRI、PstI内切酶酶切对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量和质量.结果表明,4种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同,其中酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法产量最高,纯度适中.4种方法提取的DNA对以后的PCR和酶切均没有影响.     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

叶片湿润时间对葡萄霜霉病发生状况的影响

从不同菌悬液与叶片接触时间、接菌后叶片不同保湿时间和不同保湿条件3方面,研究叶片湿润时间对葡萄霜霉病发生状况的影响。结果表明,葡萄霜霉病菌悬液与叶片接触0.5 h以上即可导致霜霉病发生,接触时间越长发病越重;接菌后在RH=76%保湿条件下,葡萄霜霉病即发生,湿度越高发病越重;霜霉病菌完成侵入到显症需要的叶片湿润条件是叶片湿润2～3 h以上;20℃条件下,霜霉病的潜伏期最短2～3 d,而病斑出现的高峰期是使叶背湿润后的5～7 d。     

不同硅源制剂对葡萄白粉病的防治效果研究

不同硅源制剂对葡萄白粉病防治效果的研究结果表明,硅酸钠、正硅酸乙酯和纳米硅对葡萄白粉病均有明显的抑制作用,硅酸钠、纳米硅、正硅酸乙酯对室内盆栽葡萄苗白粉病防效在处理15 d后分别为42.65%、24.80%、21.17%,对葡萄离体叶圆片白粉病的防效在处理9 d后分别为47.06%、40.14%、35.53%,以硅酸钠处理的效果最好.     

皇家夏天葡萄离体叶片再生体系的建立

叶片再生效率的高低直接影响目的基因转化的成功率,为建立稳定、高效的葡萄离体叶片不定芽再生体系,以优良无核葡萄品种皇家夏天为试材,取试管苗顶端1￣3叶位幼嫩叶片,研究了基本培养基成分、生长调节物质的种类和浓度、碳源等因素对叶片不定芽再生的影响。结果表明:供试WPM、1/2MS、B5和NN694种基本培养基,均可诱导其叶片再生不定芽,差异不显著;碳源以添加10￣20g/L的葡萄糖或食用白砂糖较好;培养基中附加3.0mg/L的6-BA与0.05mg/L的IAA配比利于出芽和成苗,应用TDZ虽出芽较多,但芽丛多畸形、出苗困难,不宜使用。     

南方葡萄的土宜条件与营养特性

南方多雨,地势低洼的葡萄园采用高畦深沟栽培可提高土壤速效养分含量,并可降低滨海土壤含钠量,促进葡萄生长.酸性土壤施用石灰调节pH至6.1—6.5,可扩大根系营养面积,葡萄体内氮,磷、钾含量增加.当土壤pH值调节至近中性时,葡萄体内磷、钾、镁含量明显下降。正常生长的葡萄叶片含氮量为2.5％—3.0％,含磷量为0.2％,含钾量在1.2％以上.巨峰葡萄叶片中N∶P∶K∶Ca∶Mg的适宜比例是1∶0.08—0.15∶0.5—0.7∶0.7∶0.2—0.4∶0.08—0.12.当叶片中磷比值小于0.08,钾比值小于0.5时,葡萄植株易得病。上述养分比值可作为巨峰葡萄化学营养诊断指标。     

避雨栽培对葡萄叶片光合特性的影响

以红提为试验材料,利用LI-6400便携式光合仪在露地和简易棚2种栽培条件下,测定葡萄叶片的净光合速率、胞间CO2浓度等参数。结果表明：避雨栽培降低了葡萄叶片的净光合速率、胞间C02浓度和叶室内部光强,降幅分别为14．06％、7．46％和41．72％,与露地栽培相比,差异均达到了极显著水平。避雨栽培提高了葡萄叶片的蒸腾速率,升幅为0．50％;降低了葡萄叶面温度,降幅为0．71％,与露地栽培相比差异不显著。     

H2O2对葡萄离体叶片白藜芦醇的诱导作用

[目的]葡萄叶片白藜芦醇含量较虎杖根含量低,难以作为药用提取用途,研究采用诱导剂升高葡萄离体叶片中白藜芦醇的含量.[方法]实验采用H2O2对离体红地球葡萄叶片进行诱导,采用薄层及高效液相色谱法分析白藜芦醇的含量变化,并使用RT - PCR方法分析茋合酶基因(STS)的表达量变化.[结果]H2O2对离体叶片茋类物质具有显著的诱导作用,诱导白藜芦醇的积累呈现显著的量时依赖性;5;H2O2处理48 h后叶片白藜芦醇含量可提高15倍以上,鲜重达到263 μg/g.[结论]H2O2可以作为葡萄离体叶片白藜芦醇的有效诱导剂.     

葡萄砧木叶片含水量和相对含水量的研究

以9个葡萄砧木叶片为材料,测定其初始鲜质量、干质量和饱和鲜质量,计算其叶片含水量和相对含水量。结果表明,101-14叶片含水量最高,为79.98%;抗砧3号叶片含水量最低,为72.45%。SO4叶片相对含水量最高,为92.34%;贝达叶片相对含水量最低,为81.82%。相对含水量最高的SO4葡萄砧木,抗旱性最强,适宜作为抗旱葡萄砧木。贝达的叶片含水量和相对含水量均最低,抗旱性最弱,不宜作为抗旱葡萄砧木。     

郴州烟叶工商交接等级质量分析

对2009—2013年国家局对郴州烟叶工商交接等级质量监督数据及其影响因素进行综合比较分析。结果表明:郴州烟叶不同等级间烟叶等级合格率有显著差异,上等烟平均等级合格率低于中等烟,中等烟低于下等烟;中部烟平均等级合格率低于上部烟和下部烟,需求量大、质量好的烟叶等级合格率不高。烟叶等级质量主要受等级纯度、混低、混部位的影响,中部烟叶混低、混部位的比例大于上部烟叶和下部烟叶混低、混部位的比例。该文对提高烟叶等级质量提出了有关建议。     

‘黑比诺’葡萄不同叶龄叶片叶绿体内淀粉积累及其相关基因表达差异分析

【目的】随着叶龄的增长,葡萄叶片叶绿体内淀粉积累增加,但是调控其淀粉积累的分子机理还未见报道,本研究通过筛选参与调控淀粉积累的潜在基因,阐明葡萄不同叶龄叶片叶绿体中淀粉积累的分子机理。【方法】以2年生‘黑比诺’(Pinot Noir)葡萄为试材,观察不同叶龄叶片叶绿体内淀粉积累动态,并采用高通量测序技术进行转录组分析,筛选出与淀粉和蔗糖代谢途径相关的关键酶基因,同时采用实时荧光定量PCR技术对关键基因进行表达验证。【结果】未展开叶（NL）叶绿体内淀粉粒体积较小,积累量少,随着叶龄增长,在生长中叶（GL）和成熟叶（ML）叶绿体内,淀粉粒体积明显增大,积累量增加。转录组测序共得到58.57 GB的有效数据,KEGG富集分析表明,与NL相比,在GL和ML中差异表达的基因显著富集于淀粉与蔗糖代谢通路。分析该通路基因表达模式发现,细胞壁转化酶（cell wall invertase,CWINV）、磷酸葡萄糖变位酶（Phosphoglucomutase,PGM）、腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase,AGPase）等基因参与蔗糖转化为淀粉合成前体腺苷二磷酸葡萄糖（adenosine diphosphate glucose,ADPG）的过程,且随叶龄增大逐渐上调表达;可溶性淀粉合成酶（soluble starch synthase,SSⅠ）、淀粉分支酶（starch branching enzyme,SBE）、α-淀粉酶（α-amylase,AMY）、β-淀粉酶（β-amylase,BAM）等基因参与淀粉合成与水解过程,同样随叶龄增大上调表达,其中AGPase、SSⅠ、SBE在半结晶结构支链淀粉合成中起重要作用。【结论】随着叶龄的增大,叶绿体中淀粉积累增加;AGPase、SSⅠ、SBE等基因可能是参与调控叶绿体内淀粉积累的关键基因。     

四种葡萄品种的离体培养

以优质葡萄品种京秀、矢夫萝沙、无核早红、红香水为繁殖材料，取单芽茎段为外植体，采用GS，MS，B5 3种培养基，研究不同培养基、培养基的不同激素用量、是否带叶接种、不同蔗糖浓度对离体单芽茎段腋芽萌发的影响。结果表明：B5培养基培养效果好；不同品种对培养基有不同要求，京秀是B5＋IAA 0．2mg/L为最适培养基，矢夫萝沙是B5＋IAA 0.3mg/L为最适培养基，无核早红是B5＋IBA 0.2mg/L为最适培养基，红香水是B5＋IAA 0.1mg/L为最适培养基；试管苗带叶接种繁殖系数高、速度快；蔗糖浓度以20g/L左右较好。