环磷酰胺对肉仔鸡免疫机能的影响

280只肉仔鸡随机分成4组,第1组为对照组,第2～4组为处理组。从12日龄开始,对照组每天腹腔注射0.5mL生理盐水,连续注射3d;第2～4组分别按40,80,120mg·kg-1剂量,同部位注射用生理盐水稀释的环磷酰胺(CY)0.5mL。在21,35,42,56日龄时每组随机抽取10只鸡进行屠宰取样,测定各组鸡的器官指数;另取3只鸡,测定脾脏淋巴细胞增殖转化。结果表明:一定剂量的环磷酰胺能显著抑制肉仔鸡早期的体重增加,且效果与注射剂量呈正相关,降低肉仔鸡早期脾脏指数和法氏囊指数;显著抑制由刀豆蛋白(ConA)诱导的脾脏淋巴细胞增殖转化。     

新鱼腥草素钠纳米乳佐剂对肉仔鸡免疫功能的影响

以新鱼腥草素钠纳米乳为免疫佐剂,将其混入传染性支气管炎灭活疫苗,探讨其对肉仔鸡免疫功能的影响。选150只1日龄黄羽肉鸡,随机分成3组,第1组用新鱼腥草素钠纳米乳佐剂疫苗,铝胶佐剂疫苗为阳性对照组作为第2组,第3组为空白对照组(PBS)。免疫后21d(35日龄)采用IBV M41株病毒液进行点眼、滴鼻攻毒。通过测定每组鸡淋巴细胞(PBMC)增殖情况、鸡血清抗体效价、IBV强毒株攻毒保护及组织病理学变化。结果表明:新鱼腥草素钠纳米乳佐剂组PBMC增殖指数、鸡血清抗体效价水平显著提高(P0.05),在IBV M41株攻毒试验中,新鱼腥草素钠纳米乳佐剂组可显著减轻病毒感染肉仔鸡临床症状,肺和肾无明显组织病理学变化,免疫保护率达到96.7%。这表明以新鱼腥草素钠纳米乳佐剂能提高肉仔鸡对传染性支气管炎的免疫力。     

多肽提取物对鸡生长性能和抗球虫感染及调节免疫功能的影响

[目的]为寻找在缓解家禽疾病中能够替代抗生素的中药提取物.[方法]取健康1日龄仔鸡随机分阴性对照组、阳性对照组、盐霉素组、地鳖肽组、蛴螬肽组、联合肽组,除阴性对照组外,所有14 d肉仔鸡攻毒柔嫩艾美耳球虫卵囊5×103/只,测定21 d仔鸡生长性能、脏器指数、免疫功能及抗球虫效果.[结果]各组间21d仔鸡日增重、采食量、料重比无显著差异;鸡感染球虫第7天联合肽组仔鸡肠道损伤和鸡排出卵囊数比阳性对照组显著降低;阳性对照组和联合肽组鸡抗球虫指数(ACI)分别为126.44和159.79;地鳖肽、蛴螬肽和联合肽组21d仔鸡肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊器官指数均极显著升高;联合肽组21d仔鸡肠道绒毛长度显著加长、隐窝深度明显变浅,绒毛高度与隐窝深度比值极显著提高;联合肽组仔鸡血液T和B淋巴细胞转化明显高于阳性对照组.[结论]结果表明,多肽提取物可显著降低卵囊排出呈现一定抗球虫效果,且能够提高受到柔嫩艾美耳球虫感染后仔鸡的调节免疫功能.     

新城疫病毒对不同日龄及抗体水平的肉仔鸡致病性研究

将正常免疫的AA肉仔鸡于10、20及30日龄时,按抗体水平的高低分成2组(H组、L组),接种新城疫病毒建立人工致病模型,对攻毒鸡群的症状、病理变化及抗体水平进行动态观察.结果发现,日龄及抗体水平不同的肉仔鸡均表现非典型新城疫,淋巴组织广泛性坏死是其主要病变,L组比H组病情严重.发病率及病理变化的程度10日龄时攻毒低于20与30日龄攻毒,各感染组鸡的抗体水平均呈先迅速下降后逐渐回升的消长规律,但L组抗体水平始终低于H组.试验结果表明,日龄及抗体水平与抵御新城疫病毒的攻击能力密切相关.     

新城疫病毒对不同日龄及抗体水平的肉仔鸡致病性研究

将正常免疫的AA肉仔鸡于10、20及30日龄时,按抗体水平的高低分成2组(H组、L组),接种新城疫病毒建立人工致病模型,对攻毒鸡群的症状、病理变化及抗体水平进行动态观察.结果发现,日龄及抗体水平不同的肉仔鸡均表现非典型新城疫,淋巴组织广泛性坏死是其主要病变,L组比H组病情严重.发病率及病理变化的程度10日龄时攻毒低于20与30日龄攻毒,各感染组鸡的抗体水平均呈先迅速下降后逐渐回升的消长规律,但L组抗体水平始终低于H组.试验结果表明,日龄及抗体水平与抵御新城疫病毒的攻击能力密切相关.     

马立克氏病毒京-1株对不同日龄SPF鸡的致病力试验

将60羽SPF鸡随机分为3组,选取马立克氏病毒标准毒株京-1株分别对10日龄组和21日龄组鸡进行人工感染试验,对照组注射同等剂量的稀释液。结果显示：两组攻毒组试验鸡均于接种病毒后18d开始发病,并于20～25d出现死亡高峰,26d开始逐渐缓解。两组鸡的死亡率分别为80%和60%,肿瘤发生率分别为80%和65%,肿瘤主要出现在心脏、肝脏、脾脏、肾脏和坐骨神经等组织,其中10日龄攻毒组2～3个器官发生肿瘤的个体占65%,4个及以上器官发生肿瘤的个体仅占5%,21日龄攻毒组2～3个器官发生肿瘤的个体仅占35%,4个及以上器官发生肿瘤的个体达到20%。由此说明,10日龄SPF鸡对京-1株MDV敏感,而21日龄该品系鸡对之敏感性略低。     

鸡传染性贫血病免疫对肝脏微粒体苯胺羟化酶活性的影响

为了观察鸡传染性贫血病(Chicken Infectious Anemia,CIA)免疫对肝脏微粒体苯胺羟化酶活性的影响。20只70日SPF龄白来航蛋鸡随机分为2组,每组10只。免疫组用鸡传染性贫血病弱毒苗免疫4次,每次间隔2周,对照组鸡注射同剂量的生理盐水。最后一次免疫后10 d取肝脏制备微粒体,测定肝微粒体这苯胺羟化酶的活性。结果表明:免疫组鸡苯胺羟化酶的活性为66.034±2.071 nmol/(mg.min),对照组为141.853±19.310 nmol/(mg.min)。与对照组相比,免疫组苯胺羟化酶的活力极显著下降(P﹤0.01)。鸡传染性贫血病免疫可降低肝脏微粒体苯胺羟化酶的活性。     

重组鸡α-干扰素对鸡免疫功能的影响

选取80只10日龄的肉仔鸡,随机分成4组,每组20只.第1组为对照组,第2～4组为试验组,分别肌注0.1倍剂量(1000U)、1倍剂量(1万U)和10倍剂量(10万U)的鸡α-干扰素.试验期间并对其免疫器官指数、淋巴细胞转化率、白介素-2含量、血清补体总活性进行测定.结果表明:1倍剂量(1万U)组鸡的免疫器官指数、淋巴细胞转化率、白介素-2含量、血清补体总活性均高于其他三组.     

一次性腹腔注射Diquat诱导构建肉仔鸡慢性氧化应激模型

通过对肉仔鸡一次性腹腔注射Diquat,研究试验期间肉仔鸡的生长性能、部分血液生化指标和抗氧化指标的变化,建立肉仔鸡慢性氧化应激模型。选取300只20日龄的健康科宝肉仔鸡,随机分为2组,每组15个重复,每重复10只鸡,公母各半。试验期共21d。试验第1天,处理组按照体质量以8mg/kg一次性腹腔注射Diquat,对照组注射相应剂量的无菌生理盐水。所有鸡自由采食和饮水,在试验第1、12、21天,空腹12h,然后前腔静脉采血分离血清,测定血清中的生化指标和抗氧化指标。结果显示,Diquat处理组的平均日增量和平均日采食量显著低于对照组,料体质量比有增高的趋势;血清中ALT、AST、GSH-Px、SOD和COR活性显著高于对照组,MDA浓度显著低于对照组。表明,按照8mg/kg体质量一次性腹腔注射Diquat溶液可以诱导肉仔鸡产生氧化应激,并且应激效应可持续21d,血清中ALT、AST、GSH-Px、COR、SOD和MDA的含量变化可以作为反映氧化应激的敏感指标。     

毒害艾美耳球虫早熟株对鸡免疫效果的评价

[目的]探讨毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)早熟株对鸡的免疫效果,为获得安全有效的鸡球虫疫苗株提供试验参考依据.[方法]取4日龄健康、体质量50～70 g鸡随机分为4组,分别为对照组、盐酸氨丙啉添加组、一免组和二免组,每组50只鸡地面饲养,试验期81 d.对照组、免疫组(免疫组包括一免组和二免组)鸡饲喂基础日粮,盐酸氨丙啉添加组鸡按照药物说明全程基础日粮加盐酸氨丙啉拌服.一免组鸡4日龄一免,剂量1 000个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊;二免组鸡53日龄二免,剂量200个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊.鸡25日龄、53日龄、74日龄时从地面饲养的各组随机抽取6只鸡移到笼上饲养,同时设置红对照组(鸡不免疫不喂药仅攻毒).笼养鸡除对照组外,其他组鸡均攻毒,攻毒方法为逐只鸡经口接种毒害艾美耳球虫亲本株(10X104个孢子化卵囊/只).肉眼观察鸡临床症状,测定鸡平均相对体增质量、小肠病变记分、小肠病变记分减少率、存活率、卵囊减少率与抗球虫指数等指标.[结果]免疫鸡攻毒后,临床观察对照组鸡精神状态良好,未出现任何异常症状;免疫组与红对照组相比精神状态良好、血便减少.不同日龄鸡(25日龄、53日龄和74日龄)攻毒后第7天,盐酸氨丙啉添加组和免疫组鸡相对体增质量均明显低于对照组但极显著高于红对照组且二免组高于一免组.免疫组鸡小肠平均病变记分均低于红对照组,小肠病变记分减少率高于红对照组,其中二免组不同日龄攻毒后鸡小肠平均病变记分均低于一免组,且74日龄鸡攻毒后小肠病变记分减少率最高.红对照组不同日龄鸡卵囊数极显著高于盐酸氨丙啉添加组和免疫组,其中免疫组53日龄鸡和74日龄鸡攻毒后卵囊数均显著高于盐酸氨丙啉添加组,卵囊减少率低于盐酸氨丙啉添加组,且二免组74日 龄鸡攻毒后卵囊减少率高达90％.免疫组不同日龄鸡抗球虫指数极显著高于红对照组,二免组不同日龄鸡抗球虫指数均高于145且高于一免组,即二免组鸡抗球虫效果达到中效水平.[结论]毒害艾美耳球虫早熟株2次免疫对鸡具有良好的保护效果,且对鸡生长发育的影响较小.     

4种蝴蝶雄性生殖系统形态学研究

【目的】明确4种蝴蝶雄性生殖系统的形态学结构。【方法】将新鲜标本剪下腹部,在Motic SMZ168-BL型显微镜下观察解剖,用Q Imaging Retiga 2000R(CCD)显微成像系统照相,采用Montage图像叠加软件进行图像处理。【结果】描述了4种蝴蝶的雄性生殖系统,其中外生殖器的差异主要表现在囊形突、钩突、背兜、阳基轭片等上,而内生殖器的主要差异表现在精巢、复射精管、单射精管及附腺上。【结论】4种蝴蝶雄性生殖系统的各部分结构特征存在较大差异。     

两株白粉寄生孢的生物学特性比较

对L9和L3两个白粉寄生孢菌株的生物学特性研究表明,它们的生长适温为10～30℃,其中最适生长温度分别为25℃和20℃;适宜生长的pH为4～10,其中最适pH均为8.有利于L9菌株菌落生长的碳、氮源分别为可溶性淀粉、乳糖和牛肉膏;有利于L3菌株菌落生长的碳、氮源分别为葡萄糖、乳糖和蛋白胨;改良查氏培养基有利于两者菌落的生长.     

不同杀菌剂对3种马铃薯病害病原菌的毒力测定

采用生长速率法测定3种生物农药和3种化学药剂对马铃薯晚疫病菌、早疫病菌和黑痣病菌的室内毒力。结果表明：100万孢子/g寡雄腐霉WP对晚疫病菌、早疫病菌和黑痣病菌毒力较好,其EC₅₀分别为  0.041 2  μg/mL、0.000 1  μg/mL和0.052 0  μg/mL;0.3%四霉素AS对3种马铃薯病害病原菌的EC₅₀分别为0.009 3  μg/mL、0.208 4  μg/mL和0.265 9  μg/mL;3%中生菌素WG对3种病原菌的毒力较弱,EC₅₀分别为 7.494 1  μg/mL、2.035 6  μg/mL和20.266 6  μg/mL;20%烯肟·戊唑醇SC对3种病原菌的EC₅₀分别为  0.435 9  μg/mL、0.003 9  μg/mL和1.114 0  μg/mL;50%锰锌·氟吗啉WP对3种病原菌的EC₅₀分别为  1.216 2  μg/mL、0.192 5  μg/mL和5.153 5  μg/mL;30%苯甲·嘧菌酯SC对3种病原菌的EC₅₀分别为  11.270 1  μg/mL、0.227 8  μg/mL和6.071 8  μg/mL。综上所述,100万孢子/g寡雄腐霉WP、0.3%四霉素AS和20%烯肟·戊唑醇SC对马铃薯晚疫病、早疫病和黑痣病室内毒力较好。     

新疆南疆部分地区3种璃眼蜱的分子生物学鉴定

旨在对新疆南疆部分地区璃眼蜱属的蜱进行分子生物学鉴定,了解其分布情况。采集新疆南疆部分地区蜱,通过形态学鉴定将璃眼蜱属蜱作为样本,通过12SrDNA和16SrDNA基因扩增、测序及序列分析进行蜱种类鉴定。13个采样点共559只璃眼蜱属蜱,鉴定为3种,分别为小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱。     

青稞转录因子HvnANT1基因的克隆与表达分析

为探究HvnANT1基因在青稞粒色形成过程中的基因表达模式,以紫粒青稞‘涅如姆扎’和白粒青稞‘昆仑10号’为试材,利用简化基因组GBS(Genotyping-by-Sequencing)对青稞紫粒进行基因定位,克隆到HvnANT1基因,对其进行生物信息学分析。结果表明:1)在7H染色体的84.30—86.00 cM获得1个MYB类转录因子,命名为HvnANT1。2)该基因长1 033 bp,其完整开放阅读框为762 bp,编码253个氨基酸。HvnANT1蛋白分子量为27.14 kU,是亲水性的不稳定碱性蛋白且不存在跨膜结构,无信号肽。该蛋白的二级结构主要是由无规卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角组成,具有2个SANT结构域(分别位于第13—第63个;第66—第114个氨基酸)。3)同源比对与系统进化分析表明:青稞HvnANT1蛋白与大麦、乌拉尔图小麦、高梁、玉米、二型花、小米、水稻、土瓶草、车轴草和杨梅10种植物的ANT1蛋白序列相似性分别为100.00%、88.85%、54.64%、60.95%、60.82%、58.46%、57.61%、37.76%、36.05%和36.33%;这些序列都具有2个高度保守的2个SANT结构域;与大麦的亲缘关系最近,其次是与乌拉尔图小麦,与水稻最远。4)亚细胞定位结果表明,该基因定位在细胞核内。5)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示:与籽粒颜色形成的乳熟早期和乳熟晚期相比,软面团期的HvnANT1基因在‘涅如姆扎’中表达量极显著上调,而在‘昆仑10号’中各时期的表达量较低且差异不显著;且软面团期的‘涅如姆扎’籽粒HvnANT1基因的表达量极显著高于‘昆仑10号’(P<0.01)。花青素合成相关的结构基因HvnCHI、HvnANS和HvnDFR与该基因表达量模式相似。综上,青稞HvnANT1蛋白结构中的SANT结构域在物种进化过程中比较保守;该基因定位在细胞核内,符合转录因子特性;HvnANT1基因表达模式与结构基因HvnCHI、HvnANS和HvnDFR相似,在籽粒颜色形成的软面团期表达量极显著升高。     

瑞香狼毒对菜粉蝶生物活性的研究

采用叶蝶法、夹毒法和点滴法，测定了瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.)提取物对菜粉蝶（Pieris rapae L.)的生物活性。结果表明，这些提取物对菜粉蝶5龄幼虫具有很强的拒食、胃毒、生长抑制作用，但是其触杀作用较差。根乙醇粗提物（简称SCEE）对菜粉蝶5龄幼虫24h的AFC50（拒食中浓度）为381.28μg/mL；胃毒作用的LD50（致死中量）为22．42μg/头；其浓度为500μg/mL时，处理2d后幼虫的体重为49．38mg,7d后的校正死亡率为100％。氯仿萃取物浓度为300μg/mL时，处理24h后，对菜粉蝶5龄幼虫的拒食率分别为93．58％，7d后幼虫的死亡率为82．76％。当瑞香亭、伞形花内酯与狼毒色原酮的浓度为500μg/mL时，处理24h后，它们对菜粉蝶5龄幼虫的拒食率分别为80．45％、83．79％和70．03％，7d后幼虫的死亡率分别为75．87％、79．31％和65．52％。SCEE对菜粉蝶5龄幼虫触杀作用LD50的值为52．48μg/头。     

扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin部分片段克隆及不同体节mRNA转录水平分析

旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行进化分析。同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技术检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异,最终克隆获得749bp的serpin基因片段。进化分析表明,扩展莫尼茨绦虫serpin基因与多方棘球蚴serpin基因有较近的亲缘关系。标准曲线分析显示,serpin和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。同时试验结果显示,serpin基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。由此初步推测,此基因可能在扩展莫尼茨绦虫虫卵发育为六钩蚴的过程中发挥一定作用。     

Cloning and Analysis of the Promoters of Two OsRhoGDIs Genes from Rice

OsRacD, belonging to rice （Oryza sativa L. ssp. japonica） Rho family of the small GTPases, is a pivotal gene involved in rice photoperiod fertility conversion of photoperiod sensitive genic male sterile rice which influences the rice fertility via controlling the pollen tube growth. Using OsRacD as bait, two GDP dissociation inhibitor genes designated as OsRhoGDI1 and OsRhoGDI2 were screened by yeast two-hybrid system. To further study the regulation mechanism of OsRhoGDIs, and also the relationships between OsRhoGDIs and OsRacD, the upstream regulation sequences of OsRhoGDI1 and OsRhoGDI2 were cloned by PCR, and the cis-elements in the promoters were predicted using internet tools in this study. The results showed that there were several kinds of response elements, such as phytohormone response elements, lightregulated elements and adversity induced elements in the promoters of OsRhoGDIs, some of which were similar. Comparing with the promoter of OsRacD, several pollen tube germination related elements were found. On one hand, the expression and regulation mechanism of OsRhoGDIs were complex, they may be regulated by several signaling pathways commonly, and the regulation mechanisms were similar to some extent. On the other hand, it was suggested that the fertility of photoperiod sensitive genic male sterile rice may be controlled by the cooperative expression of OsRhoGDIs and OsRacD.     

孟加拉鲥、美洲鲥和中国鲥形态学比较分析

观察、解剖107尾孟加拉鲥Tenualosa ilisha、美洲鲥Alosa sapidissima和中国鲥Tenualosa reevesii,详细记叙了孟加拉鲥外部形态和内部结构,运用传统形态学方法比较分析了3种鲥鱼的形态差异.三者形态7项可量性状比值的聚类分析结果显示,孟加拉鲥和中国鲥先聚为一类,再和美洲鲥聚为一类,这与它们的分类地位相一致.外观上,孟加拉鲥臀鳍鳍条短,被1层薄鳞覆盖;美洲鲥的纵列鳞数及体长/体高、体长/头长都大于其他2种鲥鱼.可数性状上,第一外鳃弓鳃耙和脊椎骨数目能明显区分3种鲥鱼.孟加拉鲥、中国鲥和美洲鲥的第一外鳃弓鳃耙数分别为181～219+153～224、95～131+170～175和24～31+47～55;脊椎骨数分别为46～48、37～39和55～57.在内部结构上,根据胃的形状、盲囊部的大小、幽门垂的长短和数量、肠道的弯曲数目及相对长度可以准确鉴定这3种鲥鱼.孟加拉鲥肠道最长,中国鲥次之,美洲鲥肠道最短.3种鲥鱼在消化道结构的差异,预示食性已产生分化.     

岚皋魔芋软腐病病原细菌生物多样性研究

【目的】研究岚皋魔芋软腐病病原细菌生物多样性。【方法】采用组织分离法分离纯化魔芋软腐病球茎及叶柄中的致病菌,通过魔芋球茎、胡萝卜及马铃薯块的侵染试验初步确定其致病性,再利用魔芋球茎侵染致病及盆栽致病性试验确认其致病性;经菌落与细胞形态、生理生化特性及16SrRNA序列测定确定病原菌的类型。【结果】从魔芋软腐病球茎及叶柄中共分离获得16株细菌,侵染试验表明,其中CDS1-B1、CDS1-B2、CDS2-B1、CDS2-B2、CZS-B4和CZS-B6共6株细菌可使魔芋球茎表现软腐症状,并导致盆栽魔芋发病;6株细菌的菌落与细胞形态均存在差异;在魔芋、胡萝卜及马铃薯块上的侵染能力不同;16SrRNA序列分析表明,菌株CDS1-B1、CDS1-B2、CDS2-B1及CDS2-B2均与菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)亲缘关系最近,菌株CZS-B4与菊欧文氏菌(Dickeya dadantii)亲缘关系最近,相似度为98.8%,菌株CZS-B6与菊果胶杆菌(Pectobacterium chrysanthemi)的相似度达99.9%。【结论】导致岚皋县魔芋软腐病的致病细菌存在生物多样性,其致病性也存在差异,其中新发现的魔芋软腐病原菌菊果胶杆菌(Pecto-bacterium chrysanthemi)致病性最强,菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)和菊欧文氏菌(Dickeya dadantii)致病性较弱。