软化工艺对蚕沙叶绿素萃取效率的影响

[目的]优化影响蚕沙叶绿素萃取效率的软化工艺参数。[方法]以蚕沙为材料,采用超声波辅助法萃取蚕沙中的叶绿素,并以叶绿素a萃取效率为指标,比较软化剂用量及软化时间对萃取效率的影响,获得最优软化工艺。[结果]当软化剂NaCO3（0.05 g/ml）用量0.84 ml、软化10 min时,蚕沙中叶绿素的萃取效率最高,可达13.56 mg/L（6.78 mg/g）。[结论]该研究不仅为蚕沙叶绿素萃取工艺的进一步优化奠定基础,还有益于理解蚕沙软化机理。     

桑叶叶绿素光谱特征及其含量测定的初步研究

[目的]研究桑叶叶绿素的光谱特征及其含量的变化规律。[方法]以新鲜桑叶为材料，采用有机溶剂萃取法和分光光度法对桑叶叶绿素进行提取与含量测定，通过比较不同节位桑叶及桑叶不同部位的叶绿素含量，分析桑叶叶绿素的光谱特征及其含量的变化规律。[结果]桑叶叶绿素的光谱特征与其他高等植物叶绿素的光谱特征类似；不同节位桑叶中叶绿素含量为中部〉底部〉顶端，但叶绿素a／b的比值却为底部〉硕端〉中部；而桑叶不同部位叶绿素含量及a／b比值的高低顺序依次为叶柄〉叶中〉叶尖。[结论]不仅为叶绿素的提取及含量测定提供了方法性参考，而且有益于叶绿素的进一步研究。     

家蚕感染质型多角体病毒相关基因Arylphorin的克隆与鉴定

【目的】克隆家蚕Arylphorin的cDNA全长序列,利用生物信息学对该序列进行分析,检测该基因在家蚕感染质型多角体病毒（Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus, BmCPV）后的表达量变化模式,为进一步研究其生物学功能奠定基础。【方法】以家蚕中肠总RNA为模板反转录合成cDNA,利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆家蚕Arylphorin的全长cDNA;通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析其组织表达模式和在家蚕感染BmCPV后的表达差异。【结果】克隆得到了家蚕Arylphorin的全长cDNA（命名为BmAryl）,在GenBank登录号为JN581664。该基因的cDNA全长为2 260 bp,包含1个26 bp 5′非翻译区和1个143 bp的3′非翻译区,3′非翻译区包含有终止密码子、多聚腺嘌呤信号AATAAA和poly(A)尾。其最大开放阅读框（ORF）为2 091 bp,编码的蛋白由696个氨基酸组成,预测蛋白分子量为82.8 kD,等电点为6.07。多序列比对和系统进化分析发现,家蚕BmAryl蛋白与家蚕的性别专一贮藏蛋白2相似性最高,为66%。BmAryl主要在家蚕的脂肪体和血淋巴中表达,精巢和卵巢中的表达量无明显差别;而在家蚕感染BmCPV后该基因在中肠的表达量明显下调。【结论】成功克隆获得BmAryl的全长cDNA,其编码的蛋白质属于芳香蛋白家族, BmAryl主要在家蚕的脂肪体和血淋巴中表达,不存在性别专一性,且家蚕感染BmCPV后BmAryl在中肠的表达明显下调。     

高抗根结线虫病海洋链霉菌的初步筛选

由根结线虫(Meloidogynespp.)引起的植物根结线虫病在全球范围内普遍发生,严重威胁蔬菜、烟草、花生等各种农作物的生长[1,2]。根结线虫在无寄主植物存在的条件下,仍可存活3年之久。当气温达到10℃以上时,孵化出的二龄幼虫伺机从根毛或根部皮层侵入植物根部,从而危害植物的生长,并能刺激寄主细胞加速分裂,使受害部位形成根瘤或根结[3]。至今已发现了90余个杀线虫菌物毒素,包括来自子囊菌、担子菌、半知菌、接合菌及其生物活性代谢产物[4]。海洋具有丰富的微生物资源,因此,从海洋中筛选高抗根结线虫病的海洋链霉菌,从其发酵液中提取大量具有…     

家蚕类胰岛素相关肽结合蛋白2（BmIBP2） 的原核表达与组织特异性分析

[目的]从体外表达家蚕中新发现的1个免疫球蛋白超家族成员一类胰岛素相关肽结合蛋白2(BmIBP2),并制备其多克隆抗体,为进一步深入研究BmIBP2的生物学功能奠定基础.[方法]以家蚕中肠的总cDNA为模板,利用普通PCR方法,扩增出BmIBP2基因的成熟肽序列;通过构建重组表达质粒pET-28a-BmIBP2对BmIBP2的成熟肽进行重组表达;制备多克隆抗体,通过免疫共沉淀的方法研究BmIBP2蛋白的组织特异性.[结果] SDS-PAGE电泳分析表达产物发现,重组蛋白rBmIBP2主要以包涵体的形式表达,目的蛋白大小约为30 kD;以免抗His-tag抗体为一抗进行Western blot检测,结果表明rBmIBP2具有良好的免疫反应性;用镍离子亲和层析的方法可获得纯化的rBmIBP2,以纯化的rBmIBP2为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,Western blot结果显示家蚕的中肠组织匀浆液中有1条约28 kD大小的条带,大小与BmIBP2成熟肽的蛋白分子量基本一致,而脂肪体、血淋巴、丝腺、精巢及卵巢的组织匀浆液中没有检测到特异反应条带.[结论]成功地实现了BmIBP2在大肠杆菌中的表达和纯化,并获得其多克隆抗体,Western blot结果证明BmIBP2被正确表达,并明确了该蛋白只在家蚕中肠表达的组织特异性.     

不同溶剂萃取桑叶叶绿素效率的初步研究

以新鲜桑叶为材料，采用有机溶剂萃取法和分光光度法对桑叶叶绿素进行萃取与含量测定，通过比较不同溶剂及其浓度（体积）、不同萃取时间对萃取效率的影响，初步获得了桑叶叶绿素的萃取工艺。研究发现，叶绿素易溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂，而在乙酸乙酯中的溶解度则较低；且丙酮与无水乙醇的混合使用可明显提高叶绿素的萃取效率。此外，通过萃取工艺优化试验发现，当以5片桑叶圆片为材料（d=0.6 cm），以6 mL丙酮比无水乙醇为1:2的混合溶液为萃取溶剂，暗室萃取24 h后，叶绿素的萃取效率最高，叶绿素a的含量可达2.22 mg/g、叶绿素b为0.82 mg/g，叶绿素a/b的值为2.71。本研究结果不仅为桑叶叶绿素的萃取及含量测定提供了方法性参考，而且有益于桑叶叶绿素萃取工艺的进一步优化。     

长江镇江段浮游植物群落特点的研究

[目的]了解长江镇江段浮游植物的群落结构特点及变化规律。[方法]2010年4～5月对长江镇江段水域进行8次随机采样,利用生物学方法对该水域中的浮游植物进行分类鉴定,分析其种群组成与群落特点,并初步探讨浮游植物细胞密度与环境因子之间的关系。[结果]从长江镇江段水域中共检出浮游植物6门42属,其中以绿藻门（35.71%）、硅藻门（30.95%）和蓝藻门（23.81%）为主,其他种类较少;各种属浮游植物在长江镇江段各个站点的分布及频次极不均匀,以绿藻门、硅藻门和蓝藻门出现的属数与频次占主体;在采样时间内,浮游植物细胞密度在1.56×104～1.15×105个/L变动,平均密度为5.69×104个/L,且浮游植物细胞密度与pH值的变化趋势基本一致。[结论]试验结果不仅为研究长江流域浮游植物的群落特点与环境因子之间的关系提供有益参考,还将为富营养化的防除与生态平衡的恢复提供科学依据。     

微波辅助萃取蚕沙叶绿素的工艺研究

以蚕沙为原料,丙酮比乙醇为2 1的混合溶液为萃取剂,采用微波辅助法萃取蚕沙叶绿素,通过单因素试验和正交试验设计考察微波压力、微波时间、微波功率等主要工艺参数对萃取效率的影响,并优化萃取工艺。结果表明,其最优工艺条件为:微波压力为0.4 MPa,微波时间为50 s,微波功率为300 W。在此最优工艺条件下,蚕沙叶绿素a的浓度可达到14.325 mg.L-1。     

索氏法提取微藻油脂的工艺优化研究

[目的]优化影响索氏法提取微藻油脂的工艺参数,为进一步研究打下基础。[方法]以聚球藻为材料,采用索氏法提取微藻油脂,研究液料比、提取时间、提取温度对提取率的影响,获得较优工艺参数。[结果]当液料比为6 ml/109cell,提取时间为4 h,提取温度为95℃时,所得油脂含量为0.125 mg/108cell。[结论]该研究结果为进一步优化微藻油脂提取工艺奠定了基础。