旱黄瓜未授粉子房雌核诱导技术体系研究

以4种不同基因型旱黄瓜的未授粉子房为试材,研究了基因型、子房不同发育时期及采样时间、不同质量浓度的TDZ、温度对雌核诱导的影响,旨在探究旱黄瓜未授粉子房诱导雌核发育的技术体系。结果表明,不同基因型对雌核发育的影响差异显著,"1503"的雌核启动率最高,为77.22%;开花前1 d的样品最优,此时1503雌核启动率为95.56%;随TDZ质量浓度上升,雌核启动率呈先上升后下降趋势,其中0.08 mg/L TDZ处理的1503雌核启动率最高,达91.6%;35℃暗培养4 d的处理,雌核启动率最优,达78.33%。旱黄瓜未授粉子房培养最优雌核诱导技术体系:以开花前1 d未授粉子房为材料,在添加0.08 mg/L TDZ的诱导培养基上进行35℃暗培养4 d。该研究成功建立了旱黄瓜未授粉子房雌核诱导技术体系,为旱黄瓜遗传育种及基础理论研究提供技术支撑。     

不同因素对黄瓜未受精子房胚状体诱导的影响

以黄瓜未受精子房为试材,研究了激素种类、暗培养、温度等对启动雌核发育和胚状体诱导的影响,旨在探讨建立黄瓜未受精子房培养获得再生植株的技术体系.结果表明,未授精子房预培养阶段,25℃下暗培养1 d,启动雌核发育的反应率最高可达91.3%;TDZ浓度对启动雌核发育的影响与温度有关:相同TDZ浓度下,25℃比35℃更适合启动雌核发育;25℃条件下,启动雌核发育的最适TDZ浓度为0.02 mg/L,反应率可达90.1%;35℃热激处理中,启动雌核发育的最适TDZ浓度为0.06 mg/L,反应率为61.1%;胚状体诱导阶段,培养基中添加1.0 mg/L6-BA时,平均每子房产胚量最高,为10.53个.     

外源添加物对西葫芦胚状体诱导效果研究

以6个基因型的西葫芦未授粉子房为试材,于MS培养基中分别添加不同质量浓度6-BA(1.0,1.5,2.0mg/L)和TDZ(0.04,0.05,0.06mg/L),筛选最适培养基与出胚材料;获得最适培养基后再分别添加不同质量浓度的NAA,AgNO3或相同质量浓度(20mg/L)秋水仙碱不同时间培养,分析其对西葫芦未授粉子房胚状体诱导的效果。结果表明:1西葫芦未授粉子房在培养基(P5)MS+30g/L Suc.+8g/L Agar+0.05mg/L TDZ上胚状体诱导效果最好,XH13-7为出胚率最高材料;2在P5培养基中添加0.25 mg/L NAA有利于出胚并可适当降低玻璃化率,胚状体诱导率高达10.53%;3添加20mg/L AgNO3显著减少胚状体玻璃化,对出胚影响不明显,玻璃化率仅为11.63%;4添加20mg/L秋水仙碱抑制胚状体发生。     

影响黄瓜未授粉子房培养胚发生因素的研究

以不同基因型黄瓜为试材,研究了子房发育时期、热激处理时间、TDZ和AgNO3对黄瓜未授粉子房培养过程中胚发生的影响.结果表明处于开花前2～3 d的子房胚发生率相对较高,达83.8%;在子房培养开始阶段进行35 ℃处理的胚发生率显著高于对照(0 d),其中处理3 d 的效果最好;添加0.01～0.04 mg·L-1 TDZ的诱导培养基培养的胚发生率为20.0%～72.7%,其中添加0.04 mg·L-1 TDZ的胚发生效果较好;在诱导培养基中添加AgNO3可以提高胚发生率,同时能缩短胚出现的时间并提高胚产量.     

黄瓜花药培养愈伤组织诱导及再生的研究

以10个黄瓜多代自交系为试材,研究了黄瓜花药小孢子不同发育时期、基因型、预处理时间、植物生长调节剂对愈伤组织的发生和分化的影响.试验结果表明,小孢子在单核中后期时愈伤组织诱导率最高;不同基因型愈伤组织诱导率不同;4℃低温预处理72h最适宜诱导花药愈伤组织;诱导培养基(基本培养基为B5+蔗糖50 g/L+琼脂7g/L,下同)中添加0.25 mg/L6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L AgNO3时愈伤组织平均诱导率最高;较优的生芽和生根培养基分别为0.5 mg/LNAA+1.5 mg/LKT+1.0 mg/L AgNO3和0.1mg/L6-BA+0.5 mg/LNAA+1.0ng/LAgNO3(有机元素加倍);基因型和培养基是愈伤组织发生和分化的主要影响因素.     

黄瓜高频再生体系的建立

【目的】建立黄瓜的高频再生体系,为黄瓜种质的遗传转化奠定基础。【方法】分别以华北型黄瓜种质26号、欧洲型黄瓜种质14-1为材料,研究不同激素组合、AgNO3质量浓度、苗龄、子叶切割方式及外植体接种方式对黄瓜子叶节不定芽诱导的影响。【结果】华北型黄瓜种质26号再生的最适激素组合为4.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达85.00%和2.51;欧洲型黄瓜种质14-1再生的最适激素组合为3.0mg/L 6-BA+2.0mg/L ABA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达86.70%和2.77;5d苗龄的黄瓜子叶作为外植体时诱导不定芽的状态最佳;切除子叶端部2/3且基部附带有1mm子叶柄、以叶背向下子叶柄微插入的方式进行接种再生效率最高。【结论】建立了黄瓜种质14-1和26号材料的高频再生体系,再生率均可达85%以上。     

2种基因型大白菜高效子叶离体不定芽再生研究

以2个优质大白菜材料德高早熟长江5号(DG)和双耐(SN)的子叶为外植体,研究了不同激素配比、苗龄和AgNO3浓度对子叶不定芽再生的影响,建立了2种大白菜的子叶不定芽高效再生体系,为进一步有效的利用基因工程技术改良大白菜品种奠定了基础.结果表明:与6-BA相比,TDZ对诱导子叶不定芽再生更有效.在单独附加细胞分裂素(6-BA或TDZ)的MS培养基上,不能诱导子叶不定芽的分化.DG在MS+ 1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/LNAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为73.80％,最适苗龄为6d,平均再生系数为4.27.SN在MS+1 mg/L TDZ +0.4 mg/L NAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为59.09％,最适苗龄为6d,再生系数为4.03.     

AgNO3对银杏胚愈伤组织诱导及分化的影响

为探讨AgNO3对不同发育期银杏胚愈伤组织诱导及分化的影响,以银杏3个不同发育程度合子胚为外植体,添加0～5 mg/L AgNO3做处理。结果表明：AgNO3能显著提高胚的愈伤诱导率：早期心形胚鱼雷形胚,早期子叶胚,成熟胚子叶分别在浓度1,0．5,0．1 mg/L时达到最大诱导率,为87％,77％,98％。隔代添加AgNO3促进了早期子叶胚愈伤的分化：1．0 mg/L处理在第90天分化出愈伤化银杏叶和胚类似物,3．0 mg/L处理分化出短小叶片;常规添加AgNO3的处理在0．1 mg/L分化出芽点。遮光处理表明：黑暗培养对愈伤诱导率影响不明显;添加活性炭时,AgNO3促进胚轴愈伤而抑制子叶愈伤,胚轴愈伤组织白色透明。综合分析表明：AgNO3能提高银杏胚的愈伤组织诱导率并促进其分化。     

硝酸银在水稻农杆菌转化中的作用

以籼稻、粳稻两种类型的成熟种子为外植体研究了不同浓度的AgNO3在水稻农杆菌转化中的作用。结果表明，在农杆菌转化前添加AgNO3可以提高愈伤组织诱导率，最适浓度为8～10mg／L，但对愈伤组织的分化没有明显促进作用；转化后添加低浓度的AgNO3可以减轻愈伤组织的褐化，提高抗性愈伤率和绿苗分化率，最适浓度为2-8mg／L。同时发现，无论是转化前还是转化后，添加高浓度的AgNO3对水稻愈伤组织的分化均具有毒害作用。     

不结球白菜离体培养再生体系的优化

为了筛选较易再生的不结球白菜品种,为转基因工作建立良好的再生体系,以暑绿、苏州青、亮白叶和矮抗5号为材料,研究了基因型、外植体类型以及不同的激素配比对再生频率的影响.结果表明不同品种中,暑绿的再生频率最高.不同外植体类型中,子叶-子叶柄再生频率最高.种子发芽培养基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)使幼苗生长健壮,利于外植体分化,不定芽分化率均在60.00%以上,子叶-子叶柄在培养基MN 0.5 mg·L-1 TDZ 0.5 mg·L-1 NAA 7.5 mg·L-1 AgNO3中再生频率最高,达到80.00%,表明TDZ在诱导器官的发生中有较强的持续效应.     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。     

影响草莓叶片植株再生因素的研究

目前建立草莓的再生体系大多采用TDZ作为主要激素，本研究以广泛栽培的四个草莓品种为材料，系统地研究了不同基因型、叶龄、褐化、暗培养、基本培养基、不同激素组合、Ag^ 等诸多因素对叶片再生的影响，建立了不依赖于TDZ的弗吉尼亚草莓叶片外植体的不定芽再生体系。研究结果表明Ag^ 并不能促进草莓弗吉尼亚植株的再生，反而起到了抑制作用。以顶部充分伸展的18～21d叶龄的无菌苗叶片为外植体，再生效果最好，将此类叶片放在以MS为基本培养基、附加1．6～1．8mg/L6-BA，0．1mg／L NAA，0．4-0．5mg／L KT，O．1mg/L2，4-D的分化培养基上，14d后便可见到不定芽，经过愈伤组织阶段从叶片上分化产生，出现的高峰期在接种后的20—30d，芽分化率高达60％以上。该再生体系可作为基因转化的受体系统。     

长寿花叶盘离体培养及植株高效再生研究

以长寿花叶盘做为外植体进行再生体系的建立,通过一定的激素组合诱导,结果表明MS 6-BA2.0mg/L NAA0.5mg/L组合愈伤组织诱导率可达86.6%,再生率达83.3%,外植体叶盘的摆放方式也对再生有显著影响,叶盘叶面向上放置,有利于其再生,反之不利于再生。加入AgNO3(4.0mg/L)溶液,对芽苗的分化有影响,再生苗开瓶练苗一周后容易生根,移苗入土后生长正常。     

盐生植物盐角草同化枝不定芽的诱导与增殖

【目的】建立并确定盐生植物盐角草(Salicornia europaea L)同化枝不定芽诱导与增殖的试验体系和培养基。【方法】以MS为基本培养基,通过附加不同浓度激素(TDZ、NAA、6-BA)及盐(NaCl)进行盐角草不定芽的诱导,筛选诱导盐角草不定芽的最适激素配比及盐浓度;后期通过对细胞分裂素TDZ浓度(0、1.6、1.8、2.0和2.5 mg/L)的摸索,确定盐穗木不定芽增殖的最适浓度。【结果】盐角草同化枝在含有200 mM NaCl的MS₃(2.0 mg/L TDZ、0.1 mg/L NAA)培养基中不定芽诱导率达32.4%,显著高于(P<0.05)其余组,为最适诱芽培养基。再生的不定芽在含有2.0 mg/LTDZ的培养基中经过30~40 d的培养,不定芽增殖率可达619.5%。盐角草不定芽诱导及增殖最适培养基均为:MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mM NaCl。【结论】一定浓度的TDZ、NAA及NaCl组合,可通过直接器官发生途径有效诱导盐角草同化枝不定芽的产生和增殖。     

白菜类作物子叶高频再生体系的建立

以大白菜品种北京80号、油青矮脚45天菜心、四季菜心王的带柄子叶为外植体,研究不同基因型、苗龄、激素组合、预处理条件及琼脂质量浓度对不定芽再生的影响。结果表明,北京80号的最佳培养基为MS+5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2mg/L AgNO3,再生频率为83.6%;油青矮脚45天菜心和四季菜心王的最佳培养基为MS+0.2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+2 mg/L AgNO3,再生频率分别为73.1%和83.2%。3个基因型的带柄子叶在0.5～1mg/L 2,4-D中预处理3d,再生频率达84%以上。4～5d苗龄的外植体诱导不定芽效果较好。琼脂的质量浓度以12g/L为宜。通过不定芽继代培养和生根驯化建立白菜类作物较高再生频率的再生体系。     

花生幼叶丛生芽高效诱导的制约因素研究

以花生品种豫花14号4 d苗龄的幼叶为外植体,对花生幼叶高频不定芽诱导进行研究。在MS培养基的基础上,添加了芽诱导常用的细胞分裂素6-BA、生长素NAA及两种不太常用的脱落酸(ABA)、噻重氮苯基脲(TDZ),结果表明,单独使用6-BA,NAA或TDZ,不定芽诱导率较低;采用较高浓度的6-BA(8 mg/L)、较低浓度的NAA(1 mg/L),添加低浓度的ABA(1 mg/L),不定芽诱导率可达80%以上。最佳诱导培养基为MS+6-BA 8 mg/L+NAA 1 mg/L+ABA 1 mg/L+AgNO32 mg/L,从整体上观察,最佳继代培养基为MS+6-BA 5 mg/L+NAA 2 mg/L+AgNO32 mg/L。同时研究发现,花生幼叶近叶柄基部切口处不定芽诱导率较高,是较理想的不定芽诱导部位。     

“晶瑶”草莓叶片再生体系的建立

以草莓"晶瑶"为试材,研究了暗培养时间、培养温度、激素配比、硝酸银浓度、不同植物凝胶等对不定芽再生的影响,建立了"晶瑶"草莓叶片的离体再生体系。结果表明:硝酸银对"晶瑶"草莓叶片再生有抑制作用;暗培养15 d、28℃的培养温度、以Phytagel为凝固剂有利于"晶瑶"草莓叶片再生;TDZ 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L是较好的诱导培养基激素配比,此时不定芽的再生率达到76.77%,平均再生芽数达到4.3个。     

桃砧木GF677叶片愈伤组织诱导和保存

[目的]研究桃砧木GF677(Prunus amygdalus×Prunus persica)叶片愈伤组织的诱导和保存技术。[方法]以桃砧木GF677试管苗为材料,研究激素含量、基本培养基、AgNO3、暗培养时间、碳源等因素对其叶片愈伤组织诱导和保存的影响。[结果]选取继代时间为28 d左右的试管苗幼嫩叶片,暗培养21 d后转移至光培养进行愈伤组织诱导,较佳的培养基配方为LP基本培养基+TDZ 1.0 mg/L+6-BA 0.6 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+AgNO30.5 mg/L,添加山梨醇20.0 g/L,琼脂6.0 g/L;选取继代时间为21 d左右的愈伤组织暗培养保存,保存较佳的培养基配方为LP基本培养基+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+CH 0.2 g/L,添加蔗糖30.0 g/L,琼脂6.0 g/L。[结论]为桃砧木GF677的遗传转化和无性系变异筛选等工作奠定了基础。     

噻苯隆对月季芽增殖及月季叶片愈伤诱导的影响

为研究噻苯隆( TDZ)对月季的影响,以皇家巴西诺月季的茎段和叶片为外植体,MS为基本培养基,添加一定浓度的细胞分裂素和生长素及不同浓度的TDZ,对其芽增殖和叶片愈伤组织诱导进行了研究.结果表明:促进侧芽增殖的最佳培养基为MS+NAA 0.lmg/L+6BA1.0mg/L+TDZ 2.0mg/L,诱导月季叶片形成愈伤的最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+2,4D5.0 mg/L+ TDZ 1.0mg/L,0.5 cm×1.0 cm的切块有利于愈伤组织的产生.