食品动物源大肠杆菌耐药性分析及16S rRNA甲基化酶基因的检测

【目的】对四川地区临床分离的437株健康动物源及82株患病动物源大肠杆菌(E.coli)的耐药性及其机制进行研究,为临床合理用药提供理论依据。【方法】用3种氨基糖苷类药物和11种非氨基糖苷类药物对分离的大肠杆菌进行药物敏感性试验(K-B纸片法)。选取至少耐1种氨基糖苷类药的大肠杆菌作为供试菌,通过PCR检测其16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE和npmA;对阳性菌株进行质粒接合试验;并用K-B纸片法分析临床菌和接合子对抗生素的敏感性。【结果】437株健康动物源和82株患病动物源大肠杆菌对14种抗菌药物表现出不同程度的耐药性。健康动物源大肠杆菌对氨苄西林、氯霉素、磺胺甲恶唑的耐药率较高,分别为69.79%,50.8%和68.72%,对庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星比较敏感,敏感率分别为75.97%,67.73%和97.02%;其中有134株分离菌至少对1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。患病动物源大肠杆菌除对美罗培兰耐药率较低(为3.66%)外,对其余药物的耐药率在32.93%~100%,且都对至少1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。多重耐药分析表明,健康动物源大肠杆菌主要分布于0~4耐,而患病动物源大肠杆菌至少耐7种抗菌药物,主要分布于10~14耐。在134株耐氨基糖苷类抗生素大肠杆菌中,检测到5株含rmtB基因,检测率为3.73%,未检测到armA、rmtA、rmtC、rmtD、rmtE和npmA基因。在82株患病动物源大肠杆菌中,检测到1株含armA基因,10株含rmtB基因,检出率分别为1.22%和12.2%,未检测到rmtA、rmtC、rmtD、rmtE及npmA基因;接合试验的耐药质粒传递率为100%,受体菌接合频率在(9.2×10-9)~(4.8×10-6)。【结论】四川地区健康动物源大肠杆菌对抗生素呈中低水平耐药,多重耐药以4耐及以下为主,占63.84%,主要由rmtB基因引起;而患病动物源大肠杆菌对抗生素则呈高水平耐药,89.02%为10~14耐,主要由rmtB和armA基因引起。     

驴腹泻源大肠杆菌的耐药性分析

为了解山西省太原地区某驴养殖场腹泻源大肠杆菌的耐药谱,采集该驴场腹泻驴粪便26份,经实验室无菌分离培养、生化试验鉴定,共分离鉴定出26株大肠杆菌,采用K-B纸片法对这26株大肠杆菌进行耐药性试验,结果显示,分离的26株驴腹泻源大肠杆菌对青霉素和多黏菌素B的耐药率高达95%以上,对青霉素完全耐药;对痢特灵和头孢克罗的耐药率分别为38.46%和23.08%;对卡那霉素的耐药率较低,为3.85%;对氧氟沙星、诺氟沙星、头孢曲松高敏。     

仔猪水肿病大肠杆菌的分离鉴定及抑菌试验

试验采集辽宁农业职业技术学院种猪场16份疑似仔猪水肿病病料，进行细菌分离和生化鉴定，并进行大肠杆菌药敏试验。结果表明，分离到大肠杆菌13株，全部为致病性大肠杆菌。应用微量平板凝集试验，对分离的13株致病菌进行了血清型鉴定，鉴定出11株共有5种血清型，其中以O139血清型最多，共有5株，占能定型分离致病菌株的45％，各菌株的耐药菌谱不同，大多数菌对氟苯尼考，头孢呋新敏感，对新霉素、环丙沙星、丁胺卡那霉素、氟哌酸、庆大霉素较敏感，对氧氟沙星、头孢唑啉、氨苄西林、红霉素不敏感。     

山西地区仔兔腹泻源大肠杆菌的分离· 鉴定及耐药性分析

[目的]调查山西地区仔兔腹泻源致病性大肠杆菌的耐药性。[方法]从山西地区不同兔养殖场采集110份因腹泻死亡的仔兔肠道内容物,进行病原分离,并通过菌落形态观察和生化试验对其进行鉴定。开展动物致病性试验,最后采用K-B纸片法用14种抗生素对分离菌株进行药物敏感性测定。[结果]共分离出60株细菌,通过菌落形态观察和生化试验均鉴定为大肠杆菌。药敏试验结果表明,分离的60株大肠杆菌对阿米卡星的耐药率为0,而对庆大霉素、链霉素、多粘菌素B、卡那霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、痢特灵、头孢克罗、阿莫西林、头孢曲松、头孢哌酮、氯霉素、磷霉素13种常见药物均表现出不同程度的耐药性,其中对头孢曲松、磷霉素、多粘菌素B、阿莫西林、痢特灵、氯霉素、头孢哌酮的耐药率均在80%以上;分离菌株对卡那霉素的耐药率最低,为3.3%。[结论]山西地区仔兔腹泻源致病性大肠杆菌对13种抗生素产生了普遍的耐药性,建议进一步扩大药物的筛选范围,为大肠杆菌病的防制和临床用药的风险评估提供科学依据。     

广东省禽源大肠杆菌分离株的耐药性调查

[目的]了解广东省不同地区禽源大肠杆菌的耐药情况。[方法]采用纸片扩散法对不同养禽场分离的229株大肠杆菌进行28种抗菌药物的耐药性试验。[结果]229株大肠杆菌对四环素、复方磺胺甲噁唑、阿莫西林和氨苄西林的耐药率较高,分别为89.1%、80.0%、76.9%和75.5%,其次是多西环素和链霉素(74.7%和68.6%),但阿米卡星耐药率最低(8.3%)。229株大肠杆菌存在多重耐药性,其中6株大肠杆菌可耐26种药物。[结论]广东省禽源大肠杆菌分离株耐药情况严重,存在多重耐药现象。养殖场应合理使用药物,加强细菌耐药性监测,研究结果为养殖场选用合适药物、控制细菌耐药性的产生和扩散提供了有效的理论依据。     

山西部分地区犊牛腹泻大肠杆菌耐药基因分析

[目的]调查山西省某肉牛场犊牛腹泻源大肠杆菌耐药基因的流行情况。[方法]采用Kirby-Bauer纸片法和PCR法，对分离出的8株腹泻大肠杆菌进行了7种临床常用药物的药物敏感试验及相关耐药基因的检测。[结果]耐3种药物的菌株有1株，耐2种药物的菌株有6株，仅有1株菌对1种药物耐受；分离的8株犊牛源大肠杆菌菌株对四环素、庆大霉素高度耐药，耐药率分别为100%、87.5%;对氧氟沙星、阿米卡星、卡那霉素敏感性较高。分离的8株犊牛源大肠杆菌菌株的aph3′-Ⅱ、TetD和TetB基因检出率分别为75.0%、62.5%和37.5%。[结论]该肉牛场犊牛源腹泻大肠杆菌存在一定程度的耐药性。     

张家口地区仔猪黄痢病原菌血清型检测及药敏试验

为了调查张家口地区仔猪黄痢病例大肠杆菌的耐药性及流行血清型,从发生仔猪黄痢的20个规模化猪场采集90份病料,进行致病性大肠杆菌的分离及生化鉴定。腹腔接种小白鼠以鉴定分离菌的毒力,采用玻板凝集试验和试管凝集试验鉴定分离菌O血清型,并使用16种抗菌药对50株致病性大肠杆菌进行药敏试验。结果表明,从90份病料中分离出86株大肠杆菌,其中致病性大肠杆菌79株。79株致病菌共有10种血清型,其中O8、O151、O149、O141为优势血清型,占能定型分离致病菌株的61.1%。药敏试验结果显示,头孢噻肟钠抑菌作用最强(94%),其次为诺氟沙星(90%)、丁胺卡那霉素(82%)、新霉素(80%)。50株大肠杆菌对16种抗菌药均有不同程度的耐药性,对链霉素完全耐药,其中39株为5耐以上的菌株,占供试菌株的78%。     

渭南地区鸡大肠杆菌的分离鉴定与耐药性检测

为了解渭南地区鸡大肠杆菌的耐药现状,无菌采集养鸡场疑似大肠杆菌病病料样品33份,对采集病料进行细菌的分离纯化、生化试验和致病性试验,共鉴定出26株致病性大肠杆菌。将分离鉴定的菌株进行15种常用抗菌药物的耐药性试验,结果显示分离菌株对头孢曲松和阿米卡星较为敏感,分别占分离菌株的76.9%和65.4%;对阿莫西林、复方新诺明、四环素、链霉素、多粘菌素和恩诺沙星等药物的耐药性较强,均达53%以上,其中对阿莫西林、四环素和复方新诺明耐药菌株最多,分别达84.6%、76.9%和73.1%。结果表明渭南地区鸡大肠杆菌具有多重耐药性,耐药菌谱广。     

陕西关中地区猪大肠杆菌的分离鉴定与耐药性检测

为了解陕西关中地区猪大肠杆菌的耐药情况,无菌采集养猪场疑似大肠杆菌病病料样品178份,经细菌分离培养、生化试验和致病性试验,共分离鉴定出78株致病性大肠杆菌。将分离鉴定的大肠杆菌对16种常用抗菌药物进行耐药性检测,结果显示分离菌株对美罗培南和头孢他啶较为敏感,分别占分离菌株的83. 3%和66. 7%;对氨苄西林、四环素、磺胺异恶唑、复方新诺明、氟苯尼考、大观霉素和氧氟沙星等药物的耐药性较强,且耐药菌株数量均达65%以上。表明关中地区猪大肠杆菌耐药性强,耐药谱广。     

苏淮仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定与耐药性分析

为了解淮安地区苏淮猪仔猪出现细菌性腹泻的病因并提供治疗方案,采集腹泻仔猪的肛拭子样品共95份,对采集的样品进行细菌分离与鉴定、动物致病性鉴定及耐药性分析.结果显示,本次试验共分离鉴定到78株大肠杆菌,92株沙门氏菌;动物致病性试验显示,大肠杆菌致小鼠死亡率为65.38％,沙门氏菌致小鼠死亡率为95.84％;药敏试验结果显示,大肠杆菌耐药率高于沙门氏菌,且均对青霉素类和林可霉素类高度耐药,对氟喹诺酮类耐药率最低.多重耐药结果显示,所有分离菌株均为多重耐药菌株,大肠杆菌主要表现8～10耐,沙门氏菌主要表现在6～8耐.     

规模化养猪场仔猪黄痢病原菌血清型检测及其药敏试验

【目的】从山东临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病例中,分离病原菌并分析其血清型,以探讨分离菌的耐药情况,为临床选用疫苗与防治用药提供参考。【方法】对临沂市不同区域23个规模化养猪场的112份疑似仔猪黄痢病例进行了细菌分离,对分离到的致病性大肠杆菌进行生化试验、毒力试验、致病性试验和血清学鉴定;用15种抗生素对分离菌株进行了60次药敏试验。【结果】从112份病料中分离出了101株致病性大肠杆菌,分离率为90.2%;不同区域猪场流行的血清型有较大差异,在101个分离株中,7株未能定型,4株自凝,其余90株能定O型血清型,这些定型菌株分布在11个血清型中。每种抗菌药物均出现过耐药现象,但各药物的耐药率不同,15种抗菌药物的耐药率最高为100%,最低为10.0%;试验菌株均表现出不同程度的多重耐药性,多为耐4~6种药物的菌株。【结论】目前临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病原菌的O型血清型分布在11个血清型中,其中优势血清型为O8、O54、O115和O149,这4种血清型共占定型菌株的56.7%;对仔猪黄痢病原菌敏感率较高的药物是环丙沙星、卡那霉素和呋喃妥因,高敏率分别为81.7%,73.3%和70.0%。     

豫西地区禽源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解豫西地区禽源大肠杆菌的耐药情况,从豫西地区养鸡场采集130份疑似大肠杆菌病料样品,按常规方法分离细菌,对分离菌株进行生化试验、PCR鉴定、血清型鉴定及药敏试验。结果显示,共分离鉴定出98株鸡源大肠杆菌,确定86株细菌分属14个血清型,其中以O14、O141、O78、O88血清型为主,分别占分离菌株的20.93%、16.28%、13.95%、9.30%。利用K-B法药敏试验检测大肠杆菌对20种抗生素的耐药性,结果表明,分离菌对复方新诺明的耐药性最高(95.92%),其次为四环素(83.67%)、氨苄西林(81.63%)、萘啶酸(77.55%)、恩诺沙星(69.39%),对亚胺培南和多黏菌素B敏感。大部分菌株具有多重耐药性,耐药种类最多的菌株对18种抗生素耐药,9~14重耐药菌株有76株,占77.55%。可见,豫西地区禽源大肠杆菌耐药现象十分严重,严重影响了禽类大肠杆菌病的防治。     

辽南地区鸡源性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了解辽南地区鸡源大肠杆菌的耐药情况,对辽南地区5个养殖场(户)送检的40例疑似大肠杆菌病、死鸡中分离出36株细菌,经生化试验鉴定出32株属于大肠杆菌。对已鉴定32株大肠杆菌对19种药物进行药敏试验,结果显示除头孢他啶、硫酸粘菌素外,大肠杆菌对其他17种药物均产生不同程度耐药。对阿莫西林的耐药率最高,达68.75%;其次是红霉素,达62.50%;再次是庆大霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、盐酸环丙沙星、盐酸林可霉素,分别是53.13%、40.63%、40.63%、37.50%、31.25%。对头孢噻呋、硫酸阿米卡星、替米考星、左氧氟沙星、多西环素、硫酸新霉素相对较为敏感。     

猪源性大肠杆菌分离鉴定及体外抑菌试验

试验从延边地区养猪场临诊上疑似大肠杆菌病的仔猪中无菌采集粪便和血样52份,进行大肠杆菌分离鉴定及致病性研究;通过纸片扩散法测定四环素、磺胺嘧啶钠及链霉素对分离株及标准菌株的抑菌效果,通过试管二倍稀释法及牛津杯法测定中药蒲公英、连翘及柴胡粗提物对分离株及标准菌株的最小抑菌浓度(MIC)及抑菌效果。结果表明:共分离鉴定28株大肠杆菌,分离率54%;79%分离株可致死小鼠;大肠杆菌对四环素及磺胺嘧啶钠敏感度较低,耐药率分别为89%和64%,对链霉素敏感度较高,耐药率为6%;蒲公英粗提物的MIC值为0.05g/mL,连翘与柴胡粗提物的MIC值均为0.1g/mL,3种中药粗提物均可抑制大肠杆菌生长,且蒲公英粗提物的抑菌效果最强。该试验结果表明:分离株对抗菌药的耐药性明显,中药体外抑菌效果明显,为延边地区仔猪腹泻性大肠杆菌病的防治及新药的开发提供依据。     

不同地区猪源和禽源大肠杆菌耐药性监测

2003—2005年自我国6省1市分离鉴定出133株猪源和455株禽源大肠杆菌临床株.采用微量肉汤稀释法测定了对20种抗菌药物的敏感性.结果表明,无论猪源还是禽源大肠杆菌对12种喹诺酮类药物耐药率非常高(耐药率范围34.96%~96.71%),对8种非喹诺酮类药物(除阿米卡星呈较低的耐药率外)也呈较高的耐药率(22.42%~94.07%);多重耐药现象十分严重,3耐及3耐以上菌株占总菌株94%以上;不同地区来源菌株的耐药模式总体一致,但存在耐药水平高低的差异.     

安徽省部分地区致病性大肠杆菌耐药性分析

为了研究临床大肠杆菌对药物的敏感性,从安徽省部分地区病料中分离得到75株致病性大肠杆菌,经分离、纯化、增殖,制成5×107CFU.mL-1的菌液,采用K-B法开展了对13种药物的敏感性试验。结果显示,分离株对氨苄西林、阿莫西林、多粘菌素B耐药菌高达70%以上,对恩诺沙星、氟苯尼考、氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟的耐药菌株在30%以上,而对阿米卡星、头孢唑肟高度敏感。本试验为临床大肠杆菌病防治有一定意义。     

安徽省部分地区致病性大肠杆菌耐药性分析

为了研究临床大肠杆菌对药物的敏感性,从安徽省部分地区病料中分离得到75株致病性大肠杆菌,经分离、纯化、增殖,制成5×107CFU.mL-1的菌液,采用K-B法开展了对13种药物的敏感性试验。结果显示,分离株对氨苄西林、阿莫西林、多粘菌素B耐药菌高达70%以上,对恩诺沙星、氟苯尼考、氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟的耐药菌株在30%以上,而对阿米卡星、头孢唑肟高度敏感。本试验为临床大肠杆菌病防治有一定意义。     

新疆克拉玛依市猪源大肠杆菌耐药性调查

为调查新疆克拉玛依市白碱滩地区规模化猪场和养殖户家猪粪样中分离的大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况。对该地区猪场及周边养殖户家猪粪样分离的大肠杆菌采用微量肉汤稀释法进行最小抑菌浓度测定。结果显示：采集的703份粪样中分离出大肠杆菌701株（包括规模化养殖场549株和养殖户152株）,分离的大肠杆菌对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸耐药率最高,达77.0%以上;对阿米卡星最敏感,耐药率也达11.1%;3耐以上的菌株占17.0%。该地区猪源大肠杆菌对常用抗菌药物耐药情况较为严重,须在临床治疗细菌性疾病中避开使用不敏感的抗菌药物。规模化养殖场分离的猪源大肠杆菌相比养殖户分离的猪源大肠杆菌对被检抗菌药物的耐药率低。     

仔猪腹泻大肠杆菌耐药性和超广谱β-内酰胺酶基因检测分析

为研究20日龄左右仔猪腹泻发病机理，检测仔猪腹泻大肠杆菌耐药性和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因种类，分析仔猪腹泻大肠杆菌耐药特性，为兽医临床更好地预防控制仔猪腹泻大肠杆菌病提供参考，从腹泻发病仔猪粪便中分离出34株致病性仔猪腹泻大肠杆菌，用10种头孢类抗生素药敏纸片对其进行药物敏感试验，并设计针对ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9的特异性引物，检测34株仔猪腹泻大肠杆菌ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9存在情况。药敏试验结果表明，34株仔猪腹泻大肠杆菌对10种头孢类抗生素的敏感度不同，其中，对头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛的耐药率为68%、65%和56%,敏感率为29%、15%和35%;对头孢哌酮、氨曲南的耐药率为15%、9%,敏感率为70%、79%。ESBLs基因检测结果表明，34株仔猪腹泻大肠杆菌全部检测到TEM耐药基因，检出率为100%;检测到1株细菌具有CTX-M-9耐药基因，检出率为2.8%。由于该养猪场分离出的仔猪腹泻大肠杆菌对头孢类抗生素普遍耐药，并且全...     

贵阳市大肠杆菌耐药性监测

为了调查贵阳市猪、鸡及环境中的大肠杆菌的耐药情况,从贵阳市花溪区、乌当区等7个县区采集了猪、鸡肛门拭子及排污口处的粪便,共420份样品,分离鉴定出300株大肠杆菌,应用琼脂稀释法测定其对10种常用抗菌药物的MIC值,并统计抗菌药物的平均耐药倍数、敏感率、耐药率等。结果表明:大肠杆菌对10种药物的耐药率整体偏高,除庆大霉素接近50%外,土霉素和氟苯尼考超过80%,链霉素、头孢噻呋、阿莫西林和磺胺嘧啶超过70%,恩诺沙星和环丙沙星超过60%。300株分离菌均多重耐药菌株,主要集中在5~10耐之间。结果表明贵阳市猪、鸡源大肠杆菌的耐药较严重。