浙江不同品种柑橘黄龙病发生初报

对浙江柑橘黄龙病区种植的和野生的柑橘不同品种进行黄龙病PCR技术检测。温州蜜柑，柿柑，本地早、根橘，柠檬，高橙，玉环柚、早香柚、四季柚，瓯柑、天草，甜橘柚，伊予柑、胡柚，金橘、佛手、构头橙、朱栾，小红橙、枳壳、九里香和山金豆等22个品种能检出病菌。     

柑橘黄龙病菌在柑橘病树不同部位中的定量分布情况研究

采用实时荧光定量PCR检测了柑橘黄龙病菌在广东省阳江市4个柑橘品种9个不同部位中的定量分布情况,为病害防控提供依据。结果表明,柑橘成熟叶片的叶脉样品和叶肉样品中的黄龙病菌靶标基因平均含量分别为5 210 808.08和1 328 972.53拷贝/每克植物组织,均显著高于柑橘新叶的叶脉样品和叶肉样品(分别为18 274.26和7 754.41拷贝/每克植物组织)。果实样品中的柑橘黄龙病菌靶标基因平均含量顺序为囊壁样品橘络样品种皮样品果实中柱样品果皮样品。本研究表明,柑橘黄龙病菌广泛分布于4个柑橘品种的多个部位,但在不同的柑橘个体及不同部位样品中,柑橘黄龙病菌含量均有一定差异。     

柑橘黄龙病病原菌的鉴定及16S rDNA序列分析

采用Nested-PCR技术检测顺昌果园红心柚树中柑橘黄龙病病原的携带情况,通过黄龙病病原菌16S rDNA测序和构建系统发育树比较不同类型柑橘黄龙病原菌之间的进化关系,采用特异引物扩增16S rDNA片段鉴别不同黄龙病病原菌,结合限制性内切酶酶切确定该红心柚园黄龙病病原的类型,并分析不同类型柑橘黄龙病病原16S rDNA序列差异性.结果表明:所取的12株红心柚树叶片样品中有7株树的叶片中检测出黄龙病病原,黄龙病病原的阳性检出率为58.33％,其中4个为显性性状,3个为隐性性状.柑橘黄龙病病原菌16SrDNA进化分析及限制性内切酶XbaI酶切结果表明,顺昌柑橘黄龙病病原菌属于亚洲型.不同类型柑橘黄龙病病原菌16S rDNA的序列差异性分析表明,亚洲种与非洲种的差异性为2.75％,非洲种与美洲种的差异性为3.90％,亚洲种与美洲种的差异性为3.44％.     

柑橘黄龙病菌基因组学的研究进展

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是柑橘生产上最具毁灭性的病害,严重威胁着世界柑橘产业的发展。该病害由难培养细菌——候选韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)所引起,通过带病苗木和媒介昆虫进行传播蔓延。近年来,随着DNA测序技术和生物信息学的发展,基因组学被广泛应用于柑橘黄龙病的研究,并为克服黄龙病菌难培养所造成的研究瓶颈提供了新的方法和思路。柑橘黄龙病菌基因组学的研究,不仅有助于探究黄龙病菌与寄主植物的互作关系,而且可为抗病栽培和病害早期检测提供重要的理论基础。本文结合当前柑橘黄龙病的研究概况、病原全基因组的测序策略及基因组的特征描述,重点综述基因组学在黄龙病致病机理、病原遗传多样性与分子检测等方面的研究进展。     

柑橘黄龙病菌与柑橘根系关系研究进展

由柑橘黄龙病菌(Candidatus Liberibacter spp.)引起的柑橘黄龙病是一种极具破坏性的柑橘病害,严重影响柑橘产业的可持续发展。目前关于柑橘黄龙病的研究多以柑橘叶片为研究对象,而柑橘黄龙病是一种系统性病害,其症状在柑橘叶片、果实和根系上均有表现。近年来,越来越多的研究从根系的营养、基因和蛋白表达、根际微生物等角度研究柑橘黄龙病菌对柑橘根系的影响,因此就柑橘黄龙病菌与柑橘根系关系的最新研究结果进行综述,以期为系统开展柑橘黄龙病菌与柑橘根系互作关系的研究提供有益的借鉴和参考。     

云南柑橘黄龙病病原检测及其 １６ＳｒＤＮＡ序列分析

利用柑橘黄龙病菌的特异引物,对采自云南红河州建水县和个旧市、玉溪市华宁县、大理州宾川县、昭通市盐津县、德宏州瑞丽市以及保山市隆阳区等地共 １５１个疑似柑橘黄龙病样品进行了黄龙病菌的检测,其中建水县有 ５个样品检测结果为阳性,检出率为 ３３３％;个旧市、华宁县和宾川县各有 １个样品为阳性,检出率分别为 ８.３％,５.５％,６.７％;而昭通、德宏和保山的样品均为阴性。表明黄龙病在云南的主要柑橘产区建水、个旧、华宁和宾川均有不同程度的发生,其中建水县发生率较高,生产上应尽快引起重视。对所获得的黄龙病菌 １６ＳｒＤＮＡ进行了克隆和序列测定,发现 ８个云南柑橘黄龙病菌 １６ＳｒＤＮＡ的序列一致性均为１００％,与柑橘黄龙病菌亚洲种 （ＣａｎｄｉｄａｔｕｓＬｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒａｓｉａｔｉｃｕｓ）相应序列的一致性为 ９８.７％ ～１００％,与柑橘黄龙病菌非洲种 （ＣａｎｄｉｄａｔｕｓＬｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒａｆｒｉｃａｎｕｓ）的一致性为 ９７.５％ ～９８.７％,而与柑橘黄龙病菌美洲种（ＣａｎｄｉｄａｔｕｓＬｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）的一致性均为 ９６.５％。表明云南主要柑橘产区发生的黄龙病菌均属于柑橘黄龙病菌亚洲种。     

青霉素喷施防治柑橘黄龙病试验初报

柑橘黄龙病是世界性分布的柑橘毁灭性病害,严重制约着柑橘产业的发展．为探究青霉素对柑橘黄龙病的防治效果,本试验采用喷施的方式对柑橘黄龙病病树进行处理,同时结合实时荧光定量ＰＣＲ技术对病树内黄龙病菌量进行动态监测,确定青霉素对柑橘黄龙病的相对防效．结果表明连续喷施４次青霉素３个月和７个月后病树中黄龙病菌含量均出现不同程度的上调,相对防效分别为－１７０.１６％和－６３.９６％．以上结果表明喷施的方式进行青霉素处理黄龙病病树对柑橘黄龙病并不能取到防治效果．     

梅州市柑橘黄龙病的调查与综合防控措施

柑橘黄龙病(cirtus Huanglongbing,HLB)是细菌性病害,本文作者通过聚合酶链式反应(PCR)对梅州地区柑橘黄龙病发生情况进行调查,对梅州地区一共761个疑似黄龙病样本进行检测分析,并在此基础上提出梅州市柑橘黄龙病的综合防治策略,为梅州的柑橘产业发展提供参考。     

广西砂糖橘黄龙病亚洲种的Nested—PCR检测

【目的】利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据。【方法】选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基因组DNA,采用柑橘黄龙病亚洲种16S rDNA特异引物进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计待检样品柑橘黄龙病病原菌亚洲种的带菌率。【结果】对214份样品的Nested-PCR扩增结果,部分样品可得到1160 bp左右的特异条带,与预期大小相符但条带明暗不同。来自广西9市17个采样点的砂糖橘叶片样品均检测出黄龙病亚洲种病原,平均检出率均在66.0%以上,其中检出率最高的是来自东兴市的样品,检出率为100.0%,检出率最低的是来自南宁市的样品,检出率为66.9%;斑驳、缺素型黄化、叶脉黄化、小叶和无症状叶片样品中均可检测出黄龙病亚洲种。【结论】Nested-PCR技术具有灵敏度高、特异性强的特点,能够快速、准确检测出各种症状样品的黄龙病病原,可用于柑橘黄龙病的早期诊断。     

广西砂糖橘黄龙病亚洲种的Nested-PCR检测

[目的]利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据.[方法]选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基因组DNA,采用柑橘黄龙病亚洲种16S rDNA特异引物进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计待检样品柑橘黄龙病病原菌亚洲种的带菌率.[结果]对214份样品的Nested-PCR扩增结果,部分样品可得到1160 bp左右的特异条带,与预期大小相符但条带明暗不同.来自广西9市17个采样点的砂糖橘叶片样品均检测出黄龙病亚洲种病原,平均检出率均在66.0%以上,其中检出率最高的是来自东兴市的样品,检出率为100.0%,检出率最低的是来自南宁市的样品,检出率为66.9%;斑驳、缺素型黄化、叶脉黄化、小叶和无症状叶片样品中均可检测出黄龙病亚洲种.[结论]Nested-PCR技术具有灵敏度高、特异性强的特点,能够快速、准确检测出各种症状样品的黄龙病病原,可用于柑橘黄龙病的早期诊断.     

柑橘黄龙病分子生物学检测方法研究进展

柑橘黄龙病是世界范围内极具破坏性的危险性病害,可防可控但不可治,加强黄龙病早期诊断,探索快速、准确、高灵敏度、高特异性的检测技术对防止该病害的传播蔓延具有极其重要的意义。综述了国内外关于柑橘黄龙病分子生物学检测诊断方面的研究进展,介绍了该领域各检测方法的特点和存在问题,主要介绍了PCR检测技术,提出了大批量黄龙病样品检测适宜选用巢式PCR检测方法。     

甜橘柚的品质检测与分析

采集19个甜橘柚样品,对其可溶性固形物、可滴定酸、V_C、总黄酮和总糖的含量进行检测,并与国家、行业和团体标准及相关文献资料对比分析,对庆元甜橘柚的品质做出客观评价。     

柳州市柑橘黄龙病发生情况调查

柑橘黄龙病严重妨碍柳州市柑橘产业健康发展,掌握柳州市柑橘黄龙病发生情况有利于黄龙病防治工作开展。本试验采用五点取样法从全市柑橘产区正常管理的果园采集柑橘样品,通过提取DNA及常规PCR技术检测分析,结果显示柳州市市郊及五县都有不同程度的柑橘黄龙病发生,采集的600份样品中检出阳性样品24份,阳性率是4.00%。其中,柳城县黄龙病阳性率8.90%,发生情况较为严重。     

丽水市莲都区柑橘黄龙病防控技术措施

柑橘黄龙病为我国检疫性农业植物疫病,对柑橘生产造成极大的危害。浙江省丽水市莲都区柑橘黄龙病始发于2001年,通过开展黄龙病防控工作,至2015年,柑橘黄龙病病株率被控制在0.13%,防控工作取得了明显成效。为给类似地区提供防治借鉴,现对莲都区柑橘黄龙病的发生情况及采用的防控技术措施进行总结介绍。     

甜橘柚成了丽水农民的“摇钱树”

丽水柑橘产业改造、优化和提升的良种———甜橘柚,已成了浙江省丽水市农民又一棵“摇钱树”。2004年12月25日,丽水市科技局的重大科技项目“柑橘产业改造提升应用技术研发与推广———甜橘柚”通过了省市专家的验收和评审,得到了与会专家和科技局领导的高度评价。据了解,甜橘柚在项目实施前,只有庆元县种植了4.33hm2,产量1.5t,产值1.5万元。到2004年项目完成时,全市9个县(市、区)种植面积达到了388.67hm2,产量达到340t,产值300多万元,平均单价9元/kg。在庆元,甜橘柚的产量增加226.7倍,产值增加200倍,已经成了庆元初具规模的新兴产业。据项…     

柑橘黄龙病菌分泌蛋白的预测和原核表达

柑橘黄龙病是我国柑橘产业可持续发展面临的重大威胁,建立高效、准确、灵敏的检测方法是黄龙病防控的关键.通过生物信息学分析柑橘黄龙病菌亚洲种(CLas)不同菌株基因组,预测出83个经典分泌蛋白和87个非经典分泌蛋白.选定其中14个分泌蛋白基因,经大肠杆菌密码子优化后构建pET-28a-CLasSec和pCold-I-CLasSec系列原核表达载体.经IPTG诱导条件优化、镍磁珠法纯化后,获得了CLasSec2、CLasSec4、CLasSec5、CLasSec6、CLasSec8和CLasSec12等6个柑橘黄龙病菌亚洲种分泌蛋白.     

应用PCR和测序技术诊断吉安和抚州两地区的柑橘黄龙病

柑橘黄龙病是国内植物检疫对象,明确其地理分布对控制黄龙病扩散具有重要意义.于2008年10～11月赴吉安和抚州可疑黄龙病桔园采集30份病样,其中吉安地区19份,抚州地区11份,采用PCR方法对这30份样品进行柑橘黄龙病菌检测,结果从吉安地区4个病样(遂川县1个、万安县2个、泰和县1个)和阳性对照中扩增到预期的长约700 bp的DNA片段,其他样品和阴性对照中则没有预期的DNA片段产生.选择遂川双桥1号、万安窑头1号和泰和文田4号3个分离物的PCR产物进行纯化、测序,从中各获得一段长为654 nt的序列.经同源性比较发现,这3条DNA序列不仅完全相同,而且它们与已报道的柑橘黄龙病菌亚洲种国内外所有分离物的对应序列的同源性也均为100%,但它们与已报道的柑橘黄龙病菌非洲种核苷酸序列同源性只有79.6%,结果表明上述3个柑橘黄龙病菌分离物均属于亚洲种.柑橘黄龙病菌亚洲种在吉安地区遂川、万安和泰和县存在的发现,希望能引起有关部门足够的重视.     

湘南脐橙柑橘黄龙病的PCR检测及内生细菌的分离

为确保湘南脐橙产业发展安全,严格防控柑橘黄龙病,从湘南地区几个脐橙种植园采集柑橘黄龙病疑似病株样品和健康植株样品,利用文献报道的柑橘黄龙病PCR检测常用引物对样品进行分子检测,并从病株组织中分离内生细菌进行分析鉴定。结果表明:在柑橘黄龙病的常规PCR检测中,湘南脐橙总核酸对P400引物的灵敏度最高,是湘南地区脐橙中柑橘黄龙病害常规PCR检测的最佳引物,其次为P535引物,而OI和16S这2对引物的灵敏度较低;对脐橙中柑橘黄龙病病株组织内生细菌的分离鉴定发现,柑橘中可培养内生细菌主要归类为7个属,分别为短杆菌属(Curtobacterium)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、异常球菌属(Deinococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、甲基杆菌属(Methylobacterium)、微杆菌属(Microbacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus);其中,LB和1/10LB培养基中的优势菌属为短杆菌属、鞘氨醇单胞菌属和芽孢杆菌属;而脐橙树叶汁培养基中的优势菌属为短杆菌属、鞘氨醇单胞菌属和微杆菌属。     

遂川县柑橘黄龙病发生动态及综合防控技术

近年来,遂川县柑橘黄龙病比较严重,严重威胁着柑橘产业发展。本文介绍了遂川县柑橘黄龙病的发生情况,分析了该病主要来源,提出了综合防控技术,以期为科学防控柑橘黄龙病提供参考。     

梅州地区柑橘黄龙病的常规PCR与实时荧光定量PCR检测技术研究与应用

本文利用TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测技术对梅州地区疑似柑橘黄龙病样品进行检测,并与常规PCR检测进行对比。结果表明,实时荧光定量PCR用于检测柑橘黄龙病菌结果快速、准确、可靠且无污染。采用2种方法对梯度稀释的阳性样本进行检测发现,实时荧光定量PCR的灵敏度较常规PCR更高,能够检出样品中痕量的病原菌。本研究在梅州地区建立了以实时荧光定量PCR方法进行柑橘黄龙病疑似植株的检测,可以为梅州地区提供更准确、更灵敏、快速的黄龙病检测技术。