溶藻弧菌对罗氏沼虾血清中一氧化氮及氧自由基的影响

用1×10~6 CFU/mL溶藻弧菌悬液注射健康无病罗氏沼虾,以无菌生理盐水为对照,分别在注射后6、12、24、48、72、96 h时于围心腔采集血液制备血清样本,测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果发现:注射生理盐水后,NO、NOS、T-SOD活力及MDA含量整体呈现出先上升后下降再恢复至注射前水平的规律。注射溶藻弧菌后,NO和NOS活力呈下降趋势,12 h后均出现上升趋势,NOS活力在24 h时达到最高值,T-SOD活力12 h内呈现下降趋势,之后出现上升趋势,96 h时恢复至注射前水平,而MDA含量总体呈上升趋势。试验结果表明,溶藻弧菌感染罗氏沼虾后对机体相关免疫酶的影响较大,导致机体免疫防御能力减弱。     

罗氏沼虾TLRs基因表达差异分析

[目的]探究罗氏沼虾Toll样受体(TLRs)基因(MrToll1、MrToll2和MrToll3)在不同组织中及感染溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)后不同时间鳃组织的表达量差异变化,为揭示罗氏沼虾TLRs在应对病害等免疫方面的表现和作用机理提供参考依据.[方法]利用实时荧光定量RT-PCR分别检测MrToll1、MrToll2和MrToll3基因在罗氏沼虾肌肉、鳃、肝胰腺、心脏、胃、肠、血淋巴、神经节、眼柄等不同组织中的相对表达量,并以同样方法检测罗氏沼虾感染溶藻弧菌后TLRs基因的相对表达量变化情况.[结果]罗氏沼虾MrToll1、MrToll2和MrToll3基因在各组织中广泛表达,但存在组织表达差异性.MrToll1和MrToll2基因在鳃组织中的相对表达量最高,分别是在肝胰腺中相对表达量的19.26和20.03倍;MrToll3基因在神经节中的相对表达量最高,是在肝胰腺中的10.13倍.感染溶藻弧菌悬液后,罗氏沼虾死亡率随时间的推移不断升高,至注射感染72 h时死亡率达峰值(64%),随后不再出现死亡.感染溶藻弧菌后罗氏沼虾MrToll1基因表达量呈先升高后下降的变化趋势,注射感染后24 h的表达量达峰值;Mrtoll2基因表达量呈下降—升高—下降—升高的波动变化趋势,注射感染后24 h的表达量达峰值;MrToll3基因表达量急剧下降,且维持在较低水平.[结论]罗氏沼虾MrToll1基因是鳃组织抵御细菌感染的主要应答基因,MrToll2基因可能参与鳃组织的其他免疫活动,MrToll3基因的调控机制尚未清晰.     

Cu2+胁迫对罗氏沼虾血清中抗氧化和免疫指标的影响

[目的]研究Cu2+胁迫对罗氏沼虾血清中抗氧化和免疫指标的影响,为其养殖环境的调控提供科学依据.[方法]设置0(对照组)和100μg/L(胁迫组)两个Cu2+浓度,分别在罗氏沼虾受Cu2+胁迫后的0、3、6、12、24和48 h取样,分离血清,测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量,以及酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活力.[结果]在Cu2+胁迫的3~12 h,罗氏沼虾血清中T-AOC显著升高(P<0.05,下同),并在12 h达峰值,胁迫后24和48 h显著下降;与对照组相比,CAT活力在胁迫3 h时显著升高,6 h时显著下降,12 h时又显著上升并达峰值,之后又逐渐降低,并在48 h时显著低于对照组;胁迫组罗氏沼虾血清中MDA含量在整个胁迫过程中呈先升高后略有降低的变化趋势,且在各时间点均显著高于对照组;ACP活力在胁迫后6和12 h显著升高,24和48 h时降至初始水平;AKP活力在胁迫3~12 h内无显著变化(P>0.05),胁迫后24和48 h显著降低.[结论]Cu2+胁迫导致罗氏沼虾脂质过氧化发生,机体通过调节抗氧化系统抵御Cu2+胁迫,抗氧化和免疫指标的变化具有一定时间效应,其中T-AOC、CAT活力和MDA含量对Cu2+胁迫较敏感,在胁迫短时间内即被显著诱导,可作为Cu2+污染的潜在生物指示物.     

两种致病菌对杂交东方鲀非特异性免疫和抗氧化指标影响

为研究迟钝爱德华氏菌和哈氏弧菌感染对杂交东方鲀"冀研一号"(菊黄东方鲀♀×红鳍东方鲀♂)非特异性免疫和抗氧化指标影响,分别对杂交东方鲀腹腔注射PBS、迟钝爱德华氏菌和哈氏弧菌,注射后6、12、18、24和36h分别取肝胰脏,测定其谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活力。结果表明,在攻毒后36 h内,注射迟钝爱德华氏菌"冀研一号"东方鲀肝胰脏总超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活均极显著升高(P0.01);攻毒后36 h内谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽均表现升高趋势。感染哈氏弧菌后,肝胰脏中谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶活力均高于对照组;谷胱甘肽含量表现升高趋势。试验鱼体感染致病菌后,引起肝胰脏非特异性免疫和抗氧化指标变化。     

高通量测序在罗氏沼虾抗病力比较中的应用

为了比较4个罗氏沼虾抗病选育群体(A、B、C、D)的抗病性能,对4个罗氏沼虾选育群体和1个非选育群体(E)进行了溶藻弧菌肌肉注射感染试验,运用高通量测序方法比较不同罗氏沼虾群体间感染组和对照组肌肉组织中弧菌的变化情况,根据感染成活率的差异性,分析其中3个罗氏沼虾群体(A、C、E)肠道组织和养殖水体的菌群多样性。结果表明:肌肉组织样品中微生物主要分为6个门,其中厚壁菌门占绝对优势,次优势门为变形菌门,软壁菌门和酸杆菌门的含量相对较低;各感染组芽孢杆菌属、假单胞菌属、嗜冷杆菌属的含量都高于对照组,而乳球菌属、乳酸杆菌属的含量明显低于对照组;肠道组织和养殖水体中微生物主要分为3个门,分别是变形菌门、拟杆菌门和厚壁菌门;基于不同罗氏沼虾群体肌肉组织中不同时间段内溶藻弧菌的含量,5个群体的抗弧菌感染能力分别为ABEDC,与感染成活率结果一致。综上,罗氏沼虾体内的菌群结构和养殖水环境密切相关,但相对独立;芽孢杆菌和类芽孢杆菌的含量差异可能是造成A群体和C群体感染成活率差异显著的原因。     

硫丹对罗氏沼虾溞状幼体及仔虾的急性毒性作用

在室内静水条件下,考察硫丹对罗氏沼虾溞状幼体(Z5、Z7、Z9)及仔虾(P4)的急性毒性,并测定在硫丹中暴露96 h后存活仔虾体内碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)及Na+/K+-ATPase酶活力.结果表明,硫丹对Z5、Z7、Z9的24、48 h LC50和安全浓度分别为2.086、0.391、0.004 μg/L,2.985、0.843、0.02 μg/L,4.430、2.000、0.123μμg/L;对仔虾的24、48、72、96 h LC50分别为5.479、1.853、0.617、0.471 g/L;硫丹对Z5、Z7、Z9及仔虾的毒性大小依次为SCZ5＞SCZ7＞SCP4＞SCZ9.暴露在0.010～6.982μg/L硫丹中,各试验组仔虾体内ACP酶和AKP酶活性与对照组差异不显著,但暴露在0.264～6.982 μg/L硫丹中的各试验组仔虾体内AKP酶活性较对照组降低16.6％～45.5％;暴露在0.010～0.264 μg/L硫丹内,各试验组仔虾体内Na+/K+-ATPase活性要显著高于对照组.     

副溶血弧菌对罗氏沼虾肝胰腺和鳃组织中呼吸相关酶活性及抗氧化酶基因表达的影响

【目的】探讨副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）肝胰腺和鳃组织中呼吸相关酶活性和抗氧化酶基因的影响,以期为罗氏沼虾免疫机理研究和病害防治提供参考依据。【方法】选取规格整齐、健康的罗氏沼虾,分别注射PBS溶液（对照组）和副溶血弧菌（试验组）,在第1、3、6、12、24、48、72和96h统计累计存活率,并取肝胰腺和鳃组织进行呼吸相关酶活性及抗氧化酶相关基因表达测定。【结果】罗氏沼虾感染副溶血弧菌后,随着时间的推移,其累计存活率逐渐下降,在96h累计存活率为72%。感染副溶血弧菌后,其肝胰腺中的ATP合酶、细胞色素C氧化酶和NADH脱氢酶活性随时间延长均呈先降低后上升最后趋于对照组水平的变化趋势,且在6~24h 3种酶活性均显著低于对照组（P<00.05,下同）,之后酶活性逐步上升;活性氧（ROS）含量则呈先上升后下降的变化趋势,且在6~48h显著高于对照组;超氧化物歧化酶（SOD）基因、过氧化氢酶（CAT）基因及谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）基因相对表达量呈先升高后降低再升高的变化趋势。在鳃组织中,ATP合酶、细胞色素C氧化酶和NADH脱氢酶的活性随着感染时间的延长呈先降低后上升至趋于对照组水平,在6~72h 3种酶活性不同时间段表现出显著下降趋势;ROS含量则呈先上升后下降的变化趋势;SOD、CAT和GPX基因相对表达量呈先升高后降低再升高的变化趋势,且均在感染6h显著上调至最大值,其中GPX基因相对表达量在12~48h显著下调低于对照组,并在72h逐渐上调。【结论】副溶血弧菌感染罗氏沼虾后对肝胰腺和鳃组织中的呼吸相关酶及抗氧化酶基因产生显著影响,ROS水平呈上升趋势。虽然罗氏沼虾能通过自我调节呼吸相关酶和抗氧化酶基因促使机体抵御病原体入侵,但超过机体自我调节的限度时会对机体造成损伤。     

脂多糖对三角帆蚌酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活力的影响

对三角帆蚌注射脂多糖后,分别于6、12、24、48、72和96 h测定其血清中酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)的活力。结果显示,2种酶活力均呈先升后降的趋势,其中ACP活力在所有时间段内(6~96 h),试验组均显著高于对照组;而AKP活力在12~72 h时,试验组的AKP活力均显著高于对照组,表明脂多糖(LPS)诱导刺激对三角帆蚌血清中的ACP和AKP活力有激活增强作用。     

3种不同虾类虾头中酶的筛选

以凡纳滨对虾、罗氏沼虾、斑节对虾的加工下脚料——虾头为原料,通过酶的提取、酶活测定及酶含量的分析,对这3种虾类虾头中的蛋白酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、乙酰胆碱酯酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶、多酚氧化酶等酶类进行筛选和评价.结果表明:3种虾类的虾头中凡纳滨对虾虾头的蛋白酶酶活力为39 615.8(±3 108.4)U/gprot,约为其他2种虾的2倍;而罗氏沼虾虾头的碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶具有较高活性,斑节对虾虾头的乙酰胆碱酯酶含量较高,在3种虾类的虾头中均未检测到溶菌酶.     

烟蚜茧蜂寄生对麦二叉蚜体内解毒酶和保护酶活性的影响

烟蚜茧蜂Aphidius gifuensis Ashmead是蚜虫生物防治上的重要寄生蜂,采用分光光度法测定蚜虫被寄生后不同时期体内相关保护酶和解毒酶的活性变化情况,研究了烟蚜茧蜂寄生后对麦二叉蚜Schizaphis graminum(Rondani)体内解毒酶和保护酶活性的影响。麦二叉蚜被寄生后乙酰胆碱酯酶(ACh E)活性在12、72 h时极显著低于对照组。酸性磷酸酯酶(ACP)活性在3、5 h时明显低于对照组,但在24 h时ACP活性极显著高于对照。碱性磷酸酯酶(AKP)活性变化与对照组无显著性差异,仅在10、12 h时AKP活性略高于对照。过氧化氢酶(CAT)活性在24 h时显著高于对照。过氧化物酶(POD)活性在6 h时显著低于对照,在24 h时显著高于对照组。总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性与对照组相比无显著性变化。推测烟蚜茧蜂寄生后对麦二叉蚜体内ACh E活性有抑制作用,对ACP、CAT、POD活性后期有激活作用,对AKP、T-SOD活性无显著影响。