PCR在诊断鸡传染性喉气管炎中的应用

鸡传染性喉气管炎是危害养鸡业健康发展的一种疾病。临床症状较多，给现场确诊带来较大困难。本研究将PCR技术成功应用于鸡传染性喉气管炎病的临床诊断．为鸡传染性喉气管炎病的快速诊断提供新思路。     

鸡肿瘤病快速鉴别诊断技术的建立

根据病毒基因组特征,以聚合酶链反应（PCR）为基础,建立一种能快速鉴别马立克氏病（MD）、禽白血病（AL）和网状内皮增生症（RE）3种常见鸡肿瘤病的诊断技术。研究确定以MDV的132－bpr及ALV和REV的LTRs作为PCR扩增的特异性基因片段,改进样品DNA的提取程序,优化PCR及三重PCR的反应条件及参数,并对该诊断技术的特异性、敏感性进行研究,结果表明：建立的诊断技术具有特异、敏感、快速、经济的优点,为开发鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒奠定了基础。     

鸡痘病毒和葡萄球菌混合感染的病原分离与鉴定

通过对四川雅安市某肉鸡场疑似鸡痘病毒与细菌病混合感染的病鸡材料进行病毒和细菌的分离,获得一株病毒和一株细菌。分离的病毒毒株通过半套式PCR鉴定为鸡痘病毒,细菌菌株通过革兰氏染色和生化试验鉴定为葡萄球菌。药物敏感性试验筛选出此葡萄球菌的敏感药物为丁胺卡那霉素。结合此病爆发的临床症状和流行病学特征,诊断为鸡痘病毒与葡萄球菌的混合感染。     

一例鸡传染性支气管炎的诊断与防治

对重庆某蛋鸡场的部分发病鸡进行临床诊断和病死鸡的剖检,初步诊断为鸡传染性支气管炎病,并进一步进行实验室RT-PCR诊断。结果表明,剖检病死鸡气管有黏液、肾肿大、卵泡充血、出血;RT-PCR电泳图片结果显示,在740 bp处清晰可见目的条带,表明有鸡传染性支气管炎病毒的感染。     

鸡3种主要DNA病毒多重感染复合PCR检测方法的建立

依据Gen Bank中注册的鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡痘病毒(FPV)基因组核苷酸序列中的保守序列设计引物,3种病毒各设计3对引物,共计9对引物,经生物学软件筛选后,得到3对相互匹配较佳的引物。3对匹配引物经单一PCR验证后,优化复合PCR反应条件,确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶浓度;经特异性、敏感性试验及简化PCR试验,建立简易复合PCR检测方法。复合PCR扩增出的3条带大小与预期一致,即228 bp(MDV)、400 bp(ILTV)、499 bp(FPV);建立的复合PCR方法能同时检测出100 fg MDV、ILTV、FPV的DNA。同时依据PCR技术原理,将经典的三温热循环改进为二温热循环试验,即将退火和延伸合并为一步(62℃),缩短了反应时间。建立的3种病毒的复合PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于临床病料的快速诊断。     

鸡马立克氏病诊断与防治

鸡马立克氏病是一种传染性肿瘤病,给养鸡业带来一定损失。在临床上,与鸡传染性法氏囊病、白血病、网状内皮组织增殖病及脑脊髓炎有相似处,该文主要叙述了鸡马立克氏病的诊断方法与防治措施以及与上述4种疾病的类症鉴别,为临床上鸡马立克氏病的防治与诊断奠定基础。     

福建省蛋鸡血管瘤型J亚群白血病的分子生物学诊断

针对福建省某鸡场的蛋鸡群发生产蛋下降和部分死亡,病鸡脚趾明显呈现血管瘤特征,运用实时荧光定量PCR方法对病鸡组织和血液样品进行检测,检出了J亚群白血病病毒(ALV-J);通过基因序列的比较分析,发现其氨基酸序列与国外及国内其他省份报导的ALV-J有很高的同源性,从病原分子生物学诊断角度证实福建省蛋鸡群中ALV-J的存在。     

冬春季节常见鸡病的诊断与治疗探讨

冬春季节鸡病对养鸡业有较大危害,季节气候变化大,变化频繁,严重影响鸡生长及发育,引起患病。鸡病较易传染,直接造成养殖户经济损失,故应做好有效诊断与治疗。此文主要对集中冬春季节常见鸡病诊断与治疗进行探讨。     

湖北蛋鸡群血管瘤型ALV-J血清学检测和PCR诊断

用ELISA和ALV-J特异性PCR对抽检的湖北省某蛋鸡场的4只鸡冠苍白、毛囊和鸡爪出血、脚趾间和剑状软骨处长有肿瘤的海兰褐病鸡,进行J亚群禽白血病血清学检测和ALV-J前病毒核酸检测。结果4只病鸡ALV-J特异性PCR检测和泄殖腔拭子ALV-J ELISA抗原检测全部为阳性;间接ELISA检测血清抗体,有3只鸡呈阴性,1只鸡为阳性。血清学检测和PCR检测表明,抽检病例为血管瘤型J亚群禽白血病,并且鸡群中既存在先天感染或早期感染情况,也存在后天感染的现象。     

1例蛋鸡腺病毒感染的诊断及对SPF鸡的致病性

2018年11月,山东省某蛋鸡场80日龄左右鸡群出现采食下降、精神沉郁、消瘦等症状,日死亡率达1%,临床剖检病变主要为心包积液、肝脏有出血点、肾脏肿大等。为明确患病蛋鸡死亡原因及确定病原,无菌采取病死鸡肝脏、肾脏等,并展开病毒分离、PCR检测等实验室诊断,结果表明,病料接种鸡胚,胚体有明显出血症状,肝脏有出血点,PCR扩增产物测序结果与已发表的血清4型禽腺病毒Hexom基因同源性为99%。上述结果表明,该分离株为血清4型禽腺病毒。将分离到的腺病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒试验研究其致病性,每日观察鸡的精神状态,记录死亡情况,发现胸肌接种0.3 mL/羽的病毒剂量对SPF鸡的致死率高达100%,死亡时间在72～144 h;对死亡鸡剖检均可见明显的心包积液,肝脏出血坏死;组织病理学观察发现肝细胞核内形成嗜碱性包涵体。     

鸡肠炎、下痢疾病的鉴别与诊断

在疾病诊治实践中，经常会遇到表现肠炎、腹泻症状的鸡病。常见的有：鸡新城疫、鸡传染性法氏囊炎、禽轮状病毒感染、鸡霍乱（巴氏杆菌病）、鸡结核病、大肠杆菌病、坏死性肠炎、鸡组织滴虫病、鸡球虫病、鸡白细胞原虫病、鸡白痢、鸡伤寒、鸡溃疡性肠炎、鸡链球菌病、绿脓杆菌病。这些鸡病大都表现有肠炎、腹泻的症状，容易造成误诊，本人对这几种疾病进行了大体的概括和总结，仅供临床防治和鉴别诊断参考。     

1例雏鸭坦布苏病毒病的诊断

[目的]分析雏鸭发病原因,为临床上诊断雏鸭坦布苏病毒病提供依据。[方法]通过对发病雏鸭进行疫情调查,将采集的病料进行病毒分离,对采集的病料和分离的鸡胚尿囊液进行RT—PCR鉴定。[结果]对病料和鸡胚尿囊液进行鸭坦布苏病毒RT-PCR检测结果均呈阳性。[结论]分离的病毒是鸭坦布苏病毒,此次雏鸭发病的原因是鸭坦布苏病毒感染。     

小经验四则

<正> 鸡瘟的早期诊断 看:健康鸡的肛门和人的手指甲颜色一样;病鸡的则有红、暗红或紫色的斑点。而且颜色越深、病越重。 摸:从大腿往下摸,鸡的爪端发凉则为发病。 提:把鸡倒提起,口流粘液者为病鸡。 拍:拍拍翅膀,病鸡则发生。“咯咯”叫声。     

AIV、NDV和安卡拉病毒多重PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立鉴别禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)和安卡拉病毒(FAV-4)的多重PCR检测方法。【方法】根据GenBank已登录的AIV的M基因、NDV的F基因和FAV-4的Hexon基因序列,设计合成了3对特异性引物。提取3种病毒DNA/RNA,通过优化多重PCR反应中的引物浓度和退火温度,建立快速鉴别3种病毒的多重PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检验。应用建立的多重PCR方法对67份临床病料进行检测,并将其结果与已建立的单重PCR检测结果进行比较。【结果】成功建立了能快速鉴别3种病毒的多重PCR方法,该方法特异性良好,对传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡痘病毒(FPV)、鸡马立克病病毒(MDV)的扩增结果均为阴性;敏感性较强,能检测出的NDV、FAV-4和AIV最低核酸质量浓度分别为24.3,30.4和28.0pg/μL。多重PCR方法临床病料的检测结果与单重PCR检测结果一致。【结论】建立的AIV、NDV和FAV-4多重PCR检测方法方法可以用于临床上3种病原的鉴别诊断。     

鸡马立克氏病的诊断

2018年10月,广西壮族自治区灵山县某肉鸡场80日龄左右的肉鸡出现疑似马立克氏病,患病鸡消瘦、精神沉郁,剖检病理为肝脏、心脏显著肿大,并有大小不等的灰白色结节,胃肿大,PCR检测为马立克氏病阳性。根据临床症状、病理解剖、PCR检测结果,确诊该场发生的疾病是马立克氏病。本文进一步提出了防控措施,分析了病因,即该批鸡感染马立克氏病,是由于该批次的鸡苗马立克氏病疫苗接种不当(包括疫苗失效)造成的。     

鸡病快速确诊方法

鸡病种类繁多,症状复杂,在临床上常有许多相似表现。加之一些合并症又有较复杂的病理变化要想把每一种疾病诊断分明真非易事。为了及时对病鸡进行救治,必须运用正确的诊断方法和技巧对疾病做出诊断。一、诊断方法     

鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

[目的]为研究传染性支气管炎(IBV)的流行变异及其防治奠定基础。[方法]从辉县某大型养鸡场疑似IBV的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离和鉴定,并对分离病毒的M基因进行RT!PCR扩增。[结果]从鸡病料中分离到1株IBV,命名为IBV!HN05。经浓度1%胰酶、卵磷脂酶C和10%乙醚处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡、绵羊、人、小鼠和兔的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性。该分离株IBV-HN05和标准毒株IBVM41对NDVLaSota都有抑制作用。该病毒对9日龄鸡胚的致病变率达100%。通过鸡胚矮小试验和动物回归试验,发现该分离株能引起鸡胚和病鸡典型的临床症状和病理变化。PCR扩增结果进一步证实了该分离株为IBV病毒。[结论]该研究为SARS病毒的研究提供了动物模型。     

病鸡剖检检查操作技术浅论

随着养禽业的发展,禽病的发生率越来越高,病鸡尸体剖检是诊断禽病,指导治疗的非常重要的手段,通过对鸡尸体病变的诊查、识别与判断,对单发病或群发性鸡病进行确定,为疾病防治提供依据.病鸡的剖检方法包括:了解鸡(死鸡)的一般状况,外部检查和内部检查。     

肉仔鸡J亚群白血病继发感染大肠杆菌病的诊断

随着养禽业高度集约化迅速发展,鸡J亚群白血病已成为危害肉仔鸡重要的疾病之一,且因与其他疾病如大肠杆菌病混合感染而使死亡率升高。本论文以吉林省桦甸市某养殖户饲养的肉鸡发病病例为对象,结合鸡群的临床症状,病理变化,病原菌的分离,通过涂片染色镜检、细菌分离、PCR等方法检测鸡ALV-J特异性抗原gp85基因等实验室诊断。结果为MAC上菌落为圆形、砖红色,EMB上为紫黑色、圆形、有光泽的菌落,镜检为G-杆菌,符合大肠杆菌特性;PCR检测可扩增出约1 000 bp的阳性条带,与预期大小相符,符合J亚群白血病特性。该病例为鸡J亚群白血病继发大肠杆菌感染。     

一起鸡马立克氏病的诊断

摘票:2018年10月,广西灵山县某肉鸡场80日龄左右的肉鸡出现疑似马立克氏病,患病鸡消瘦,精神沉郁,剖检病理为肝脏、心脏显著肿大,并有大小不等的灰白色结节,胃肿大,PCR检测为马立克氏病阳性。根据临床症状、病理解剖、PCR检测结果,确诊该场发生的疾病是马立克氏病。