基于分子技术的柑橘黄龙病研究进展

黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害。近年来该病害在世界多个柑橘主产区发生与流行,使其再次引起了世界柑橘生产者和研究者的高度关注。目前认为柑橘黄龙病病原是一种韧皮部难养细菌,暂命名为"Candidatus Liberibacter spp."。随着现代分子生物学技术的迅猛发展,柑橘黄龙病相关菌的全基因组和柑橘全基因组序列日趋完善。我们在这一大背景下主要介绍近5 a来柑橘黄龙病分子水平的研究概况,特别是在分子流行学、基因组学、转录组学、蛋白质组学、病原致病性和寄主抗病性分子机理及防控方法等方面的进展,并对目前研究中存在的困难进行分析,对今后的研究方向进行展望。     

定量分析柑橘黄龙病菌在沙糖橘中的分布

柑橘黄龙病是由难培养的革兰氏阴性菌“Candidatus Liberibacter asiaticus”引起的严重为害柑橘的系统性病害。本研究通过实时荧光PCR 检测黄龙病菌在沙糖橘上的分布情况，结果表明不同部位黄龙病病菌浓度存在较大差异。其中果实中橘络部位病菌含量最高，且病原菌在果实中呈现富集的状态。本研究结果可为病原菌在植株体内的转运规律提供参考。     

沙田柚黄龙病病原16S rDNA片段的克隆与序列分析

采集田间表现斑驳症状的沙田柚叶脉,用CTAB法提取总DNA。根据柑橘黄龙病病原16S rDNA的核苷酸序列设计引物P1/P2,进行PCR扩增,获得1条大小为1 167 bp的片段。酶切分析显示,该片段可被切成大小分别约为640 bp和520 bp的2个片段。扩增产物经纯化,与pM D 18-T V ector连接,转化大肠杆菌(E scherich ia coli)DH 5α,筛选克隆重组子。对PCR产物进行测序及序列分析,结果表明,与柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA的同源性为99%,与非洲种的同源性为97%,与美洲种的同源性为96%。认为,沙田柚的斑驳症状是由黄龙病病原引致的,称之为沙田柚黄龙病。该沙田柚黄龙病病原属于柑橘黄龙病病原亚洲种(L iberobacter as iaticus)中的一个成员。系统进化树分析显示,沙田柚黄龙病病原与中国柑橘黄龙病病原亲缘关系最近,推测是直接来自中国柑橘黄龙病病原。     

斑驳型黄龙病对沙糖桔产量和品质的影响

制订系统、明确的沙糖桔植株斑驳型黄龙病严重度5等级分级标准,按分级标准选取不同严重度斑驳型黄龙病的6年生沙糖桔植株,取叶样进行病原菌“Candidatus Liberibacter asiaticus”的Nested-PCR检测和单株产量测定.结果表明,0级(健康)植株的叶样均扩增不到特征条带,未感染黄龙病；1～4级植株的叶样均能扩增到条带,均感染黄龙病.0～4级严重度沙糖桔的平均株产量分别为61.90、29.75、19.43、14.08和9.70 kg,各级之间的单株产量呈显著性差异(P＜0.05),严重度越高,单株产量越低.比较沙糖桔显症果实(红鼻子果)和健康果的单果重、可溶性固形物和维生素C含量,发现红鼻子果的各项指标极显著(P＜0.01)低于健康果.     

东山猪的养殖及发展前景

东山猪是广西地方良种生猪。在养猪业发展的进程中,东山猪养殖业面临很多挑战。本文分析了东山猪饲养优势,指出了存在的问题,并对今后发展前景进行展望。     

斑驳型黄龙病对砂糖橘产量和品质的影响

本文对斑驳型黄龙病不同发病程度的砂糖橘植株制订系统明确的严重度分级标准，将不同严重度的6年生砂糖橘植株进行单株产量的测定，0~4级株产量分别为61.9±4.08 kg、29.75±3.57 kg、19.43±1.36 kg、14.08±1.11 kg和9.7±0.80 kg。不同严重度的砂糖橘单株产量呈显著差异(P<0.05)，严重度越高，单株产量越低。另外，对显症砂糖橘果实（红鼻子果）和健康砂糖橘进行单果称重、可溶性固形物和维生素C含量测定，红鼻子果的含量比健康果实的含量呈极显著降低(P<0.01)。     

羊链球菌病的诊治

（一）发病情况 2010年3月11日我市郊区某养羊户共养羊35只,4日内发病14只,死亡6只,发病羊主要表现体温升高、咽喉肿胀等症状。死亡率达17%。     

快速检测单头柑橘木虱体内黄龙病病原

本研究通过采用简易的柑橘木虱制样方法,利用PCR检测技术在单头柑橘木虱体内检测到黄龙病病原,并利用XbaⅠ限制性内切酶将从柑橘木虱体内扩增的黄龙病病原16SrDNA酶切成520bp和640bp两个片段,证实了木虱体内黄龙病病原为亚洲种。本研究成功地建立了一套快速检测柑橘木虱体内黄龙病病原的方法,可为检疫工作者和相关研究人员提供重要参考。     

利用PCR检测柑桔黄龙病病原研究

对引起柑桔黄龙病的类菌原体的ＰＣＲ检测方法进行了研究。结果表明，利用ＰＣＲ方法不但能对ＢＬＯ，ＤＮＡ进行离体扩增，而且对各种不同来源的感病植物样品也能很好地进行检测。本首次报道了从未显症的植物上用ＰＣＲ方法检测到了ＢＬＯ，枝接试验证实了该方法的可靠性。     

水稻叶片mRNA差异显示技术中总RNA的提取和检测

水稻叶片mRNA差异显示技术中,叶片总RNA的质量是十分关键的因素,介绍水稻叶片mRNA差异显示相关试验中,叶片总RNA提取和检测的方法及需要注意的一些问题。