活菌制剂剂型的加工研究概况

活菌制剂由于无副作用、无残留、不产生抗性，是理想的抗生素替代品，有着广阔的应用前景，本文分析了活菌制剂常用的液体剂型和固体剂型的加工技术及存在的问题，综述了几年来活菌制剂型的研究和开发的情况，探讨了活菌制剂的发展前景。     

绿色木霉菌种制备工艺优化与工业化制备考察

在绿色木霉活菌制剂的工业化生产中，生产菌种的保存周期过短，菌种退化较为严重，制种工艺流程过长，影响最终产品质量。实验基于原配方工艺，通过正交实验及验证实验等方法对固体培养基比例进行优化，最终确定最佳固体种子发酵培养基组成：小米35%，玉米粉25%，玉米浆10%，麸皮30%，无机盐0.8%。在上述优化的绿色木霉固体培养基中，最大产量可达到7.7x10 9个/g （干培养物）。优化后的制种、验证纯度和发酵接种时间由原来的2h减少至25min，经小试摇瓶实验和100L液体发酵罐生产实验证明，绿色木霉在发酵周期30h时，优化后的菌丝含量是优化前儿的1.25倍。     

^60Co-γ射线对植酸酶杀菌效果和酶活性的影响

采用60Co-γ射线辐照处理固体和液体两种植酸酶,研究了不同剂量的杀菌效果和对酶活性的影响情况.结果表明:植酸酶经4.5 kGy刺惜辐照后细菌数和霉菌数含量分别降至1.0x103和2.0x102 cfu/g以下,液体植酸酶酶活损失在5%以下,固体植酸酶酶活损失在8%以下.     

亮菌产漆酶的液体和固体发酵条件优化

为了探讨液体和固体发酵条件对亮菌(Armillariella tabescens)产漆酶的影响,采用正交试验对亮茵液体和固体发酵产漆酶培养基和培养条件进行筛选.供试亮茵在液体培养时产漆酶甚微,在培养基和培养条件优化后最高酶活为7.92 U/mL;固体发酵时在以葡萄糖浓度0.6％、稻草麦麸质量比3∶7、温度27℃、含水量65％、接种量11 mL/100g培养时漆酶酶活可达3496.7 U/g.固体发酵的酶活显著高于液体发酵,固体发酵更适宜亮茵产漆酶.     

金钗石斛类原球茎转化子选择方式的比较

为确立农杆菌介导法转化金钗石斛类原球茎的适宜的选择体系,利用液体纸基、固体培养基与液体滤纸桥3种培养方式,以0,20,40,50,60,80 mg/L质量浓度的潮霉素(Hyg)梯度试验,发现不同培养方式的选择效果有所差异。当使用液体纸基培养在50 mg/L Hyg的选择压下,20 d后可使材料死亡;使用固体培养基时,60 mg/L Hyg的选择压下,1个月以上才见效;在40 mg/L的选择压下,液体滤纸桥选择需要26~29 d。固体培养基选择需要较高的Hyg质量浓度且选择周期长,液体纸基选择可缩短时间,但容易造成转化细胞的生长抑制甚至死亡,比较而言液体滤纸桥是较好的选择方式。     

纳豆固体发酵和液体发酵条件的研究

[目的]确定纳豆固体发酵和液体发酵的最佳条件。[方法]以纳豆芽孢杆菌BN-4菌株为试材,研究纳豆固体发酵中大豆破碎程度、发酵时间和接种量等因素对纳豆芽孢杆菌的生长和酶活的影响,探讨液体发酵中细胞浓度、蛋白质浓度和酶活变化,确定纳豆固体发酵和液体发酵的最佳条件。[结果]纳豆固体发酵最佳条件为：大豆破碎2瓣、接种量8%、发酵时间24 h,纳豆激酶活力最高为976IU/g。在纳豆激酶液体发酵中,发酵最佳时间48 h时,纳豆激酶的蛋白浓度为178 mg/L,纳豆激酶酶活力为174 IU/g;纳豆杆菌活菌浓度、蛋白质浓度和纳豆激酶酶活之间具有很好的相关性,可以通过测定活细胞浓度来监控发酵进程。[结论]为纳豆的生产和纳豆激酶的纯化提供参考。     

球孢白僵菌液体制剂研究

通过液体发酵试验 ,研究了不同营养基质、不同发酵条件对球孢白僵菌液生分生孢子、芽孢子、干物质积累的影响 ,结果显示 :在 5种培养基中 ,除“糖蜜 5 %、玉米浸提液 1%、K2 HPO4 0 1%”(代号D)外 ,其它均不产生芽孢子 ,以D配方生物量最高 ,孢子较大 ,为本试验选出的液体制剂的理想载体 ,最佳发酵条件为温度 2 5～ 30℃ ,pH6 0～7 0 ,通气量以瓶装培养液量为指标不超过 1/ 6瓶装量 ,发酵时间以 96小时为佳。白僵菌液体制剂的理想载体与最佳发酵条件的组合可使白僵菌液生分生孢子达 2 5× 10 10 左右 ,超过了目前四川固体发酵的生产水平     

不同培养基组分对牛支原体生长的影响

为了解不同培养基组分对牛支原体生长的影响,试验选用3种动物血清和4个厂商的琼脂,按照5%、10%、15%的血清浓度依次制备了9种液体培养基,分别进行了牛支原体生长试验;在此基础上,用4个厂商的琼脂依次制备了4种固体培养基,分别进行了牛支原体生长试验;通过对液体培养基OD值的测定和对固体培养基性能指标评价来判断牛支原体生长状况。结果表明,牛支原体在9种液体培养基中均能生长,且培养至60 h时其OD值达到最大;在添加血清浓度相同的情况下,添加马血清培养基的OD值与添加猪血清或胎牛血清培养基的OD值相比差异显著(P0.05);在添加相同类型血清的情况下,添加猪血清或胎牛血清的各培养基之间的OD值相比差异不显著(P0.05),而添加马血清的各培养基之间的OD值相比,添加量10%和15%与5%相比差异显著(P0.05),而10%与15%相比差异不显著(P0.05)。而固体培养基的指标性能评分分别为9(BD公司)、7(香港某公司)、5(上海某公司)、6分(成都某公司)。说明添加10%马血清的液体培养基最适宜牛支原体生长,固体培养基应在此液体培养基的基础上,添加BD公司的琼脂所制备的固体培养基最适宜牛支原体的生长。     

碱性木聚糖酶热稳定性及半衰期研究

目的:通过碱性木聚糖酶热稳定性的研究探究其半衰期和保质期。方法:首先对碱性木聚糖酶溶液的热稳定性进行研究,然后再进行碱性木聚糖没固体制剂的热稳定性研究,最后应用一级动力学模型得出各自的半衰期和保质期。结果:碱性木聚糖酶溶液的温度范围60~70℃,热处理时间1~6 min,6 min后残留酶活最高为35.87%~0,25℃的半衰期和保质期分别为13.73 d和2.08 d;碱性木聚糖酶固体制剂的温度范围100~120℃,热处理时间1~6 h,6 h后残留酶活为81.96%~25.99%,25℃的半衰期和保质期分别为4 920.37 d和748.25 d。结论:碱性木聚糖酶固体制剂具有良好的热稳定性,保质期优于酶制剂国家标准。     

新型液态土壤调理剂对土壤持水特性的影响

为研究新型液态土壤调理剂对土壤持水特性的影响,以市场常用的固体颗粒状保水剂为对照用试验试剂,运用不同试剂、不同施用量进行全面实验的试验方法,得出土壤水分特征曲线。试验中新型液态土壤调理剂施用量分别为:28,21,14g/m2;固体颗粒状保水剂施用量分别为14,11,7g/m2。试验通过激光粒度分析仪将不同试验处理的土样进行粒径分析,结合VG模型及RETC得出不同处理的土壤水分特征曲线。试验结果表明:试验所用新型液态土壤调理剂与固体颗粒状保水剂相比,显著提高了土壤的持水特性,但并不是随着试剂用量的增大持水特性增大的正比例关系。在不同的土层深度,当使用新型液体土壤调理剂时,在土层深度为0~10,10~20cm时均为当使用量为21g/m2时土壤的持水效果达到最优,当使用固体颗粒状保水剂时,0~10,10~20cm处的最优用量分别为7,14g/m2;新型液体土壤调理剂从施用方法、对土壤的持水能力的增加幅度以及降低土壤板结等方面相比较而言,新型液体土壤调理剂与试验用固体颗粒状保水剂相比,更为适宜。     

索氏法提取微藻油脂的工艺优化研究

[目的]优化影响索氏法提取微藻油脂的工艺参数,为进一步研究打下基础。[方法]以聚球藻为材料,采用索氏法提取微藻油脂,研究液料比、提取时间、提取温度对提取率的影响,获得较优工艺参数。[结果]当液料比为6 ml/109cell,提取时间为4 h,提取温度为95℃时,所得油脂含量为0.125 mg/108cell。[结论]该研究结果为进一步优化微藻油脂提取工艺奠定了基础。     

层出镰孢菌原生质体制备条件的研究

[目的]研究层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)原生质体的最佳条件,建立高效制备层出镰孢菌原生质体制备的方法.[方法]通过对菌丝体菌龄、酶解液组合、酶解反应温度及酶解时间等影响因素进行优化,对层出镰孢菌原生质体的制备条件进行研究.[结果]菌块在CMC液体培养基中25℃培养分生孢子3 d后,过滤离心后转移至YEPD液体培养基中培养12 h,该菌丝最适于层出镰孢菌原生质体的制备;用1.2 mol/L KCl溶液配制含有5 mg/m L裂解酶、25 mg/m L崩溃酶、0.05 mg/m L溶壁酶的酶解液在30℃下对菌丝酶解1.5 h,此时原生质体的数量最大,为2.47×10~9个/m L.原生质体再生培养时,使用40%PTC溶液恢复细胞壁,在TB3液体培养基中30℃过夜培养,离心后与TB3固体培养基混合后倒入平板培养,原生质体再生率可达39.75%.[结论]通过对菌丝体菌龄、酶解液浓度、温度、酶解时间等条件的优化,可提高层出镰孢菌原生质体的产量及再生率,为进一步研究层出镰孢菌致病分子机制提供理论依据.     

以天然植物有效成分为主体的饲料添加剂的制备工艺研究

 以水为溶媒通过正交试验得到不同沸点下的最佳提取工艺,结合饲养试验最终确定以天然植物有效成分为主体的饲料添加剂的制备工艺,药材加10倍量水,室温浸泡12 h后减压煮沸（75 ℃）提取1 h,滤过残渣再分别加6倍量水煎煮2次,每次1 h,滤过合并浓缩,真空喷雾干燥得纯品,每1 g抽提物纯品相当于原药材仔猪8.08 g(得率12.38%),中猪8.56 g（得率11.67）,大猪7.56 g（得率13.21%）.     

金龟子绿僵菌的液固双相发酵研究

金龟子绿僵菌是重要的害虫致病真菌,采用液固双相发酵方法对MA4-37菌株进行发酵,研究液体培养基、固体培养基及其厚度、浅盘固体发酵、袋装固体发酵对金龟子绿僵菌生长及产孢量的影响,优化控制发酵过程。结果表明,液体发酵较适合的培养基为发酵液B(大豆1%、蔗糖1%、NaCl0.5%、MnSO40.5%,用KH2PO4-K2HPO4缓冲液调节pH值为6.0～7.0),采用该培养基时液生分生孢子产量和菌丝生长量均最高,分别达到4.3×109个/L、5.99g/L。固体发酵时,浅盘发酵方法优于袋装发酵,其中采用配方F的固体培养基(碎米600g、大米300g、H2O 50%、KH2PO4-K2HPO4缓冲液0.05%、蔗糖0.5%),厚度在1.3cm时,浅盘培养7d的产粉量可达16.1mg/g。     

草莓枯萎病拮抗菌JM-3的鉴定及生防效果评价

为明确草莓枯萎病拮抗菌JM-3的分类地位,并评价其防治效果,本研究通过生理生化分析、16S rDNA、gyrA和gyrB基因序列比对进行菌种鉴定,同时采用抑菌活性测定、盆栽和田间防效试验评价其生防效果。结果表明,生防菌JM-3属于贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis,其对草莓枯萎病菌的平板对峙抑制率为57.42%。盆栽试验发现,处理后90天,拮抗菌JM-3固体制剂对草莓枯萎病病情指数的防效为83.02%,高于菌液和多菌灵处理,表明固体制剂的持效性较高。田间试验结果趋势与其基本一致。生防菌JM-3液体和固体制剂处理的果实糖酸比分别为8.88和8.90,显著高于多菌灵处理和对照。可见拮抗菌JM-3对草莓枯萎病具有较高的生防效果,且有助于提升草莓品质,具有较好的应用前景。     

猪用复合微生态制剂制备及保存期内活菌数研究

为了确定两种猪肠道益生菌的同体发酵效果,以及复合微生态制剂在不同保存条件下的活菌数变化.对猪肠道益生菌干酪乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌进行同体发酵,测定其活菌数,然后按照一定比例将两种益生菌与液体发酵的纳豆芽孢杆菌冻干菌粉混合制成复合微生态制剂;测定该制剂在4℃和室温保存状态下14 d内及半年内益生菌活菌数量的变化.保存14...     

Optimization of Fermentation Condition of Yeast Culture

Culture condition of every phase for fermentation of yeast culture was studied, and its solid and liquid conditions of elaboration were optimized to improve the total counts of living cells. Results showed that microzyme grew best at 30℃ when solid fermented, and the count of the living cells reached the tiptop with pH 5.5. The count of Candida tropicalis could reach 137.96× 10^9 cfu·g^-1, the count of Saccharomyces cerevisia could reach 134.62× 10^9 cfu·g^-1 the best liquid fermentation condition for cell-wall broken was 50℃ for 28 h, the rate of cell-wall broken could reach 80% at least; the rate of vitamin loss in yeast could be the minimun, the loss rate of vitamin B6 in Candida tropicalis and Saccharomyces cerevisiae was 8.71% and 19.54% respectively, the loss rate of vitamin B2 was 19.39% and 13.18%, respectively, and the loss rate of vitamin B6 was 6.3% and 3.04%, respectively.     

基质固相分散-高效液相色谱法测定甘蔗中痕量甲拌磷和特丁硫磷

建立了基质固相分散(MSPD)-高效液相色谱紫外检测法(HPLC/UVD)测定甘蔗中痕量甲拌磷、特丁硫磷农药残留量的方法.甘蔗样品经弗罗里硅土研磨均匀后,石墨化碳黑净化,丙酮作为洗脱液,甲醇-水(体积比10:1)为流动相,HPLC/UVD进行分析检测.结果表明:在1.0～30.0μg/mL和1.0～40.0μg/mL范嗣内,甲拌磷和特丁硫磷浓度与峰面积呈良好的线性关系;样品加标平均回收率为82.6%～92.4%,相对标准偏差(RSD)为314%～6.7%.     

拟南芥悬浮细胞及其愈伤组织对潮霉素的反应

研究了潮霉索对拟南芥悬浮细胞及其愈伤组织的作用效果和特性．结果表明：潮霉素对拟南芥悬浮细胞生长、愈伤组织诱导及其生长均有极明显的抑制作用。但作用效果和特性均有所不同；拟南芥悬浮细胞继代培养阶段、愈伤组织诱导阶段和愈伤组织增殖阶段的临界致死质量浓度分别为25、2．5、1．5mg／L，液体与固体培养条件下差异极大；潮毒素需要一定处理时间才能充分表现其抑制细胞生长或杀死细胞的效果，一般液体培养条件下3d以后、固体培养条件下5d以后效果趋于稳定，但不同的处理质量浓度有较大差异．还就液体与固体培养条件下作用效果差异的原因进行了讨论，并提出了对潮毒素抗性标记筛选的建议．