松墨天牛幼虫肠道纤维素降解细菌的分离与鉴定

为揭示松墨天牛幼虫肠道木质纤维素降解细菌群落的结构和功能,采用羧甲基纤维素钠为唯一碳源,结合刚果红法筛选肠道纤维素降解细菌,共获得154株肠道纤维素降解细菌,分别隶属于变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门细菌的8个菌属、10个菌种.其中噬纤维细菌科细菌Siphonobacter aquaeclarae表现为最优势纤维素降解菌,占肠道纤维素降解细菌群落的31.8%,其次为沙雷氏菌Serratia marcescens,占20.1%,其它依次为芽孢杆菌(Bacillus),克雷伯氏杆菌(Klebsiella),鞘脂菌(Sphingobium),丛毛单孢菌(Comamonas)和黄色单胞菌(Lysobacter).     

宋河酒曲中产淀粉酶芽孢菌的分离鉴定及产酶特性

为了有效控制宋河酒曲的制曲过程和发酵进程,对宋河酒曲中产淀粉酶芽孢菌进行了分离鉴定并研究筛选菌株的产淀粉酶特性。结果表明:从宋河酒曲中共分离到12株产淀粉酶芽孢菌,均属革兰氏阳性杆状菌,初步鉴定归为1个属5个种,即芽孢杆菌属(Bacillus)、坚硬芽孢杆菌(Bacillus firmus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),其中,坚硬芽孢杆菌是宋河大曲产淀粉酶芽孢菌的数量优势菌群,获得1株地衣芽孢杆菌SQ2为中温型高产淀粉酶菌株,其液态发酵产酶特性为37℃培养,前24h产酶较弱,此后,酶活力迅速上升,72h达到最大值为89μg/(mL.min),产酶旺盛期发生在菌体成熟期和衰亡初期,产酶过程pH值先稍偏酸性后接近中性。     

复合益生菌芽孢杆菌发酵培养基及条件的优化

为了获取活菌数高、抗性强、经济效益好的益生菌制剂,对复合益生菌芽孢杆菌制剂的培养基配方及各项发酵工艺参数进行了优化。选取枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌进行联合培养,并采用单因子试验和正交试验对其发酵培养基成分进行了优化,在此基础上对其发酵条件做了进一步优化。优化后最佳培养基成分为:废糖蜜初始pH值7.5,转速160 r/min,接种量8%,装液量40%。经优化后活菌数得到显著提高,达到6.62×1010CFU/mL。     

产几丁质酶枯草芽孢杆菌对立枯丝核菌的抑制作用研究

研究产几丁质酶枯草芽孢杆菌对立枯丝核菌的拮抗作用,采用对峙培养法、显微观察法和盆栽试验法考察产几丁质酶枯草芽孢杆菌对立枯丝核菌的拮抗作用,利用液体深层发酵法发酵枯草芽孢杆菌,用发酵液对立枯丝核菌进行拮抗试验,结果表明:枯草芽孢杆菌深层发酵产物可抑制立枯丝核菌菌丝的生长及菌核萌发,其中发酵液对菌丝生长抑制率高达88.1%,菌核萌发抑制率为77%,盆栽试验用发酵液原液施用防病效果可达70.0%。     

三种芽孢杆菌在佛手浆中的发酵特性及其在软糖中的应用初探

【目的】筛选适宜佛手浆发酵的芽孢杆菌并开发具有活菌型的益生菌发酵佛手软糖。【方法】将枯草芽孢杆菌(BS168)、地衣芽孢杆菌(BL02)和凝结芽孢杆菌(BC30)3种益生菌分别接种至杀菌后的佛手浆中,研究发酵过程中芽孢杆菌的生长曲线、营养成分和抗氧化能力的变化,分析指标之间的相关性,并探讨芽孢杆菌在软糖制备中的存活率。【结果】3种芽孢杆菌均能在佛手浆中生长,其中以BC30生长最好,发酵48 h活菌数可达8.35 log CFU/g;果糖、葡萄糖、蔗糖含量和pH值在发酵过程中逐渐下降,以BC30组下降较多;3种芽孢杆菌发酵过程中,总酚含量均有所下降,其中BC30对总酚的保留最好,发酵48 h时总酚保留率为91%,且总黄酮含量(105.9 g/kg)最高;此外,BC30还能提高佛手浆的DPPH自由基清除能力,与未发酵佛手浆相比,发酵48 h时DPPH自由基清除能力提升7.5%。相关性分析结果显示,发酵佛手浆清除DPPH自由基能力与凝结芽孢杆菌数量呈极显著正相关,与总酚和总黄酮含量无显著相关性。制备的益生菌发酵佛手软糖中,BC30活菌数达7.5 log CFU/g。【结论】3种芽孢杆菌中,以BC30最适宜进行佛手浆发酵,发酵对抗氧化能力的提升有正向积极贡献,以其为原料开发的软糖活菌数较高。研究为富含活菌的发酵佛手软糖开发奠定了理论基础。     

利用大酱中的枯草芽孢杆菌提高人参中Rg3含量的研究

为探究枯草芽孢杆菌固态发酵人参对人参内稀有皂苷Rg3含量的影响,本实验首先以七叶苷修饰过的LB营养琼脂为选择培养基,从大酱中分离得到的200株枯草芽孢杆菌菌株中筛选出10株产β葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌。然后用p NPG法分别测得10种菌种产β-葡萄糖苷酶的酶活力,选取酶活力最高的58号菌进行培养,并对58号菌的最适产酶条件进行研究,得到58号菌的最佳培养时间为16 h,最适产酶温度36℃,最适产酶p H值6.0,最佳产酶时间8 h。在最适条件下,用58号菌对双螺杆挤压后的人参进行固态发酵,以白参为参照。结果表明在第4d时,白参内Rg3含量最高,为0.6236 mg/g,比发酵前提高了53.75%。在第4d时,双螺杆挤压后的人参内Rg3含量最高,为0.8442 mg/g,比发酵前提高了70.99%。     

凝结芽孢杆菌JSSW-07对异育银鲫生长及免疫功能的影响

为研究在饲料中添加不同含量的凝结芽孢杆菌对异育银鲫幼鱼生长、免疫功能的影响,选取平均体质量为(17.70±0.07)g的健康异育银鲫幼鱼随机分为4组,3组试验组饲料中分别添加质量分数为0.1%、0.3%、0.5%的凝结芽孢杆菌菌粉(含菌量为5.0×108CFU/g),对照组饲料中不添加凝结芽孢杆菌。试验结果表明:(1)在饲料中添加0.3%、0.5%凝结芽孢杆菌能够显著提高鱼体的增质量率(WGR)、特定增长率(SGR)(P0.05),并能够显著降低饵料系数(FCR)(P0.05)。(2)各试验组的白细胞(WBC)、红细胞(RBC)数量和血红蛋白(HGB)浓度均无显著差异(P0.05)。(3)添加0.5%凝结芽孢杆菌能显著提高碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)活性及总蛋白质(TP)含量(P0.05);添加0.3%凝结芽孢杆菌能显著降低碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)活性(P0.05);添加0.1%凝结芽孢杆菌能显著降低碱性磷酸酶(ALP)活性(P0.05);添加凝结芽孢杆菌对葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量无显著影响。(4)添加0.3%、0.5%凝结芽孢杆菌能显著提高肝脏的总抗氧化能力(T-AOC)及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性(P0.05),有效抑制丙二醛(MDA)的生成;添加0.1%凝结芽孢杆菌能显著提高肝脏的过氧化氢酶活性(P0.05),对肝脏的抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性无显著影响(P0.05),不能抑制丙二醛的生成。可见,饲料中添加0.3%凝结芽孢杆菌可较好地促进异育银鲫幼鱼的生长,提高机体免疫力。     

芽孢杆菌抗菌作用研究

将纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌3种菌单菌发酵培养和两两混合发酵培养及三者混合发酵培养24 h和48 h后,提取上清液,即为抗菌粗提液。通过杯碟法检测上清液对猪丹毒、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、产气杆菌、大肠杆菌及巴氏杆菌6种菌的生长是否具有抑制作用及3种菌之间是否有抑制作用,以确定3种菌在发酵过程中是否产生抗菌物质以及哪个时期发酵产生的抗菌物质的抗菌作用更强。结果表明,3种芽孢杆菌的提取液对6种菌的生长都具有一定的抑制作用;发酵24 h的上清液比发酵48 h的上清液的抗菌作用更强;3种芽孢杆菌之间除地衣芽孢杆菌对枯草芽孢杆菌具有抑制作用外,其它的两两之间都没有抑制作用。     

复合菌发酵豆粕生产工艺参数的研究

利用乳酸菌和枯草芽孢杆菌对豆粕进行固态发酵,通过优化豆粕发酵工艺参数,研究发酵条件对豆粕发酵品质的影响,并对不同批次和不同厂家的产品进行分析,为选择发酵豆粕产品提供参考。结果表明,在实验室培养条件下,乳酸菌和枯草芽孢杆菌的最佳接种菌龄分别是24 h和36 h;在1000 L发酵罐培养条件下,乳酸菌和枯草芽孢杆菌的最佳接种菌龄均为18 h。通过单因素和正交试验分析,优化产蛋白酶培养基为:豆粕92.85%、麸皮4.64%、玉米粉2.32%、葡萄糖0.19%,料水比1∶0.6,枯草芽孢杆菌和乳酸菌接种比为2∶3,接种量为4 mL/100 g。通过对发酵产品分析,生物降解是去除抗原蛋白最有效的方法。     

凝结芽孢杆菌的产孢条件及高密度培养工艺

为提高凝结芽孢杆菌发酵产孢率,通过单因素试验、Plackett–Burman设计、爬坡试验、中心复合试验对凝结芽孢杆菌高密度发酵工艺进行优化。结果表明：凝结芽孢杆菌最佳培养基组分为麸皮36.91 g/L、玉米浆干粉13.70 g/L、MnSO4 0.84 g/L,在此条件下凝结芽孢杆菌发酵产芽孢数达到2.848×1010 cfu/mL,相比优化前芽孢数提高了61.72%;在优化的培养基基础上进行500 L发酵试验,培养条件为发酵温度40 ℃、转速150 r/min、通气量2.5 m3/h、接种量5%、pH 7.0、培养时间36 h,发酵液芽孢数达到2.98×1010 cfu/mL,与优化试验结果相近,为进一步优化生产工艺提供了必要的数据支撑。     

不同菌株配伍摇瓶发酵蛋白酶的初探

探索产蛋白酶不同芽孢杆菌产蛋白酶的协同作用以提高发酵产物的蛋白酶活性.采取酪素平板初筛的方法,从分离的芽孢杆菌中筛选出产蛋白酶活性较高的菌株,再通过菌株两两配伍发酵和三者配伍摇瓶发酵培养,采用Foiln-酚法分别检测不同菌株配伍发酵产物的蛋白酶活性.酪素平板初筛结果表明,SH、TCP和B1 3株纳豆芽孢杆菌产蛋白酶活力高,SH和B1配伍发酵培养48 h后,酶活力比单菌株发酵分别提高了37.69%和59.23%.菌株之间的科学配伍在摇瓶发酵中能显著提高蛋白酶的活性.     

一株产几丁质酶芽孢杆菌分离鉴定及产酶活性

从土壤中筛选分离到1株高产几丁质酶菌株GWM1.8072,通过菌落形态特征、生理生化分析及16SrDNA序列测定比对分析,对该菌株进行了鉴定,确定其种属分类地位。结果显示,菌株GWM1.8072与已知侧孢芽孢杆菌形成一个类群,同源性高达99.7%,故将其鉴定为侧孢芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）。进一步通过对该菌发酵周期代谢产物的初步检测分析,几丁质酶活最高达到4.52 U/mL,结果显示该菌具有较强的产几丁质酶的活性袁具有一定的生物防治应用前景。     

糖厂滤泥堆肥发酵过程中可培养芽孢杆菌种群动态变化研究

为了揭示糖厂滤泥堆肥发酵生产生物有机肥过程中芽孢杆菌种群变化动态,本研究以糖厂滤泥堆肥发酵加工不同阶段的样品为研究对象,对各样品中的芽孢杆菌进行分离鉴定,研究糖厂滤泥堆肥发酵过程中芽孢杆菌种群数量和结构的变化动态,并分析其与本土芽孢杆菌的关系。结果表明,糖厂滤泥堆肥发酵加工过程中芽孢杆菌种类比较丰富,从糖厂滤泥堆肥发酵加工6个阶段样品中分离到64株芽孢杆菌,分属于7个属27种,其中芽孢杆菌属占绝对优势,有16种;研究发现有6种芽孢杆菌为我国新纪录种,它们是:大豆发酵芽孢杆菌(Bacillus glycinifermentans FJAT-47935、FJAT-47944、FJAT-47907)、外村尚芽孢杆菌(Bacillus hisashii FJAT-47926)、科研中心哈格瓦氏菌(Bhargavaea cecembensis FJAT-47948)、苯乙酮赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus acetophenoni FJAT-47912、FJAT-47934、FJAT-47919)、巴伐利亚鸟氨酸芽孢杆菌(Ornithinibacillus bavariensis FJAT-47915)和拾蛤鸟氨酸芽孢杆菌(Ornithinibacillus scapharcae FJAT-47951)。在糖厂滤泥不同发酵加工阶段,芽孢杆菌种类结构不同,堆肥发酵初期(1 d)以大豆发酵芽孢杆菌(Bacillus glycinifermentans FJAT-47935)为优势种,总含量为114万cfu·g-1,发酵中期(30 d)以蓼蓝大洋芽孢杆菌(Oceanobacillus polygoni FJAT-47932)为优势种,总含量为237万cfu·g-1,发酵后期(60 d)以淤泥大洋芽孢杆菌(Oceanobacillus caeni FJAT-47952)为优势种,总含量为37.6万cfu·g-1,加工成产品后以耐温芽孢杆菌(Bacillus thermotolerans FJAT-47921)为优势种,总量为43万cfu·g-1;可培养芽孢杆菌种类和数量差异显著,数量变化范围在-80%～+100%;种类的变更率在62%～84%。本土芽孢杆菌对糖厂滤泥堆肥发酵的影响较小,其发酵过程中出现的芽孢杆菌主要来源于自带种类,因此,糖厂滤泥堆肥发酵全过程不外加芽孢杆菌接种剂,自带的芽孢杆菌就能发挥作用。综上所述,糖厂滤泥堆肥发酵加工过程中不仅有种类丰富的芽孢杆菌,而且其种群数量和结构差异显著。     

复配芽孢杆菌对撑绿杂交竹枯萎病的生物防治效果研究

目的通过对比单一芽孢杆菌和复配芽孢杆菌对撑绿杂交竹枯萎病的防治效果,为开发防治撑绿杂交竹枯萎病的稳定高效、低成本的复合菌剂提供理论基础。方法本文制备了解淀粉芽孢杆菌B01-2、枯草芽孢杆菌B23-1以及二者的复配菌株的发酵滤液,并采用菌丝生长速率法、孢子萌发法和盆栽试验法,研究了各菌株发酵产物对病原菌尖孢镰刀菌菌丝生长、孢子萌发以及对杂交竹抗性生理指标的影响。结果复配芽孢杆菌处理对病原菌抑制效果显著高于单一菌株。复配芽孢杆菌菌落直径和孢子萌发率分别为1.9 cm和8.8%;单一菌株B01-2和B23-1的菌落直径与孢子萌发率分别为3.4 cm、4.1 cm和17.8%、31.0%;盆栽防效试验中,芽孢杆菌处理组的枯萎病发病率比对照低。复配芽孢杆菌的发病率(50%)较单一菌株B01-2(60%)与B23-1(60%)更低;复配芽孢杆菌对撑绿杂交竹枯萎病的防治效果达到81.5%,高于单一菌株B01-2(70.4%)与B23-1(63.0%)。杂交竹叶片生理指标测定表明,3种处理的发酵液都能诱导激发杂交竹体内的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)防御酶的活性,降低杂交竹叶片叶绿素的分解和减少丙二醛(MDA)的生成,触发植物的系统抗病性,增强植株免疫能力。此外,复配菌株较单一菌株对杂交竹叶片的生理指标的影响更明显。结论复配芽孢杆菌具有强大的拮抗活性,在室内盆栽苗条件下能够有效防治撑绿杂交竹枯萎病,具有潜在的应用开发前景。      

草本纤维提取用菌株的PCR-16S rDNA及ITS-RFLP分析

通过分析从沤麻水中分离到的8株草本纤维提取用菌株的16S rDNA以及ITS序列,鉴定并构建其聚类图,明确草本纤维提取用菌株的遗传关系.通过BLAST比对16S rDNA并用限制性内切酶酶切16～23S的ITS保守序列,对参试菌株的16S rDNA及ITS酶切片段进行聚类分析.结果表明,8株菌株分别属于地表芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及多粘类芽孢杆菌:基于16S rDNA序列与ITS-RFLP所获得的聚类结果基本一致,菌株1251与菌株1172-1聚为一类,其余聚为一类,但种内聚类存在一定的差异,可能与不同类型的序列进化程度有关,8株菌株的16SrDNA序列的相似性为78.66%;Alu Ⅰ、Hinf Ⅰ、Sau3A Ⅰ、Taq Ⅰ 4种限制性内切酶对参试的8株草本纤维提取用产芽孢菌株的ITS进行酶切,各获得0～4条100～440bp的酶切产物.     

球孢白僵菌对松墨天牛成虫生活习性的影响

松墨天牛成虫经白僵菌处理,结果表明,第10天时,各处理的松墨天牛成虫平均日进食减少率为16.2%、16.7%、16.4%、16.7%、16.7%和5.6%;各对照组的松墨天牛成虫平均日进食减少率为-5.1%、-6.5%、0.6%、3.7%、4.8%和8.1%。对照组无论是雌虫还是雄虫平均寿命超出了染菌组的2~4倍。球孢白僵菌对松墨天牛雌成虫产卵情况没有显著影响。     

食用菌菌渣基质化利用发酵菌株的筛选鉴定及其混合发酵的效果

为食用菌菌渣在农业生产上的应用提供技术支撑,从玫瑰腐枝中筛选出4株分解纤维素能力较强的菌株,利用产酶试验和滤纸崩解试验确定4株菌的解纤维素能力;通过测定混合菌株CMCase相对活性,确定最优发酵菌株组合,并对发酵产物理化性质进行检测。结果表明:4株菌单独培养时,DCF-1的CMCase活性最高,达2.58U,其次是DCB-2,为2.29U;DCB-2滤纸条崩解能力最强。将4株菌不同混合培养48h,DCF-1+DCF-2+DCB-2混合菌群CMCase降解纤维素的能力最大,达3.08cm/d。与未发酵菌渣相比,用此混合菌群发酵腐熟完全的菌渣,pH呈中性,容重为0.25g/cm~3,持水孔隙和吸水力增加明显;全氮、全磷、全钾增幅明显,其增幅分别为2.43%、0.68%和1.55%。结合形态特征及分子特征鉴定,DCB-1、DCB-2、DCF-1和DCF-2分别为西姆芽孢杆菌(Bacillus siamensis)、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)、枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)和青霉菌(Penicilliumsp.)。其中,贝莱斯芽孢杆菌+枝状枝孢菌+青霉菌为最优发酵菌株组合,所发酵产物符合作物栽培基质要求。     

寒地水稻病害生防菌株L1的鉴定及抑菌机理研究

本研究从寒地水稻根际筛选并鉴定了1株生防细菌,初步命名为芽孢杆菌L1,芽孢杆菌L1发酵培养5 d时发酵液中具有抑菌活性的次生代谢产物对水稻稻瘟病菌及纹枯病菌菌丝生长抑制率都达到最高,分别达74.57%和83.23%,随时间延长抑菌效果不再增加;芽孢杆菌L1的发酵液用硫酸铵梯度沉淀法提取粗蛋白,7个梯度下的粗蛋白对两种菌菌丝均具有抑菌作用,但对稻瘟病菌起主要抑菌作用的蛋白在硫酸铵饱和度50%～60%下沉淀,而对水稻纹枯病菌则在60%～70%,说明芽孢杆菌L1分泌对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌起主要抑菌活性的蛋白可能不是同一类。     

复合微生物固态发酵菜籽饼粕对抗营养因子去除条件的研究

以菜籽饼粕为原料,采用固态发酵法研究了单菌和混合菌发酵对菜籽饼中抗营养因子降解率的影响。通过单因素试验筛选了菜籽饼发酵去除抗营养因子的菌种及复合微生物固态发酵菜籽饼去除抗营养因子的条件。结果表明,纳豆杆菌、侧胞杆菌、凝结芽孢杆菌、枯草杆菌去除抗营养因子的效果比较明显。最佳条件如下:发酵时间为5 d,发酵温度为35℃,接种量为6%,发酵pH为6.5。在此条件下,植酸、纤维素、单宁的降解率最高分别达到93.74%、36.59%和14.75%。     

混菌固态发酵对紫苏饼粕营养特性的影响

利用纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)与马克思克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)对紫苏(Perilla frutescens)饼粕进行混菌的固态发酵,对其发酵后的产品进行理化分析。结果表明,在接种量为5%,混菌发酵温度为33℃的条件下,发酵2 d,发酵后紫苏饼粕中粗蛋白升高3.79个百分点,纤维素降低2.80%,总黄酮升高15.53%。