斑马鱼一种母源凝集素基因zfol的原核表达和抗体制备分析

zfol是斑马鱼的一种母源凝集素基因。从斑马鱼胚胎中提取RNA,应用RT-PCR从斑马鱼中得到zfol的基因片段,重组入原核表达载体pEASY-E2中得到重组质粒,并测序鉴定其序列的正确性,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中诱导表达,并纯化蛋白,利用纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备斑马鱼母源凝集素Zfol蛋白的多克隆抗体,利用Western-blot方法检测抗体特异性,得到特异的多克隆抗体,为进一步研究母源凝集素基因zfol的功能奠定了基础。     

哺乳动物早期胚胎发育调控的研究进展

精子和卵子结合形成受精卵后,最初的胚胎分裂周期调控是由储存在卵母细胞内的因素调控的,随着母源因子的降解,合子基因组激活并进行转录,自此,胚胎发育的一系列事件均由合子因素调控,这一过程称为母源-合子转换期,包括母体成分(mRNA和蛋白质)的降解和胚胎基因组激活。在这一过程中,组蛋白修饰、染色质开放程度以及染色质结构变化等表观遗传信息在配子发生和早期胚胎发育过程中经历了广泛的构建、消除以及重建过程。组蛋白和染色质结构的改变以及转录因子的可用性都受细胞周期依赖机制的调控,这对正确控制基因组激活的时间和激活的基因序列至关重要。本文将重点讨论组蛋白修饰在控制基因组转录方面的作用,以及细胞周期在控制细胞核和细胞质事件中所起的作用和转录因子对早期胚胎调控的影响。     

果蝇Cullin 5基因dsRNA设计及RNAi效率检测

Cullin 5作为Cullin蛋白家族的一员对调控细胞内蛋白降解有着重要意义。为便于深入研究果蝇中Cullin 5基因的功能,对Cullin 5基因的5’UTR区域进行ds RNA设计,并通过PCR和体外转录获得相应的ds RNA。利用RNA干扰以及Realtime PCR检测得到该ds RNA的RNAi效率。结果表明设计及合成的Cullin 5基因的ds RNA可显著降低Cullin 5的转录水平(P0.01),与对照组相比较,其m RNA水平下降至27%,表明该ds RNA具有RNA干扰效果。该实验将为今后研究果蝇Cullin 5基因的功能提供一定的技术支持。     

牛和小鼠早期胚胎发育过程中细胞谱系发育调控的比较

高产奶牛繁殖效率低是世界性难题，其中早期胚胎死亡率高是主要原因之一。当前对牛早期胚胎发育的研究有限，而对于小鼠这种模式动物的早期胚胎发育研究已相当深入。因此，本文从胚胎形态、转录因子以及信号通路3方面对牛和小鼠早期胚胎发育过程进行比较，以加深对牛早期胚胎发育的认识。经比较发现，受精后，牛和小鼠早期胚胎在不同时期发生母源因子降解、合子基因组激活、细胞极性建立和不对称分裂，最终使得胚胎形态发生变化，形成具有3个胚层（滋养外胚层、上胚层和原始内胚层）的囊胚。此外，牛和小鼠早期胚胎发育过程中，多个转录因子及信号通路形成复杂网络调控细胞谱系分化。综上所述，在牛和小鼠早期胚胎发育过程中，相似的生物学事件陆续发生，但是细胞谱系分化的调控呈现差异性，提示我们将小鼠早期胚胎作为研究模型的局限性，该领域的研究对提高奶牛繁殖效率以及促进牛遗传改良工作具有重要意义。     

胚胎发育合子型基因激活(ZGA)的调控机制

新受精卵超越早期分裂阶段必需胚胎基因转录 ( ZGA)的重新起动与续后调控 ,在各类动物早期卵裂过程的胚胎基因转录起动精确时间是可变的 ,涉及染色质结构成分、调控元件 (顺 /反式 )、RNA降解、DNA复制、修饰或加工作用、卵子发生因子、合子钟及天然信号等多种因素 ,因此提出哺乳动物胚胎发育期胚胎基因激活表达的调控机制     

胚胎发育合子型基因激活（ZGA）的调控机制

新受精卵超越早期分裂阶段必需胚胎基因转录（ZGA）的重新起动与续后调控，在各类动物早期卵裂过程的胚胎基因转录起动精确时间是可变的，涉及染色质结构成分、调控元件（顺／反式）、RNA降解、DNA复制、修饰或加工作用、卵子发生因子、合子钟及天然信号等多种因素，因此提出哺乳动物胚胎发育期胚胎基因激活表达的调控机制。     

p66Shc基因调控早期胚胎发育阻滞的研究进展

在胚胎早期发育过程中,存在易停留在某个阶段的现象,称之为发育阻滞,如小鼠胚胎的2-细胞阻滞等.从分子结构及功能、调控活性氧水平和作用网络方面,综述了p66Shc基因调控早期胚胎发育阻滞的研究进展,以期对该领域的研究提供借鉴.     

母体免疫对斑马鱼亲鱼和胚胎中补体含量及活性的影响

以灭活的嗜水气单胞菌为疫苗对亲鱼进行免疫后,分别检测了亲鱼自身及其胚胎中重要补体成分的含量以及替代途径补体活性。结果发现,母体免疫后亲鱼及其胚胎中补体成分C3和Bf的含量均显著升高,表明母体免疫能够促进母源性补体的垂直传递。补体活性的测定结果发现,亲鱼免疫后其自身和胚胎中的替代途径补体活性也相应升高,表明由亲鱼传递给子代的母源性补体具有功能活性,有助于提高子代的抗感染能力。此外,还发现随着亲鱼体内补体含量及活性的升高,其胚胎中相应成分的含量与活性也随之升高,而且免疫2周后亲鱼胚胎体内补体含量及其活性的升高最为显著,表明提高亲鱼体内补体成分的含量能够促进母源性补体的垂直传递。由此推测亲鱼免疫是提高子代免疫力的有效措施。     

SCMC调控早期胚胎发育机制的研究进展

在卵母细胞中贮存的大量RNA和蛋白对于后续早期胚胎的发育起着至关重要的作用,尤其是母源效应因子复合体(Subcortical maternal complex),简称(SCMC).对SCMC的研究历程、结构与功能研究方向进行了综述,以期对有关母源效应复合体对于早期胚胎发育调控的研究领域提供借鉴.     

小分子RNA与植物有性生殖(英文)

小分子RNA(smallRNA)是一类长20～30核苷酸(nucleotide,nt)的非编码RNA分子,其主要是通过对目标mRNA直接切割或抑制其翻译而在转录后水平对基因表达起到调控作用。小分子RNA在植物生长发育过程中起调控作用,并处于基因调控网络的核心位置,这在植物孢子体世代得到广泛研究和证实,但关于小分子RNA对植物配子体世代的相关研究较少,有研究指出小RNA在植物花器官发育、配子体形成,以及受精、合子早期发育等过程中均有作用,且各种小分子RNA在植物有性生殖过程中对控制基因完整性、细胞分化和功能等方面亦有作用,但大多数小分子RNA在有性生殖过程中的具体功能尚待明确。该研究主要介绍了植物中的小分子RNA,综述了小分子RNA与植物有性生殖过程相关的最新研究进展,并对其前景进行了展望。     

鸭发育早期下丘脑-垂体生长轴相关基因mRNA的表达特异性分析

【目的】选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验模型,3种不同品种鸭胚胎期和出雏早期下丘脑垂体生长轴相关基因的表达规律及其与体重和肝重的相关性。【方法】采用实时荧光定量PCR方法研究鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄下丘脑生长激素释放激素（growth hormone release hormone,GHRH）与生长抑素（somatostatin,SS）、垂体生长激素（growth hormone,GH）和肝脏生长激素受体（growth hormone receptor,GHR）与胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors,IGFs） mRNA的表达规律。【结果】证实鸭下丘脑GHRH与SS、垂体GH和肝脏GHR与IGF-I在13胚龄已有表达;除了SS在鸭发育早期维持一个低表达状态外,其它的4种基因均呈现极显著的品种和时间特异性;除了GH外,发现鸭早期发育过程中GHRH、GHR和IGF-I mRNA的表达受到品种和日龄的交互作用的极显著影响。与鸡以往的研究相比,禽类胚胎期下丘脑垂体生长轴相关基因mRNA的表达存在着种属差异。本试验发现鸭早期发育过程中,体重和肝重的变化也呈现极显著的品种和时间特异性,且与下丘脑垂体相关基因的表达呈现不同程度的线性相关。【结论】结果提示下丘脑垂体生长轴基因 mRNA的表达可能在鸭早期发育过程中发挥着重要作用,遗传背景的差异可以导致鸭发育早期体重的差异生长和相关基因的差异表达。     

MicroRNA expression in zebrafish embryonic development

MicroRNAs (miRNAs) are small noncoding RNAs, about 21 nucleotides in length, that can regulate gene expression by base-pairing to partially complementary mRNAs. Regulation by miRNAs can play essential roles in embryonic development. We determined the temporal and spatial expression patterns of 115 conserved vertebrate miRNAs in zebrafish embryos by microarrays and by in situ hybridizations, using locked-nucleic acid-modified oligonucleotide probes. Most miRNAs were expressed in a highly tissue-specific manner during segmentation and later stages, but not early in development, which suggests that their role is not in tissue fate establishment but in differentiation or maintenance of tissue identity.     

Differential control of U1 small nuclear RNA expression during mouse development

During normal mouse development the relative amounts of two types of U1 small nuclear RNA's (U1 RNA) change significantly. Fetal tissues have comparable levels of the two major types of mouse U1 RNA's, mU1a and mU1b, whereas most differentiated adult tissues contain only mU1a RNA's. Those adult tissues that also accumulate detectable amounts of embryonic (mU1b) RNA's (for example, testis, spleen, and thymus) contain a significant proportion of stem cells capable of further differentiation. Several strains of mice express minor sequence variants of U1 RNA's that are subject to the same developmental controls as the major types of adult and embryonic U1 RNA. The differential accumulation of embryonic U1 RNA's may influence the pattern of gene expression during early development and differentiation.     

Effect of RNA Interference Hsp72 Gene Expression on Development of Mouse Preimplantation Embryos

The method of RNAi was used to inhibit the expression of induced heat shock protein 70 （Hsp72） in the 4-cell stage mouse embryos and the embryo development competence was analyzed to identify the functions of Hsp72 on embryonic heat resistance. The results indicated that the inhibition rates of siRNA1 for Hsp72 mRNA and Hsp72 protein were 87.1 and 78.5%, respectively. The blastocysts development rates were 41, 86, and 84% for the siRNA1 group, the LipofectamineTM 2 000 exposed group, and the 37℃ group, respectively, and the hatched blastocysts development rates for the above three groups were 35, 72, and 68%, respectively. The data suggest that the siRNAI has a significant inhibiting effect on Hsp72 gene, and Hsp72 gene silence reduces the blastocysts development rate and hatched blastocysts rate after heat shock during the development of mouse preimplantation embryos.     

GTPase RABE1b参与拟南芥胚胎发育的研究

[目的]研究影响拟南芥早期胚胎发育分裂模式的基因。[方法]从拟南芥T-DNA插入的突变体库中分离到2个T-DNA插入突变体,通过表型观察胚胎发育情况。[结果]PCR-WALKING表明T-DNA插入位点分别位于基因At4g20360的5＇非编码区和启动子区,基因编码的GTPase RABE1b蛋白为Rab蛋白家族的成员,将这2个突变体分别命名为Atrabe1 b-1和Atrabe1b-2。透明分析发现此突变体在胚胎发育早期球形胚时期分裂模式出现异常,RT-PCR分析发现此基因在拟南芥中以组成型表达。[结论]基因At4g20360影响拟南芥早期胚胎发育的分裂模式,推测其编码的蛋白GTPaseRABE1b可能对控制拟南芥胚胎发育过程中的细胞分裂起重要作用。     

数字差异显示法在猪早期胚胎基因表达分析上的应用

借助于NIH生物信息中心Unigene里的数字差异显示软件平台,分析了猪植入前后早期胚胎发育9个EST文库的105 227个ESTs,筛选出了104个差异表达ESTs,对已知功能的差异表达基因进行GO分类分析,发现这些差异基因参与了广泛的生物功能和过程。同时,这些差异表达ESTs的聚类分析结果显示,体外和体内发育的囊胚基因表达存在较大的差异。对这些差异表达ESTs表达模式的分析结果显示,猪植入前早期胚胎发育阶段基因呈振荡模式表达,其中线粒体和核糖体相关基因的表达在囊胚中的表达丰度要明显高于其他阶段。表达数字差异显示的结果能为猪早期胚胎发育机理的研究提供线索。     

反义抑制miR-202引起斑马鱼早期胚胎发育异常研究

为了探讨miR-202在鱼类胚胎发育中的功能,采用实时定量反转录PCR技术和整体原位杂交技术检测了miR-202在斑马鱼胚胎发育阶段的表达。结果发现miR-202是母源性分子并在斑马鱼胚胎发育过程中持续表达,尤其在早期胚胎发育阶段表达水平较高。在此基础上,采用基因沉默技术在斑马鱼受精卵中显微注射miR-202的反义锁核苷酸,实时荧光定量反转录PCR技术和整体原位杂交技术结果显示miR-202反义锁核苷酸可以显著下调斑马鱼胚胎中miR-202表达水平,同时发现反义抑制miR-202后胚胎发育停滞在4 hpf时左右。共同注射miR-202前体可以部分挽救反义抑制miR-202后导致的胚胎发育停滞。本研究证明miR-202在斑马鱼胚胎发育过程中起着重要的调控作用,其功能是斑马鱼胚胎早期发育所必需的。为进一步探索miR-202在鱼类胚胎发育过程的功能奠定了基础。