高纯度碱提灰树花发酵菌丝体β-葡聚糖的免疫活性研究

【目的】探讨高纯度碱提灰树花菌株GF-932发酵菌丝体β-葡聚糖的免疫活性,以期为灰树花菌的开发利用提供依据。【方法】以碱提、酶解的方法,从灰树花菌株GF-932发酵菌丝体中提取β-葡聚糖,经过超滤和QSepharose FF凝胶柱层析纯化冻干得高纯度β-葡聚糖,采用分子排阻法测定该β-葡聚糖的相对分子质量和分子质量分布宽度,以HPLC法测定其β-葡聚糖含量;根据人体口服推荐剂量每kg体质量2.5 mg/d,分别设低剂量组(12.5mg/d)、中剂量组(25.0 mg/d)、高剂量组(75.0 mg/d),对SPF小鼠连续经口灌胃纯化的β-葡聚糖30 d,以灌胃灭菌蒸馏水作对照,通过迟发型变态反应、碳粒廓清和抗体生成细胞检测试验,观测灰树花β-葡聚糖对SPF小鼠吞噬细胞的足跖肿胀度、吞噬指数、溶血空斑数及小鼠体质量和脏器指数的影响。【结果】每100 g灰树花菌丝体中可得0.89gβ-葡聚糖纯品,其相对分子质量为136.43 ku,分子质量分布宽度为1.64。经口给予SPF小鼠不同剂量的灰树花β-葡聚糖30 d后,与对照组相比,各组动物体质量均呈增长状态,但差异不显著(P>0.05)。高纯度碱提灰树花β-葡聚糖能提高SPF小鼠吞噬细胞的足跖肿胀度、吞噬指数、抗体生成细胞数和脏器指数,即能增强小鼠吞噬细胞的吞噬功能及细胞、体液和免疫器官的免疫功能。【结论】高纯度碱提灰树花β-葡聚糖能显著提高小鼠的细胞吞噬功能及特异性免疫和非特异性免疫功能。     

β-葡聚糖对黄沙鳖生长性能、 免疫及抗氧化指标的影响

【目的】在绿色生态养殖条件下研究β-葡聚糖（β-glucan）对黄沙鳖（Truogx sinensis）幼鳖生长性能、 非特异性免疫和抗氧化指标的影响。【方法】选用体质量为 200（±10）g 的黄沙鳖幼鳖 180 只,随机分成 3 组, 每组 3 个重复,每个重复 20 只,分别投喂基础饲料（对照）和添加 200、1 000 mg/kg 剂量 β- 葡聚糖的试验饲料。 120 d 后对黄沙鳖幼鳖的增重量、体重与内脏比、内脏与肝脏比进行称量计算,并测定全血中过氧化氢酶,血清 中溶菌酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。【结果】各组的增重量、体重与内脏 比、内脏与肝脏比差异不显著。血清中溶菌酶活性 1 000 mg/kg 剂量组显著高于对照组和 200 mg/kg 剂量组,200 mg/kg 剂量组与对照组之间差异不显著。与对照组相比,碱性磷酸酶试验组显著升高。超氧化物歧化酶活力 200 mg/kg 剂量组显著高于对照组和 1 000 mg/kg 剂量组,1 000 mg/kg 剂量组与对照组差异不显著。而酸性磷酸酶、过 氧化氢酶活力和丙二醛含量组间差异不显著。【结论】饲料中添加适量 β- 葡聚糖有助于提高黄沙鳖幼鳖的非特 异性免疫功能和抗氧化水平而不影响其生长性能。     

β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞的免疫刺激作用

[目的]明确β-1,3-葡聚糖对红螯螯虾血细胞免疫力的影响,为开发β-1,3-葡聚糖作为红螯螯虾饲料免疫增强剂提供理论依据.[方法]向红螯螯虾注射不同剂量(1和5μg/g)的β-1,3-葡聚糖,以注射生理盐水为对照,于注射后的0、6、12、24和48 h采集红螯螯虾的血淋巴,测定血细胞总数(THC)、活性氧(ROS)含量、一氧化氮(NO)含量、非特异性酯酶活力、吞噬活力及血清酚氧化酶(PO)活力.[结果]β-1,3-葡聚糖可刺激红螯螯虾血细胞THC、ROS和NO含量、酯酶和血清PO活力显著提高(P<0.05,下同),注射5μg/g的β-1,3-葡聚糖剂量还可显著提高血细胞的吞噬活力;β-1,3-葡聚糖对各类免疫应答的影响存在一定的剂量和时间效应,THC、ROS含量、NO含量及血清PO活力对β-1,3-葡聚糖的刺激更敏感;ROS含量、酯酶活力和血清PO活力呈先上升后下降的变化趋势,其指标达峰值时,处理时间在24.72~28.20 h范围内.[结论]注射β-1,3-葡聚糖能提高红螯螯虾的循环血细胞数量及其细胞免疫力,表明β-1,3-葡聚糖可开发为红螯螯虾饲料免疫增强添加剂.     

珍菌素对小鼠免疫作用的影响

为了探讨珍菌素的免疫活性,以金针菇为主要原料.复配以灵芝和虫草制成珍菌素灌入小鼠胃中观察其对小鼠免疫器官、体液免疫功能及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响.结果表明:与空白对照相比珍菌素低(125 mg/kg·d),中(250mg/kg·d),高(500 mg/kg·d)剂量处理都能显著提高正常小鼠胸腺指数和脾指数,在外源鸡红细胞刺激下可促进健康小鼠溶血素的大量生成,同时能显著提高健康小鼠的廓清指数K及吞噬系数α值,说明珍菌素能促进机体的免疫功能,发挥积极的免疫调节作用.     

酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对断奶仔猪细胞免疫和体液免疫机能的影响

为了探讨酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对自然条件下饲养的断奶仔猪细胞和体液免疫机能的影响,选择品种一致,体重接近,公母各半,日龄为（28±3）d的长×大二元断奶仔猪160头,随机分成4个处理组,分别连续添加0,50,100和200mg·kg^-1的β-1,3/1,6-葡聚糖,进行试验,试验期为28d。采用MTT法测定外周血淋巴细胞转化率,流式细胞仪（FlowCytometry,FCM）检测外周血主要淋巴细胞亚群,IDEXX-ELISAantibodyTestKit检测猪瘟抗体。结果发现,添加β-1,3/1,6-葡聚糖14d后,试验组外周血T,B淋巴细胞转化率极显著高于对照组（P〈0.01）;但28d无明显差异（P〉0.05）。21d试验组猪瘟疫苗免疫的抗体水平显著提高（P〈0.05）;低剂量（50mg·kg^-1）的β-1,3/1,6-葡聚糖对Th细胞、Tc细胞、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量及CD4^＋/CD8^＋均有提高,但高剂量（100和200mg·kg^-1）的β-1,3/1,6-葡聚糖可以导致CD8^＋T细胞数量显著升高（P〈0.05）,CD4^＋/CD8^＋显著下降（P〈0.05）。结果表明,酵母β-1,3/1,6-葡聚糖可影响猪的细胞和体液免疫功能,对猪瘟疫苗免疫抗体水平有提高,其免疫调节作用受添加剂量和时间的影响。低剂量酵母β-1,3/1,6-葡聚糖能适度提高机体细胞和体液免疫机能,增强机体的抗病力,高剂量可能会影响机体免疫系统的正常状态。     

多糖、寡糖、蛋白酶对凡纳滨对虾生长、消化酶活性及血清非特异性免疫的影响

在基础饲料(对照组)中分别添加0.2%β-葡聚糖、0.05%黄芪多糖、0.4%甘露寡糖、175 mg/kg蛋白酶PT,饲喂初始体重为(4.55±0.08)g的凡纳滨对虾(Litopnnaus vannamei)6周,考察对凡纳滨对虾生长性能、血清非特异性免疫及消化酶活性的影响。结果表明:与对照组相比,饲料中添加0.2%β-葡聚糖、0.4%甘露寡糖及175 mg/kg蛋白酶PT可分别提高凡纳滨对虾增重率16.19%、12.78%、11.25%(P<0.05),降低饲料系数0.10、0.09、0.09(P<0.05);各处理组在肌肉水分、灰分、粗脂肪和粗蛋白含量上无显著差异(P>0.05);在血清非特异性免疫方面,各多糖、寡糖和蛋白酶添加组均显著提高血清酚氧化酶活力(P<0.05),添加0.4%甘露寡糖可提高溶菌酶、碱性磷酸酶活力(P<0.05),添加0.2%β-葡聚糖、0.4%甘露寡糖可显著提高超氧化物歧化酶活力(P<0.05);在消化酶活性方面,添加175 mg/kg蛋白酶PT可显著提高肝胰脏蛋白酶、脂肪酶和肠蛋白酶活性(P<0.05),添加0.2%β-葡聚糖及0.4%甘露寡糖可显著提高胃蛋白酶和肝胰脏脂肪酶活性(P<0.05)。上述结果表明,饲料中添加0.2%β-葡聚糖、0.4%甘露寡糖、175 mg/kg蛋白酶PT可提高凡纳滨对虾生长性能、改善消化酶活性,葡聚糖和甘露寡糖还具有改善血清非特异性免疫的功能,而添加0.05%黄芪多糖对凡纳滨对虾增重率、血清非特异性免疫无显著影响。     

黄芪多糖对草鱼非特异免疫功能的影响

旨在探讨饲料中添加不同水平的黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)非特异性免疫指标的影响。将600尾健康草鱼随机分成Ⅰ-Ⅳ组,在基础饲料中分别添加黄芪多糖0、10.0、30.0、50.0 mg/(kg·d),于D0、D8、D15、D22、D29测定草鱼白细胞的吞噬百分比(PP)、吞噬指数(PI)及血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)与溶菌酶(LSZ)活力等指标,D29时对4组草鱼进行嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒实验。结果表明:与对照组相比,饲料中添加实验剂量的黄芪多糖可不同程度提高供试草鱼血液白细胞的吞噬百分比和吞噬指数,各实验组草鱼血清中T-SOD、CAT、LSZ活性均呈增加趋势,投喂实验剂量的黄芪多糖均可显著降低嗜水气单胞菌攻毒后草鱼的死亡率(P0.05)。研究表明,在饲料中添加适宜水平的黄芪多糖可提高草鱼的非特异性免疫功能和对嗜水气单胞菌感染的抵抗力,每千克鱼体质量的推荐剂量为10~30 mg/d。     

注射嗜水气单胞菌灭活菌的齐口裂腹鱼外周血免疫指标的变化

齐口裂腹鱼Schizothoraxprenanti 是我国重要的冷水鱼类之一,为我国长江上游名贵经济鱼类.该研究在 免疫组和对照组齐口裂腹鱼胸鳍基部分别注射0.2mL体积单位为1.0×108 CFU/mL福尔马林灭活的嗜水气单胞 菌苗(F-AH)和0.65%灭菌生理盐水,在免疫后第1,2,4,7,14,21,28天,测定外周血液血细胞数量及组成比例,血 细胞吞噬活性和血清抗体效价.结果显示注射灭活菌苗后红细胞、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞的数 量逐渐增加,显著高于对照组;血栓细胞的数量逐渐降低,在第4天和第7天显著低于对照.吞噬百分比(PP)和吞 噬指数(PI)迅速上升,第2天达峰值,PP第2,4天显著或极显著高于对照组;PI第2,4和7天极显著高于对照组. 血清抗体效价逐渐升高且在第7天和第14天达到最高值.结果表明单次注射灭活菌苗后齐口裂腹鱼可以产生良好 的免疫应答.     

黄芪多糖饲料添加剂对罗非鱼白细胞吞噬能力和免疫器官指数的影响

选用罗非鱼120尾,随机分为5组。对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂在基础饲料中添加100、500、1 000、1 500mg.kg-1的黄芪多糖试验日粮,投喂40d。每10d检测白细胞的吞噬能力和免疫器官增重情况。结果显示:500mg.kg-1、1 000mg.kg-1和1 500mg.kg-1组均能显著提高罗非鱼血液中白细胞吞噬能力,增加免疫器官的重量(P<0.05);而添加剂量为100mg.kg-1则不明显(P>0.05)。表明黄芪多糖可以不同程度地提高罗非鱼血液中白细胞的吞噬能力,促进免疫器官的发育与成熟。     

大蒜素对鲫非特异免疫指标影响的研究

为评价大蒜素对鲫Carassius auratus非特异性免疫功能的影响,在鲫基础饲料中分别添加250、500mg/kg的大蒜素,并对鲫进行42 d的养殖试验,其中试验的第1~28天饲喂含大蒜素的试验饲料,第29~42天饲喂不含大蒜素的基础饲料。结果表明:与投喂基础饲料的对照组相比,添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清补体C3活力(P0.05),而添加500 mg/kg剂量的大蒜素则能显著抑制鲫血清补体C3、C4活力(P0.05),改投不含大蒜素的基础饲料后,该剂量组C4活性仍显著低于对照组(P0.05);添加250、500 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清、肝胰脏、肾脏和脾脏中溶菌酶(LZM)活力(P0.05),改投不含大蒜素的基础饲料的14 d内,250、500 mg/kg剂量组血清LZM活性及500 mg/kg剂量组肾脏和脾脏LZM活性仍有显著升高(P0.05);添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高肝胰脏和脾脏中一氧化氮(NO)含量(P0.05),添加500 mg/kg大蒜素能显著提高血清和脾脏中NO含量(P0.05),但该剂量显著抑制肝胰脏NO含量(P0.05),250、500 mg/kg剂量组肾脏中NO含量在第42天时均显著高于对照水平(P0.05)。研究表明,鲫基础饲料中大蒜素的适宜添加剂量为250 mg/kg。     

绿原酸对建鲤生长、非特异性免疫功能和抗氧化能力的影响

试验研究绿原酸对建鲤生长、非特异性免疫及抗氧化能力的影响。选择均重为(62.93±5.82)g的建鲤360尾,随机分为5组(A～E组)。分别添加0、100、200、400和800mg/kg的绿原酸,于试验第10、20、30和40天取样,分别测定各组增重率、头肾指数、脾脏指数、白细胞吞噬率、血浆溶菌酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性、总抗氧化能力及丙二醛含量。结果表明:第40天C组的增重率显著高于A组(P<0.05);各时段C组的头肾指数显著高于A组(P<0.05);第10、20和30天D组的脾脏指数显著高于A组(P<0.05);第10天,第20天和第30天C、D组的白细胞吞噬率显著高于A组(P<0.05);各时段D组血浆溶菌酶的活力显著高于A组(P<0.05);除第40天E组与A组的SOD差异不明显外(P>0.05),其余各组各时段的SOD均显著高于A组(P<0.05);第30、40天D组的CAT显著高于A组(P<0.05);第20、30和40天D组的T-AOC显著高于A组(P<0.05);第20、30和40天C、D组的MDA显著低于A组(P<0.05)。综合各指标的变化规律可知:①添加200mg/kg绿原酸能显著促进建鲤的生长;②添加200～400mg/kg绿原酸能显著增强建鲤的非特异性免疫和抗氧化能力;③长时间、高剂量添加绿原酸对建鲤的生长、非特异性免疫和抗氧化能力均有一定的抑制作用。     

齐口裂腹鱼鳃表面结构扫描电镜观察

用扫描电镜观察齐口裂腹鱼鳃表面结构 ,发现齐口裂腹鱼鳃的鳃弓、鳃丝、鳃小片上皮细胞表面均具有隆起的微脊 ;微脊形态特征随在鳃上分布部位不同而不同 ,与其他硬骨鱼比较有较大差异 ;鳃小片上皮细胞表面结构与其呼吸功能密切相关。     

饲料中添加β-葡聚糖对珍珠龙胆石斑鱼生长性能、免疫指标、转录组及肠道菌群的影响

【目的】明确β-葡聚糖诱导珍珠龙胆石斑鱼的免疫响应机制,为β-葡聚糖作为免疫增强剂在水产饲料中的应用提供理论依据。【方法】以珍珠龙胆石斑鱼为研究对象,通过在饲料中添加100 mg/kg β-葡聚糖进行养殖试验,饲 养8周后采样分别进行生长性能、血清生化指标、转录组测序和肠道菌群组成分析。【结果】饲料中添加β-葡聚糖显著...     

Glu细胞与5-HT细胞在两种裂腹鱼肠道的免疫组织化学研究

目的:研究齐口裂腹鱼和重口裂腹鱼肠道Glu和5-HT细胞的形态、位置与分布情况。方法:使用Glu和5-HT抗哺乳动物血清,应用免疫组织化学技术SABC法对齐口裂腹鱼和重口裂腹鱼肠道内分泌细胞进行了研究。结果:Glu细胞在齐口裂腹鱼肠道中以中肠分布最密集,前肠和后肠分布密度较低;重口裂腹鱼肠道中,前肠和中肠分布密度较高,后肠极低。5-HT细胞在齐口裂腹鱼肠道中的分布密度前肠最高,中肠次之,后肠最低;重口裂腹鱼则在前肠和后肠分布密度较高,中肠较低。Glu和5-HT细胞主要呈梭形和锥形。结论:Glu和5-HT细胞的分布和形态特点与两种裂腹鱼食性和肠道结构密切相关。     

酵母β-葡聚糖对早期断奶羔羊瘤胃氮代谢的影响

选用甘肃肉用绵羊新品种选育群初生公羔20只,随机分为5组,观测了饲粮中添加不同剂量（0、37．50、75．00、112．50、150．00mg／kg）酵母β-葡聚糖对早期断奶羔羊瘤胃氮代谢参数的影响,结果表明,添加酵母β-葡聚糖对日龄82d的羔羊瘤胃液中总氮、氨氮和蛋白氮含量均没有显著影响（P〉0.05）,75．00mg／kg的添加剂量组尿素氮含量有高于对照组的趋势（P=0．091）,食前150．00mg／kg添加剂量组血清尿素氮显著低于对照组（P〈．05）。     

纳豆芽孢杆菌NT-6 抗菌脂肽对凡纳滨对虾生长性能及非特异性免疫指标的影响

为了评价纳豆菌抗菌脂肽对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长和非特异免疫能力的影响,在基础组饲料中分别添加0 mg/kg(A0组,对照组)、50 mg/kg (A1组)、100 mg/kg (A2组)、150 mg/kg(A3组)和200 mg/kg (A4组)NT-6抗菌脂肽,分别投喂平均体重为1.12(±0.10)g的凡纳滨对虾8周,测量和计算对虾的生长和形态指标以及对虾血清和肝胰腺中碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)、总抗氧化能力(T-AOC)及血清中过氧化物酶(POD)活力.结果显示,经过8周的喂养,试验组对虾生长速度均比对照组快,其中A2组对虾的生长速度最快,相对增重率可达58.13％;试验组对虾的各形态指标受抗菌脂肽添加量影响显著,对虾的整体外观商品形态有所改善.试验组对虾肌肉中粗蛋白、脂肪的含量与对照组相比差异显著,粗灰分差异不显著.试验组凡纳滨对虾血清中LZM活性均高于对照组,其中A2组最显著;A1组血清中的POD活性高于其他各组;各组血清中的AKP活性差异不显著;试验组凡纳滨对虾血清中T-AOC和T-SOD活性与对照组相比差异显著且A2组最高.A4组凡纳滨肝胰腺中T-AOC 、LZM、AKP、T-SOD活性明显高于对照组.对虾非特异性免疫指标的提高使对虾的成活率得到了一定的提高,其中A2组的成活率最高.结果表明,在饲料中添加一定量的NT-6抗菌脂肽可显著促进凡纳滨对虾的生长和提高对虾机体的非特异性免疫能力,可作为抗生素饲料添加剂的一种替代物.     

鱼类催产激素对齐口裂腹鱼繁殖的影响

分别使用促黄体素释放激素(LHRH-A2)、绒毛膜促性腺激素(HCG)和地欧酮(DOM)3种鱼类催产激素6个组合,对齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti Tchang)亲鱼进行注射催产处理,比较催产率、受精率和孵化率的变化,探讨齐口裂腹鱼对不同催产激素及其组合的适应性和敏感性,从而找出最适合齐口裂腹鱼繁殖的催产激素组合。结果表明,齐口裂腹鱼亲鱼对LHRH-A2、HCG和DOM组合的敏感度最高,催产率和孵化率显著优于单一激素和其他激素组合。     

Bacillus subtilis LC-9产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质与催化特性研究

[目的]系统研究Bacillus subtilis LC-9所产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质,探讨其在催化应用上的可行性。[方法]采用两步阴离子交换层析法对B.subtilis LC-9发酵液中的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行纯化,用SDS-PAGE检测其纯度,研究纯酶的酶学性质及该酶对β-葡聚糖和地衣多糖的降解特性,并采用TLC法检测其水解液中糖的成分。[结果]从自行筛选的糖苷酶产生菌B.subtilis LC-9的发酵液中经两步纯化,得到电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,其比活力达3 502 U/mg,表观分子量为28 kDa;酶的最适反应pH和温度分别为6.5和45℃,且在45℃下稳定;该酶催化地衣多糖的Km值和Vmax分别为4.13 mg/ml和1 238μmol/min/mg,催化大麦β-葡聚糖的Km值和Vmax分别为3.84 mg/ml和1 427μmol/min/mg;该酶降解大麦β-葡聚糖产生寡聚糖,最终产物主要为三糖和四糖,而降解地衣多糖终产物主要为三糖。[结论]从Bacillus subtilis LC-9发酵液中纯化获得了电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,性质研究表明该酶是专一性的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,有望用于啤酒、饲料等领域。     

喹乙醇对鲤的消化酶活性及白细胞吞噬功能的影响

对7组1龄鲤Cyprinus carpio L分别饲喂添加不同剂量的喹乙醇饲料(0、100、200、400、800、1600、3200mg／kg)。于试验的第3、6、9、12周末,从每组随机抽取4～5尾鱼采取血样,测定肝胰脏及肠道中蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性以及血液白细胞吞噬指数、吞噬率、头肾／体重等指标,评价喹乙醇对鲤消化能力和非特异性免疫功能的影响。结果表明,当喹乙醇的添加剂量为100～800mg／kg时,鲤蛋白酶活性被诱导;剂量为1600～3200mg／kg时,鲤蛋白酶活性则被抑制。淀粉酶活性在不同喹乙醇剂量下被明显诱导。试验前期,中低剂量的喹乙醇可诱导脂肪酶活性,而较高剂量却抑制其活性;试验后期,喹乙醇对鲤脂肪酶活性的影响不明显。喹乙醇对鲤血液白细胞吞噬指数、吞噬率及头肾体重比没有明显的影响。这说明喹乙醇对鲤消化酶活性的影响较大,而对非特异性免疫功能及免疫器官的发育则没有影响。     

果寡糖对草鱼非特异性免疫功能的影响

在基础饲料中添加不同剂量的果寡糖(每kg饵料含量分别为0、0.5、2和4g),连续投喂,分别于试验前1d、试验第7天、第14天、第21天、第28天、第42天、第56天检测草鱼血液白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性和补体C3、C4的含量。结果表明,试验组草鱼的各免疫指标均有不同程度的提高,且果寡糖添加剂量为2g/kg时各试验指标与对照组差异显著,同时优于其它两试验组,而且其攻毒死亡率最低。因此,从提高免疫力和经济角度考虑,建议果寡糖添加剂量为2g/kg为宜。